細(xì)胞生物學(xué)第三章ppt課件-展示頁
2025-05-21 12:51本頁面
【正文】 光波振幅變化（即振幅差），肉眼覺察為明暗變化； （ 3）光波有 相位（ 相位是指某一時(shí)刻， 光在其前進(jìn)路線上的位臵）。 對于光波波長變化，肉眼覺察為顏色變化 。如： 紫外光顯微鏡、電子顯微鏡 ? ， 增強(qiáng)反差， 來提高分辨能力。 由于物鏡鏡口率受 入射鏡口角 和 介質(zhì)折射率 的限制， 不可能再更進(jìn)一步提高了。 ? 高級研究顯微鏡的油鏡鏡口率為 ，則此鏡的 最大有效 放大倍數(shù)為 1400倍。 ?∵ 顯微鏡的分辨力有一定的極限， ∴ 其放大率受分辨力制約而不可能無限提高。 由于可見光中最短波長（紫光） （即 400nm）， ∴ 普通光鏡最大分辨力的理論極限應(yīng)為 。顯微鏡的分辨力可按下列公式來計(jì)算 : ? R= λ / N〃A （ R是分辨距離， ， λ是照明光波波長，N〃A 是顯微鏡物鏡的 鏡口率 — 光學(xué)性能指標(biāo)，每個(gè)物鏡的外殼上都標(biāo)有其鏡口率的數(shù)值）。第三章 細(xì)胞生物學(xué)研究方法 ? 一、細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察 ? 〈 一 〉 光學(xué)顯微鏡 ? ⒈普通光鏡的性能指標(biāo)：放大率（放大倍數(shù)），分辨力，清晰度、焦點(diǎn)深度，鏡象亮度 ? 分辨力 （分辨率、分辨本領(lǐng)）：能分辨兩個(gè)物點(diǎn)之間最短距離的能力，通常是以分辨距離來表示的，即分辨距離越小，則分辨力越高。 ? 人肉眼分辨力測試，是規(guī)定在明視距離為 25cm所分辨的最短間距來表示，正常人肉眼分辨力的極限值是 mm毫米。 ?∵ 分辨距離 R與鏡口率 N〃A 成反比關(guān)系 ? ∴ 若把最大鏡口率 （ 即油鏡鏡口率）代入公式，可見， 最小分辨距離 ≈ λ∕ ２ 。 請記 住 !!! 這個(gè)數(shù)值就是顯微 水平與亞（超）微水平的分界線。 普通光鏡放大率的 經(jīng)驗(yàn)界值 ：有效放大倍數(shù)極限 ═ 物鏡最大鏡口率 1000 ? 例： 普通顯微鏡的油鏡鏡口率為，故此臺顯微鏡的 最大有效 放大倍數(shù)為 1250倍。 ?如果放大倍數(shù)超過限度， 則視野中物象會變模糊 ，細(xì)微結(jié)構(gòu)反倒分辨不清 ，成為了 無效放大 。 所以科學(xué)家們從另外兩個(gè)途徑來改進(jìn)顯微鏡： ? “照明光源” ，來提高分辨力。 如：相差顯微鏡、微分干涉顯微鏡 ? ⒉ 相差顯微鏡 phase contrast microscope ? 原理：光波的三個(gè)光學(xué)特性：（ 1）光波有 波長 。（ 2）光波有 振幅 。對于光相位的變化（即相位差），肉眼是不能覺察的。 ?相差顯微鏡卻是運(yùn)用一些特殊裝臵，使通過被檢物體的光線分離成兩組光波，并人為地促使這兩組光波之間微弱的相位差加大，再經(jīng)過 光波干涉 作用，使看不見的相位差轉(zhuǎn)變成可見的振幅差，從而造成反差增強(qiáng)，便能夠清晰看到被檢物體及其內(nèi)部細(xì)微結(jié)構(gòu)了。 ?特點(diǎn)： 相差顯微鏡的觀察效果是被檢物體比其周圍背景略暗，而物體外圍顯現(xiàn)有一圈明亮的光環(huán)。 ?微分干涉顯微鏡 卻是另一種不需染色而可以直接觀察 活細(xì)胞 精細(xì)結(jié)構(gòu)及動態(tài)變化的技術(shù)設(shè)備，其分辨率比普通光鏡要提高一個(gè)數(shù)量級。熒光現(xiàn)象有兩種： — 細(xì)胞內(nèi)某些天然熒光物質(zhì)被紫外光照射所 激 發(fā) 的 熒光， 例，葉綠素 — 血紅色自發(fā)熒光； — 在細(xì)胞中加入某種不會使細(xì)胞化學(xué)組分變性的熒光染料（ 熒光素 ）， 與細(xì)胞內(nèi)某種特定成分結(jié)合在一起，經(jīng)紫外光照射激發(fā)出熒光。 ?結(jié)構(gòu)特點(diǎn)： 1 采用紫外光發(fā)生裝臵： 高壓汞燈 + 激發(fā)裝臵 + 濾光裝臵 ? 2 透鏡由石英玻璃制成，以便減少光通路上的紫外光損耗 ? 3 目鏡中要裝 壓紫濾片 ? 熒光顯微鏡目前在分子細(xì)胞生物學(xué)研究中應(yīng)用十分廣泛，以熒光素標(biāo)記各種探針進(jìn)行基因定位分析或?qū)δ承┨囟ǖ鞍踪|(zhì)進(jìn)行定性定位檢測分析，靈敏清晰。例如，綠色熒光蛋白 GFP 可用于進(jìn)行活體觀察。 激光掃描共焦顯微鏡 Laser scanning confocal microscope ?激光掃描共焦顯微鏡 的物鏡和聚光鏡是聚焦于同一焦點(diǎn)之上，故能排除焦平面以外熒光的干擾，因此其分辨率比普通熒光顯微鏡要提高 — ， 并還能 以“ 光學(xué)切片 ”方式去觀察較厚樣品之中的內(nèi)部精細(xì)結(jié)構(gòu)。只不過是以電子槍所發(fā)射的高速電子流代替了照明光源，又以三組電磁線圈所構(gòu)成的磁透鏡代替了玻璃制成的聚光鏡、物鏡和目鏡。 ? 特點(diǎn)： ? （ 1） 照明光源不同 ； ? （ 2） 放大倍數(shù)的調(diào)節(jié)方式不同 。也就是說，電流強(qiáng)度的變化引起了磁場強(qiáng)度的改變，而磁場強(qiáng)度的變化又使電子射線的折射程度發(fā)生改變，因而放大倍數(shù)即隨之出現(xiàn)變化。 電子流的發(fā)射速度及波長皆取決于電壓的高低
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1