細(xì)胞生物學(xué)研ppt課件-展示頁(yè)
2025-01-24 07:41本頁(yè)面
【正文】 。 ? 對(duì)任何顯微鏡來(lái)說(shuō)，最重要的性能參數(shù)是分辨率，而不是放大倍數(shù)。這個(gè)距離越小分辨本領(lǐng)越高。 ? 顯微鏡分辨率的大小取決于 光源波長(zhǎng) λ，物鏡鏡口角 α（標(biāo)本在光軸的一點(diǎn)對(duì)物鏡鏡口的張角）和介質(zhì)折射率 N。 ，空氣中 N＝ 1，最短的可見(jiàn)光波長(zhǎng) λ＝ 450 nm，此時(shí)分辨率 D＝ 292 nm，約 。 ?由于 ， 要提高分辨力只有采用縮短波長(zhǎng)的途徑。 ?樣品在觀察前一般要經(jīng)過(guò)染色，不同的染料對(duì)某種細(xì)胞組分有特異的吸附，如伊紅和美藍(lán)能特異性地與不同蛋白質(zhì)結(jié)合，而品紅則能特異性地顯示出 DNA的所在部位。 3/4/12 細(xì)胞生物學(xué) 研究方法 8 相差顯微鏡技術(shù)和微分干涉顯微鏡 3/4/12 細(xì)胞生物學(xué) 研究方法 （四）相差顯微鏡技術(shù) 光線通過(guò)不同密度的物質(zhì)時(shí)，其滯留程度也不同。 相差顯微鏡（ phase－ contrast microscope）可將這種滯留時(shí)間之差，即光程差或相位差，轉(zhuǎn)換成振幅差。 在光學(xué)顯微鏡的發(fā)展過(guò)程中，相差鏡檢術(shù)的發(fā)明成功，是近代顯微鏡技術(shù)中的重要成就。 相差顯微鏡利用被檢物體的光程之差進(jìn)行鏡檢，也就是有效地利用光的干涉現(xiàn)象，將人眼不可分辨的相位差變?yōu)榭煞直娴恼穹?，即使是無(wú)色透明的物質(zhì)也可成為清晰可見(jiàn)。 微分干涉顯微鏡（ differentialinterference microscope）可增加樣品反差并且具有很強(qiáng)的立體感。將微分干涉顯微鏡接上錄像機(jī)，可以觀察活細(xì)胞中的顆粒及細(xì)胞器的運(yùn)動(dòng)。因使用紫外線，波長(zhǎng)大大縮短，固可提高分辨力。 ? 例如將標(biāo)記熒光素的純化肌動(dòng)蛋白顯微注射人培養(yǎng)細(xì)胞中，可以看到肌動(dòng)蛋白分子裝配成肌動(dòng)蛋自纖維。每種物質(zhì)被激發(fā)光照射后，在極短時(shí)間內(nèi)發(fā)射出較照射波長(zhǎng)更長(zhǎng)的可見(jiàn)熒光。它的作用有二：一是吸收和阻擋激發(fā)光進(jìn)入目鏡、以免于擾熒光和損傷眼睛，二是選擇并讓特異的熒光透過(guò)，表現(xiàn)出專一的熒光色彩。 12 （三）激光共焦點(diǎn)掃描顯微鏡技術(shù) ? 普通熒光顯微鏡下，許多來(lái)自焦平面以外的熒光使觀察到的圖像反差和分辨率降低： ? 激光共焦點(diǎn)掃描顯微鏡（ 1aser scanning confocal microscopy）大大減少了這種焦平面以外的光，它在某一瞬間只用很小一部分光照明，這一束光通過(guò)檢測(cè)器前的一個(gè)小孔或裂縫后成像，保證只有來(lái)自該焦平面的光成像，而來(lái)自焦平面以外的散射光則被小孔或裂縫擋住。 3/4/12 細(xì)胞生物學(xué) 研究方法 13 ? 激光共焦點(diǎn)掃描顯微鏡可自動(dòng)改變觀察的焦平面，而且縱向分辨率（ axial resolution）得到改善，所以可以通過(guò)“光學(xué)切片”觀察較厚樣品的內(nèi)部結(jié)構(gòu)。 3/4/12 細(xì)胞生物學(xué) 研究方法 17 二、電子顯微鏡技術(shù) ?（－）電子顯微鏡的基本知識(shí) ? 電子顯微鏡在基本原理上與光學(xué)顯微鏡完全不同，構(gòu)造也要比光學(xué)顯微鏡復(fù)雜得多，但其光路圖卻十分相近 ? 1．電子顯微鏡與光學(xué)顯微鏡的基本區(qū)別 ? 使用了波長(zhǎng)比可見(jiàn)光短得多的電子束作為光源，波長(zhǎng)一般小于 nm。它們的基本區(qū)別見(jiàn)表。 ? 電子顯微鏡的分辨率可達(dá) nm,其放大倍數(shù)為 106倍。 20 ?3． 透射電子顯微鏡 的基本構(gòu)造 ? ① 電子束照明系統(tǒng)：包括電子槍、聚光鏡。它們是若干精密加工的中空?qǐng)A柱體，里面裝置線圈，通過(guò)改變線圈的電流大小，調(diào)節(jié)圓柱體空間的磁場(chǎng)強(qiáng)度。 3/4/12 細(xì)胞生物學(xué) 研究方法 21 （二）主要電鏡制樣技術(shù)介紹 ? 1．超薄切片技術(shù) ? 由于電子束的穿透能力有限，為獲得較高分辨率，切片厚度一般僅為 40～ 50nm，即一個(gè)直徑為 20 um的細(xì)胞可切成幾百片，故稱超薄切片。 ? 為此，樣品往往需要包埋在特殊的介質(zhì)中。 3/4/12 細(xì)胞生物學(xué) 研究方法 22 ? （ 1）固定 ：不僅要求保持樣品的形態(tài)結(jié)構(gòu)不發(fā)生改變，有時(shí)甚至要求在超微和分子水平上使細(xì)胞內(nèi)部的結(jié)構(gòu)
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