蛋白質(zhì)和多肽的氨基酸序列測定-展示頁
2025-05-11 13:42本頁面
【正文】 Hunkpillar等人改進(jìn)了自動化蛋白質(zhì)序列儀中的儀器結(jié)構(gòu)，它用彈筒型 玻璃反應(yīng)室 (內(nèi)部體積約 )代替了液相序列儀中的旋轉(zhuǎn)玻璃杯，用 polybrene固定樣品， Edamn降解反應(yīng)中有的試劑如三甲胺以氣體方式 輸送，其他試劑以流動或液相脈沖方式輸送。 第二節(jié) N端蛋白質(zhì)序列儀 三、氣相序列儀 自動化蛋白質(zhì)序列儀剛問世時(shí)，需要樣品量為 1～ 2mg。近年來由于高效液相色 譜技術(shù)具有分析速度快、靈敏度高、定性定量準(zhǔn)確 等諸多優(yōu)點(diǎn)，并且儀器自身結(jié)構(gòu)也日臻完善，被廣 泛應(yīng)用于 PTH— 氨基酸的鑒定。 三、轉(zhuǎn) 化 ATZ— 氨基酸不穩(wěn)定，在三氟乙酸水溶液 (25％ )中可轉(zhuǎn)化 成穩(wěn)定的 PTH— 氨基酸。 二、裂 解 在無水條件下酸裂解，僅僅切下反應(yīng)的那個殘基。 本章將就蛋白質(zhì)和多肽的 N端、 C端氨基酸序列分析 的原理和方法、進(jìn)行序列分析前蛋白質(zhì)和多肽樣品的準(zhǔn)備作一介紹。由于化學(xué)法較之酶法具有 裂解率高、易于自動化、耗費(fèi)少等諸多優(yōu)點(diǎn)，被蛋白質(zhì)化學(xué)實(shí)驗(yàn)室普遍 采用，可以從蛋白質(zhì)和多肽的 N端進(jìn)行裂解，也可以從 C端進(jìn)行分析。 目前，進(jìn)行蛋白質(zhì)序列測定有兩個關(guān)鍵步驟，即： ①氨基酸殘基一個一個依次從蛋白質(zhì)和多肽的末端切割下來； ②正確鑒定每次切割下來的氨基酸殘基。因此，測定蛋白質(zhì)的氨基酸 序列是進(jìn)行蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)功能研究中不可缺少的部分。第五課蛋白質(zhì)和多肽的氨基酸序列測定 蛋白質(zhì)和多肽是由 20種氨基酸按照一定的順序通過肽鍵連接成一長 鏈，然后通過鏈內(nèi)、鏈間的離子鍵、疏水作用等多種作用力進(jìn)行折疊、 卷曲形成一定的構(gòu)象并發(fā)揮其獨(dú)特作用。氨基酸的排列順序即蛋白質(zhì)的 一級結(jié)構(gòu)決定了蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)及功能。另外，蛋白質(zhì)一級 結(jié)構(gòu)的信息也有助于對其基因結(jié)構(gòu)的研究。 其中第一步可采用化學(xué)法或酶法進(jìn)行裂解。 第二步通常是在氨基酸殘基上衍生了一個生色基團(tuán)，通過高效液相色 譜進(jìn)行分離分析。 第一節(jié) N端分析原理 一、耦 聯(lián) 蛋白質(zhì)和多肽的自由 α— 氨基經(jīng)與異硫氰酸苯酯 (
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1