蛋白質(zhì)本ppt課件-展示頁
2025-05-16 13:48本頁面
【正文】 β 折疊、 β 卷曲及無規(guī)卷曲等二級結(jié)構(gòu)的多肽鏈在三維空間的排列方式。 4. 蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)：具有三級結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)亞單位通過非共價鍵締合的結(jié)果，穩(wěn)定四級結(jié)構(gòu)的力或鍵與穩(wěn)定三級結(jié)構(gòu)的那些鍵相同。 ? A氨基酸的 α 羧基和 B氨基酸的 α 氨基縮合的二肽為 AB。 ? 氨基酸的順序是從 N端的氨基酸殘基開始，以 C端氨基酸殘基為終點(diǎn) 的排列順序。 限制了肽鍵的 自由旋轉(zhuǎn) 形成多肽主鏈 的酰氨平面 CN長度為 nm，介于 CN 和 C=N之間 肽鍵具有永久偶極，反式構(gòu)型比順式穩(wěn)定， XPro CN C=O 肽鍵 CON C N+OC NCOHC? 肽鍵的特點(diǎn)是氮原子上的孤對電子與羰基具有明顯的共軛作用 。 ? 肽鍵中的 CN鍵具有部分雙鍵性質(zhì) ， 不能自由旋轉(zhuǎn) 。 蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的作用力 * ? 除肽鍵外還有 SS鍵 ,是連接肽鍵內(nèi)與肽鏈間的主要橋鍵 ? 二硫鍵 : 起穩(wěn)定肽鏈空間結(jié)構(gòu)的作用 ,與生物活性有關(guān) ? 胰島素 ? 胰島素 ?由 51個氨基酸組成 ?A鏈 +B鏈 ?A鏈：由 21個氨基酸組成 ?B鏈：由 30個氨基酸組成 ?A鏈和 B鏈由 2對 SS鍵連起來， A鏈內(nèi)部有 1對 SS鍵 理化性質(zhì) ? 1. 短肽的晶體為離子晶格，在水溶液中以偶極離子存在； ? 2. 肽的酸堿性質(zhì) 游離末端氨基、羧基及側(cè)鏈R基團(tuán)上的可解離功能團(tuán)； pHpKa [HA][A] pHpKa [HA][A] ? 3. 顏色反應(yīng)：茚三酮、雙縮脲 ? 4. 旋光度：短肽的旋光度為組成該肽的所有氨基酸的旋光度之和 谷胱甘肽（ GSH） ? 三肽：由谷氨酸、半胱氨酸、甘氨酸組成；分子中有一 γ 肽鍵，由谷氨酸的γ 羧基和 α 氨基縮合而成； ? GSH含一個巰基，易氧化為 GSSG。 蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的測定 * 測序策略： 多肽鏈數(shù)目的確定 氨基酸組成分析 重建多肽鏈的一級結(jié)構(gòu) 裂解多肽鏈成小片段 鑒定 N末端和 C末端 斷開 SS鍵 拆分多肽鏈 測定各肽段的氨基酸序列 確定 SS位置 1. N端和 C端氨基酸殘基分析 ? N端 1. 二硝基氟苯法（ DNFB or FDNB） 2. 丹磺酰氯（ DNS） 3. 苯異硫氰酸酯法（ PITC） 4. 氨肽酶法： 亮氨酸氨肽酶 ? C端 1. 肼解法 2. 還原法： 硼氫化鋰 3. 羧肽酶法： A、 B、 C、Y 2. 二硫鍵的斷裂及氨基酸組成分析 ? 二硫鍵斷裂 ?過甲酸氧化法 ?巰基化合物還原法 ? 氨基酸分析 ?酸水解 ?堿水解 3. 裂解多肽鏈及肽段分離純化 ? 酶裂解法 ?胰蛋白酶 ?糜蛋白酶 ?噬熱菌蛋白酶 ?胃蛋白酶 ?木瓜蛋白酶 ?葡萄球菌蛋白酶和羧菌酶 ? 化學(xué)裂解法（獲得肽段較大，適于自動序列儀中測序） ?溴化氫斷裂 ?羥胺斷裂 ? 肽段的分離純化 4. 氨基酸序列分析 ? 肽段氨基酸序列測定 ?Edman化學(xué)降解法 ?酶降解法 ?質(zhì)譜法 ?核苷酸序列推定法 ? 肽段在多肽鏈中的次序 ?借助重疊肽在原多肽鏈中的正確位置，拼湊出整個肽鏈的氨基酸序列 ? 用胃蛋白酶水解原來的含二硫鍵的蛋白質(zhì) ? 對角線電泳 ? Ex： 一個肽與 FDNB反應(yīng)后，用 解后得到 DNPSer和 6種其它氨基酸，用胰蛋白酶可將此肽切為 3個小肽： SerMetLys、 Thr Arg ,AlaGlu；后用酶 2將之切
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1