親和色譜ppt課件-展示頁
2025-05-14 22:19本頁面
【正文】 來的一種分離的色譜方法，也叫做生物親和或生物特異性親和色譜。 ? 特異性洗脫劑含有與親和配基或目標(biāo)產(chǎn)物具有親和結(jié)合作用的小分子化合物，通過與親和配基或目標(biāo)產(chǎn)物的 競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合 ，洗脫目標(biāo)產(chǎn)物。 抑制氫鍵形成的物質(zhì)：脲和鹽酸胍的存在可減弱親和作用 溫度：提高溫度，靜電作用、氫鍵、配位鍵減弱；但是，疏水性相互作用增強(qiáng) 液體離子： SCN、 I、 CIO4的存在，疏水性相互作用減弱 螯合劑：影響配位鍵，使親和作用消失 影響親和作用的因素 ? 利用生物分子之間的專一性識(shí)別或特定的相互作用進(jìn)行分離的技術(shù)為 親和分離技術(shù) ? 親和配基 是對(duì)生物分子具有專一性識(shí)別或特定的相互作用的物質(zhì) 7 ? 找與底物專一可逆結(jié)合的配基； ? 將配基通過共價(jià)鍵偶聯(lián)到基質(zhì)； ? 配基與底物吸附； ? 洗脫目標(biāo)物。 常見親合作用體系 特異性 親和體系 高特異性 抗原 單克隆抗體 荷爾蒙－受體蛋白 核酸－互補(bǔ)堿基鏈段、核酸結(jié)合蛋白 酶－底物、產(chǎn)物、抑制劑 群特異性 免疫球蛋白－ A蛋白、 G蛋白 酶－輔酶 凝集素－糖、糖蛋白、細(xì)胞、細(xì)胞表面受體 酶、蛋白質(zhì) 肝素 酶、蛋白質(zhì) 活性色素（染料） 酶、蛋白質(zhì) 過渡金屬離子（銅、鋅等） 酶、蛋白質(zhì)－氨基酸（組氨酸等） 離子強(qiáng)度：一般來說，提高離子強(qiáng)度，親和作用減弱或完成破壞。 ? 靜電作用、氫鍵等多種作用力對(duì)親和作用具有影響。第十章 親和色譜 在眾多親和分離技術(shù)中，親和色譜是應(yīng)用最多，分離效果最好的技術(shù)。 概述 ? 生物分子能夠區(qū)分結(jié)構(gòu)和性質(zhì)非常接近的其他分子，選擇性地與其中某一種分子相結(jié)合，生物分子間的這種 特異性相互作用 稱為親和作用。 ? 生物分子間的 親和識(shí)別 包括抗體 抗原、酶 底物、激素 受體等親和作用。 PH：在適當(dāng)?shù)?PH下，親和結(jié)合作用較高，在其它 PH下，親和作用減弱或完成破壞。 8 親和純化技術(shù) ? 親和層析 (Affinity chromatography) ? 親和過濾（膜分離） ? 親和分配（雙水相萃?。? ? 親和反膠團(tuán)萃取（反膠團(tuán)萃?。? ? 親和沉淀（沉淀） ? 親和電泳（電泳） 配基 ? 生物特異性配基 ? 擬生物親和配基 ? 親和配基必須具備的條件： 專一性識(shí)別或特異性作用必須是可逆的 結(jié)合常數(shù)要適當(dāng) 穩(wěn)定性好，可進(jìn)行化學(xué)改性 ? 專一性和特異性 決定著分離純化的產(chǎn)品純度 ? 相互作用的強(qiáng)弱 決定著吸附和解吸的難易程度 親和配基的分類 ? 單專一性的小分子配基 ? 基團(tuán)專一性的小分子親和配基 ? 專一性的大分子親和配基 ? 免疫親和配基 ? 基團(tuán)專一性的大分子親和配基 親和配基的選擇 ? 組合化學(xué)肽庫選擇親和配基 目標(biāo)肽 → 反義肽 → 組合合成 → 親和篩選 → 優(yōu)選序列 ? 噬菌體展示技術(shù) 目標(biāo)蛋白 → 可結(jié)合噬菌體 → 擴(kuò)增 → 多輪篩選單克隆群體 →氨基酸序列 ? SELEX技術(shù) 隨機(jī)序列 → PCR擴(kuò)增 → 特異性結(jié)合 → 重復(fù)篩選 親和洗脫 ? 目標(biāo)產(chǎn)物的洗脫方法有特異性洗脫和非特異性洗脫。 ? 非特異性洗脫通過調(diào)節(jié)洗脫液的 pH、離子強(qiáng)度、離子種類或溫度等降低目標(biāo)產(chǎn)物的親和吸附作用。 ? 是親和分離技術(shù)中最具優(yōu)勢(shì)的方法 含配體溶液 收集目的蛋白 洗下未結(jié)合的蛋白 混合蛋白樣品 平衡液 帶有配體的樹脂珠（或膠粒） 親和層析的基本特點(diǎn) 純化過程簡(jiǎn)單、迅速，且分離效率高 特別適用于分離純化一些含量低、穩(wěn)定性差的生物大分子 純化倍數(shù)大，產(chǎn)物純度高 必須針對(duì)某一分離對(duì)象制備專一的配基及尋求穩(wěn)定的層析條件 價(jià)格相對(duì)較昂貴； 在洗脫中，交聯(lián)在層析介質(zhì)上的配基可能脫落并進(jìn)入產(chǎn)品中，從而造成不良影響，如抗體
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