儀器分析ppt課件(2)-展示頁
2025-05-14 23:39本頁面
【正文】 * Ag * AgAb + * Ag * Ag和 Ab量恒定， Ag的量為一個系列濃度。 直接標記法（鉻氨酸殘基和組氨殘基） 間接標記法（聯(lián)接標記，引入添加基團） 標記物的純化：采用分離的方法 — 離子交換層析法。 3. 標記物的制備及鑒定 標記物：是指通過直接或間接的化學反應將放射性核素連接到被標記分子上鎖形成的化合物。 非競爭性結(jié)合反應：免疫放射分析 (IRMA)— 用放射性核素標記的過量抗體非競爭結(jié)合抗原，經(jīng)固相分離，測定待測樣品中抗原量的分析方法。第二節(jié) 免疫分析方法及其應用 一 放射免疫分析法 利用放射性核素可探測的靈敏性，精確性與抗原抗體反應的特異性相結(jié)合而創(chuàng)建的一類免疫測定技術(shù)。 1. 基本類型和原理 競爭性結(jié)合反應：放射免疫分析 (RIA） 以放射核素標記抗原與反應系統(tǒng)中未標記的抗原競爭特異性抗體的基本原理來測定待檢樣品中抗原量的分析方法。 125I、 131I、 3H、 14C。 要求：高比度、高純度、完整的免疫活性、不能破壞抗原決定簇。 標記物的鑒定：放射化學純度、免疫活性、比放射性（計算法和自身置換法）。 競爭結(jié)合 抗原抗體復合物與標準抗原的關(guān)系 ? * AgAb復合物的量取決于 Ag的量 ? Ag量越大， * AgAb量越少 ? Ag量越小， * AgAb量越大 ? 測量 * AgAb量或測量多余 * Ag量可推算出 Ag量 二 . 標準曲線的建立 ? 以 * AgAb的放射性強度與 * Ag的放射性強度的比值或以 * AgAb的放射性強度與總放射性強度的比值作縱坐標，標準抗原濃度為橫坐標做曲線，得到一條標準曲線。 二、測量步驟 ? 恒量的 * Ag、 Ab加入反應管中 ? 加入待測樣品、或標準品（已知濃度） ? 37℃ 或 4 ℃ 溫育 ? 加入分離劑分離結(jié)合及游離部分 ? 測定以總放射性為分母，測定 * AgAb 為分子，計算結(jié)合 %，以結(jié)合率為縱坐標，濃度為坐標，制作標準曲線 ? 待測樣品的結(jié)合率從標準曲線上求出濃度 0 2 4 8 16 32 64 128 80 70 60 50 40 30 20 10 結(jié) 合% 濃 度 二 . 免疫放射分析方法 ? 單位點 IRMA：先將過量的標記抗體與待測抗原進行反應，形成抗原抗體復合物，反應平衡后，用固相抗原結(jié)合反應液中剩余的游離標記抗體，然后進行分離，測定抗原抗
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