【正文】 糖 二、紙色譜法的實(shí)驗(yàn)條件 ? 色譜紙的選擇 ? 對(duì) Rf值相差很小的化合物，宜采用慢速濾紙 ? 對(duì) Rf值相差較大的化合物，則可用快速濾紙 ? 固定相 ? 水 或甲酰胺、二甲基甲酰胺、丙二醇或緩沖溶液。 三、薄層色譜操作方法 ?制板 均勻 ?點(diǎn)樣 集中 ?展開 (多種方式 ) 預(yù)飽和 ?顯色 ? 自學(xué)，實(shí)驗(yàn)課講 四、定性和定量分析 ? 定性分析 ? 比較 Rf值或 Rr值 、 斑點(diǎn)顏色或熒光 ? 常采用已知標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)照（同一板上展開） ? 多種展開系統(tǒng)的 Rf值與對(duì)照品一致 。 ? 展開劑 選擇原則： 根據(jù)被分離物質(zhì)的極性 Stahl簡(jiǎn)圖：極性物質(zhì) — 活度低（活性級(jí)大）的吸附劑 極性展開劑 ? 展開劑 ? 混合溶劑 先用單一溶劑展開， 若 Rf值太小，則加入一定量極性強(qiáng)的溶劑，如乙醇、丙酮等， 如果 Rf值太大，則加入適量極性弱的溶劑 (如環(huán)己烷、石油醚等 )，以降低極性。 活度也與含水量有關(guān)。 ? 常用硅膠： ?硅膠 H，不含黏合劑 ?硅膠 G，含煅石膏 ?硅膠 GF254，含煅石膏和一種無機(jī)熒光劑，即錳激活的硅酸鋅，在 254nm紫外光下呈強(qiáng)烈黃綠色熒光背景。 ? 活化：加熱至 100℃ 左右，除去吸附水提高 活度。 組分與硅醇基形成氫鍵（被吸附）的能力不同而分離。 二、吸附薄層色譜的吸附劑和展開劑 ?吸附劑 ? 硅膠 ： 多孔性微粒，表面帶有硅醇基，呈弱酸性。 ? 反相色譜 ：烷基化學(xué)鍵合相為固定相，水－有機(jī)溶劑為流動(dòng)相。 薄層色譜法的主要類型和原理 ?分配薄層色譜法 ?原理：多次分配的過程，分配系數(shù)（溶解度）不等實(shí)現(xiàn)分離 ?分類： 正相色譜、反相色譜 薄層色譜法的主要類型和原理 ? 分配薄層色譜法 ? 正相色譜 ：水為固定相（硅膠載體），有機(jī)溶劑為流動(dòng)相。 吸附系數(shù)不等實(shí)現(xiàn)分離。 ? 靈敏度較高。 ? 儀器簡(jiǎn)單，操作方便。 ? 試樣預(yù)處理簡(jiǎn)單，對(duì)試樣限制少。 ? 重現(xiàn)性和可比性均比 Rf值好，能消除系統(tǒng)誤差（ 參考物質(zhì)與組分在完全相同的條件下展開） 相平衡參數(shù) ? 分配系數(shù) K= Cs/Cm ? 容量因子 k= CsVs/CmVm ? K、 k與 Rf值的關(guān)系： kR??11fms /11VKV??ff1RRk??相平衡參數(shù) ? K、 k與 Rf值關(guān)系推導(dǎo)： (與定距展開比較 ) Rf =L/L0=u/u0=R’= R’為保留比 k?11第二節(jié) 薄層色譜法 (thin layer chromatography；TLC) ? 固定相（吸附劑或載體）涂布成一均勻薄層，點(diǎn)樣，（密閉的容器中）展開，斑點(diǎn)顯色，（與對(duì)照物質(zhì)）比較進(jìn)行定性定量。（速度之比？） Rf =L/L0 （定時(shí)展開） L為原點(diǎn)（ origin）至斑點(diǎn)中心的距離， L0為原點(diǎn)至溶劑前沿（ solvent front）的距離 ? 與組分及色譜條件有關(guān) 定性參數(shù) 2 相對(duì)比移值 (relative Rf； Rr) Rr = Rf (i)/Rf (s)=L(i)/L(s) ? 與組分、色譜條件、參考物質(zhì)有關(guān)。第十八章 平面色譜法 (plane chromatography) 在平面上進(jìn)行分離的一種色譜方法，主要包括薄層色譜法和紙色譜法。 ? 紙色譜法 ? 薄層色譜法 第一節(jié) 平面色譜法的分類和原理 ? 分類 薄層色譜法： 吸附薄層色譜法 分配薄層色譜法 分子排阻薄層色譜法 紙色譜法 :分配 薄層電泳法 平面色譜法參數(shù) ? 定性參數(shù) ? 相平衡參數(shù) ? 面效參數(shù) ? 分離參數(shù) 定性參數(shù) 1 ? 