微生物學(xué)實驗講義-展示頁
2025-04-13 23:23本頁面
【正文】 多余菌液用吸水紙吸干。4．計數(shù)完畢，將計數(shù)板在水龍頭下沖洗干凈，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用電吹風(fēng)吹干。2．加菌懸液樣品：將清潔干燥的血球計數(shù)板蓋上蓋玻片，再用無菌的毛細(xì)滴管將搖勻的菌懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自動進入計數(shù)室，用吸水紙吸去多余水液。 (1) 1625格的血球計數(shù)板計算公式：1 mL酵母細(xì)胞數(shù)=A/416104稀釋倍數(shù) (2) 2516格的血球計數(shù)板計算公式：1mL 酵母細(xì)胞數(shù)= A/525104稀釋倍數(shù) 三、實驗器材 啤酒酵母菌懸液，顯微鏡，血球計數(shù)板，載玻片，蓋玻片，接種環(huán)，呂氏美藍染液。計數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格，一種是一個大方格分成16個中方格，每個中方格又分成25個小格(即1625)，另一種是一個大方格分成25個中方格，每個中方格又分為16個小方格(即2516)，但無論是哪一種規(guī)格的計數(shù)板，每一個大方格中的小方格都是400個，每一個大方格邊長為1 mm，則每一個大方格的面積為1 mm2，蓋上蓋玻片后， mm3。二、實驗原理用血球計數(shù)板在顯微鏡下直接計數(shù)是一種常用的微生物計數(shù)方法。3．學(xué)會區(qū)別死活菌的方法。 ｜七、思考題1．為什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時，必須用鏡臺測微尺重新對目鏡測微尺進行校正？2．在不改變目鏡和目鏡測微尺，而改用不同放大倍數(shù)的物鏡來測定同一細(xì)菌的大小，測定結(jié)果是否相同？為什么？實驗五 酵母菌個體、群體形態(tài)觀察，血球板顯微鏡計數(shù)技術(shù)一、目的要求1．學(xué)會使用顯微鏡觀察酵母菌形態(tài)的方法。六、實驗結(jié)果 1．報告測微計算過程與結(jié)果。細(xì)菌的運動有一定的前進方向，并可轉(zhuǎn)彎，極生單鞭毛菌類多為直線運動，周生鞭毛菌類多作波浪式運動。觀察時光線要調(diào)得暗一些。4．小心將凹玻片翻轉(zhuǎn)過來，使菌滴仍懸浮在蓋玻片下和凹窩中心。2．在蓋玻片中央滴一小滴菌液，或用接種環(huán)取12環(huán)菌液置于中央。(3) 酵母細(xì)胞大小的測定 目鏡測微尺校正完畢后，取下鏡臺測微尺，換上酵母水浸片，在不同倍率下測量菌體的長度和寬度，記錄測定值，并計算出酵母的長、寬值。利用移動器移動物鏡測微尺，使兩尺的第一條刻度線相重合，再向右尋找另外兩條重合的刻度線，分別數(shù)出兩重合線之間物鏡測微尺和目鏡測微尺所占的格數(shù)，由下列公式算出目鏡測微尺每格所代表的長度。四、操作步驟(—) 顯微測微技術(shù)1．裝目鏡測微尺： 取出接目鏡，把目鏡上的透鏡旋下，將目鏡測微尺刻度朝下放在目鏡鏡筒內(nèi)的隔板上，然后旋上目鏡透鏡，再將目鏡插人鏡筒內(nèi)。 三、實驗器材1．活材料：培養(yǎng)1216h的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、啤酒酵母2．試劑：香柏油、二甲苯、凡士林等。通常使用壓滴法或懸滴法觀察細(xì)菌的運動性。 mm的圓形玻片，其中央有精確的等分刻度(有50格和100格兩種)測量時，需將其放人接目鏡中的隔板上，用以測量經(jīng)顯微鏡放大后的細(xì)胞物象。其大小的測量需在顯微鏡下用目鏡測微尺來進行，但由于測量的是放大后的圖像，故目鏡測微尺在不同放大倍率下每格實際代表的長度也隨之變化，因此，需用物鏡測微尺來校正在不同放大倍率下目鏡測微尺每格所代表的實際長度。實驗四 顯微測微技術(shù)及細(xì)菌運動性觀察一、目的要求1．了解測微尺的構(gòu)造和使用，學(xué)會測量微生物細(xì)胞大小的方法。2．學(xué)習(xí)懸滴法觀察細(xì)菌運動性技術(shù)二、實驗原理(一) 顯微測微技術(shù)微生物細(xì)胞的大小是微生物基本的形態(tài)特征，也是分類鑒定的依據(jù)之一。 物鏡測微尺是中央刻有精確刻度的載玻片，一般是將1 mm等分為100格， mm，即10 pm，它不直接用于測量細(xì)胞大小，而是用于校正目鏡測微尺的每格的相對長度。(二) 細(xì)菌運動性在顯微鏡下觀察細(xì)菌的運動性，也可以初步判斷細(xì)菌是否有鞭毛。觀察時，要適當(dāng)減弱光線，增加反差，如果光線很強，細(xì)菌和周圍的液體就難以辨別。3．器材：目鏡測微尺，物鏡測微尺、凹載玻片、蓋玻片、鑷子、接種環(huán)、滴管、擦鏡紙、顯微鏡。2．校正目鏡測微尺 (1) 將物鏡測微尺刻度面朝上放在顯微鏡載物臺上 (2) 先用低倍鏡觀察，將鏡臺測微尺有刻度的部分移至視野中央，調(diào)節(jié)焦距，當(dāng)清晰地看到鏡臺測微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動目鏡使目鏡測微尺刻度與物鏡測微尺的刻度平行。目鏡測微尺每格長度＝( 兩測微尺重合線間鏡臺測微尺格數(shù)10) / 兩測微尺重合線間目鏡測微尺格數(shù)用同樣的方法換成高倍鏡進行校正，記錄并計算在每種倍率下目鏡測微尺每一格所代表的長度。(510個取平均)(二) 懸滴法觀察細(xì)菌運動性1．在潔凈蓋玻片周圍涂少許凡士林。3．將凹玻片反轉(zhuǎn)，使凹窩中心對準(zhǔn)蓋玻片上的菌液滴，液滴不得與凹玻片接觸，以接種環(huán)柄輕壓使蓋玻片與凹玻片粘在一起，液滴處于封閉的小室中，防止液滴干燥和氣流的影響。5．先用低倍鏡找到懸滴邊緣，再用高倍鏡觀察。用懸滴法分別觀察大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的運動性。五、注意事項1．檢查細(xì)菌運動的載玻片和蓋玻片都要潔凈無油，否則將影響細(xì)菌的運動2．制水封片時菌液不可加得太多，過多的菌液會在蓋玻片下流動，因而在視野內(nèi)只見大量的細(xì)菌朝一個方向運動，從而影響了對細(xì)菌正常運動的觀察。2．描述各菌運動方式。2．觀察并掌握酵母菌的菌落特征、個體形態(tài)、生長及繁殖方式。4．了解血球計數(shù)板計數(shù)的原理，學(xué)會測定酵母細(xì)胞總數(shù)方法。血球計數(shù)板是一塊特制的厚載玻片，其上由四條槽構(gòu)成三個平臺，中間較寬的平臺又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺上各刻有一個方格網(wǎng)，每個方格網(wǎng)共分為9個大方格，中間的大方格即為計數(shù)室。計數(shù)時，如果使用1625的
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