比移值 (Rf值 ) 溶質(zhì)移動(dòng)距離與流動(dòng)相移動(dòng)距離之比。 ? Rr值可以大于 1，也可以小于 1。 特點(diǎn)： ? 快，需十至幾十分鐘，同時(shí)展開多個(gè)試樣。 ? 載樣量比較大，適用于制備。 ? 分離能力較強(qiáng)。 一、薄層色譜法的主要類型和原理 ? 吸附薄層色譜法 原理：組分在薄層板上吸附、解吸附、 再吸附、再解吸附的過程。 一般極性強(qiáng)的組分 K大， Rf值??；極性弱的組分 K小， Rf值大。 極性強(qiáng)的組分 K大， Rf值小。 極性強(qiáng)的組分 K小， Rf值大。 原理：硅醇基 (吸附中心 )與極性基團(tuán)形成氫鍵（吸附性）。 應(yīng)用：酸性和中性物質(zhì)的分離，如有機(jī)酸酚類、醛類等 ? 硅膠 ? 活度與含水量的關(guān)系：含水量高，活性級(jí)高，活度低。（注意溫度不可過高） ? 分離效率：與其粒度、孔徑及表面積等有關(guān)。 ? 吸附劑 ? 氧化鋁 堿性氧化鋁 ()—— 分離中性或堿性化合 物，如生物堿、脂溶性維生素等； 中性氧化鋁 ()—— 分離酸性及對(duì)堿不穩(wěn) 定的化合物； 酸性氧化鋁 ()—— 酸性化合物的分離。 ?展開劑 (流動(dòng)相 ) 同吸附柱色譜 極性強(qiáng)的溶劑洗脫能力強(qiáng) 常用溶劑的極性強(qiáng)弱順序： 水＞酸＞吡啶＞甲醇＞乙醇＞正丙醇＞丙酮＞乙酸乙酯＞乙醚＞氯仿＞二氯甲烷＞甲苯＞苯＞三氯乙烷＞四氯化碳 環(huán)己烷 石油醚。 可加入一定比例的酸或堿 ,使斑點(diǎn)集中。 ? 定量分析 ? 洗脫法 ? 直接定量法 （ 如雜質(zhì)限度檢查方法 ） 第三節(jié) 紙色譜法 一、紙色譜法的分離原理 ? 紙纖維為載體，吸著在其上的水為固定相 ? 屬于 正相分配色譜 ? 依據(jù)分配系數(shù)的不同而達(dá)到分離 ? 極性或親水性強(qiáng)的組分， K大， Rf值小，極性弱或親脂性強(qiáng)的組分， K小， Rf值大。（酸、堿） 紙色譜法的實(shí)驗(yàn)條件 ? 展開劑的選擇 增加展開劑中極性溶劑的比例量，可以增大 Rf值；增加展開劑中非極性溶劑的比例量，可以減少 Rf值。 第一節(jié) 氣相色譜法的分類 和一般流程 一、分類 ? 按固定相的聚集狀態(tài) : GSC、 GLC ? 按分離原理： GSC屬于吸附色譜 ， GLC屬于 分配色譜 。 三、氣相色譜法的一般流程 載氣系統(tǒng)（ carrier gas system） 色譜柱系統(tǒng) （ column system） 檢測(cè)系統(tǒng) （ detection system） 記錄系統(tǒng) （ data system） 進(jìn)樣系統(tǒng) （ sample injection system） 第二節(jié) 氣相色譜固定相和流動(dòng)相 一、氣液色譜固定相 ? 對(duì)固定液的要求 在操作溫度下蒸氣壓要低； 穩(wěn)定性好； 對(duì)被分離組分的選擇性要高； 對(duì)試樣中各組分有足夠的溶解能力。 ? 硅氧烷類：甲基、苯基、氰基、氟硅氧烷等，最通用 ? 聚醇：如聚乙二醇 PEG?20M ，氫鍵型 ? 聚酯：丁二酸二乙二醇聚酯 ( PDEGS或 DEGS) ?極性分類 ? 用相對(duì)極性 P 來表示 ）（21X1x 1100 qqqqP????q1(lgr1) : 苯與環(huán)己烷在 β,β39。 q2 (lgr2) : 角鯊?fù)橹系南鄬?duì)保留值的對(duì)數(shù)。 ? 相對(duì)極性 Px分類： β,β 39。 氧二丙腈 ?麥?zhǔn)铣?shù)分類法 : 以物質(zhì) m在待測(cè)固定液和非極性固定液 (通常是沙魚烷 ) 中的 保留指數(shù) 之差值作為該固定液相對(duì)極性強(qiáng)弱的度量 保留指數(shù) (I) ： ]lglglglgn+1 0 0 [ Z=39。n)R ( z39。R ( x )xttttI???用保留時(shí)間緊鄰待測(cè)組分的兩個(gè)正構(gòu)烷烴來標(biāo)定組分的相對(duì)保留值，又稱 Kovats指數(shù) Ix為待測(cè)組分的保留指數(shù)， z與 z+n為正構(gòu)烷烴對(duì)的碳原子數(shù)。