【正文】 杭州師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院 向太和 167。 2 遺傳學(xué)圖譜 167。 基因組學(xué) 杭州師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院 向太和 AFLP(amplified fragment lenth polymorphism, 放大的片段長(zhǎng)度多態(tài)性 ) 1) 這是一種篩選 RFLP分子標(biāo)記的方法 . 先將 DNA樣品采用選定的限制性內(nèi)切酶 (如 EcoRI, Sau3A)消化 , 然后加上接頭 PCR引物； 2) 接頭 PCR引物設(shè)計(jì) : 根據(jù)限制酶接頭添加數(shù)個(gè)向外延伸的堿基 , 然后向 3’方向延伸 13個(gè)不同的堿基； 3) 選擇不同的引物對(duì)擴(kuò)放樣品 DNA, 經(jīng)聚丙烯胺凝膠電泳分離標(biāo)記的 PCR產(chǎn)物。 2) 將其它方法獲得的 DNA標(biāo)記 , 如 RAPD (random amplified polymorphism DNA) 標(biāo)記轉(zhuǎn)換為 RFLP標(biāo)記 。 3) 同一凝膠電泳可顯示不同多態(tài)性片段，表現(xiàn)為共顯性； 4）只有兩種等位形式。 遺傳作圖的標(biāo)記 RFLP操作流程 DNA提取 限制性內(nèi)切酶處理 電泳 探針雜交 放射性自顯影 探針制備 轉(zhuǎn)膜 基因組學(xué) 杭州師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院 向太和 基因組學(xué) 杭州師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院 向太和 RFLP的特點(diǎn) 1) 處于染色體上的位臵相對(duì)固定 。 基因組學(xué) 杭州師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院 向太和 RFLP多態(tài)性的產(chǎn)生與檢測(cè) 基因組學(xué) 杭州師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院 向太和 167。 3) White安排他的一位女博士后 Whyman從事這一研究 . Whyman從自己構(gòu)建的基因文庫(kù)中分離到一個(gè)片段作為探針 , 在 56名摩門教成員中發(fā)現(xiàn) 8個(gè)成員含有該片段多態(tài)性結(jié)構(gòu)。s appointment will begin July 1, 2022. 基因組學(xué) 杭州師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院 向太和 第 1篇有關(guān)人類 RFLP實(shí)驗(yàn)論文 A Highly Polymorphic Locus in Human DNA Arlene R. Wyman and Ray White, MIT A locus in the human genome, not associated with any specific gene, has been found to be a site of restriction fragment length polymorphism. The polymorphism was found by hybridizing a 16 kilobasepair segment of singlecopy human DNA, selected from the human genome library cloned in phage CH4A, to a Southern transfer of total human DNA digested with EcoRI. DNAs from a number of individuals from within Mormon pedigrees as well as random individuals have been examined. The locus is highly variable, with at least eight alleles present, homozygotes accounting for less than 25% of the individuals examined. PNAS | November 1, 1980 | vol. 77 | no. 11 | 67546758 基因組學(xué) 杭州師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院 向太和 第一篇 RFLP論文的誕生 1) David Botstein等在 Alta的研究生學(xué)術(shù)討論上提出 RFLP的想法。分子生物學(xué)家從經(jīng)典遺傳學(xué)的研究中獲得靈感。 人類基因組中大約有 105個(gè) RFLP。 Botstein 等 1980年首次發(fā)現(xiàn)，以后被大量利用，在微生物、植物、動(dòng)物和人類上都得到了廣泛的利用。 2 遺傳學(xué)圖譜 167。但目前分子標(biāo)記一般指 DNA標(biāo)記。 2 遺傳學(xué)圖譜 167。 2 遺傳學(xué)圖譜 167。 基因組學(xué) 杭州師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院 向太和 DNA標(biāo)記具有的優(yōu)勢(shì)： ? 在數(shù)量上是巨大的； ? 操作相對(duì)簡(jiǎn)單，適合大規(guī)模開展工作； ? 標(biāo)記比較明顯，容易識(shí)別； ? 受環(huán)境影響少，標(biāo)記本身就是遺傳物質(zhì)。 ?高等生物基因組存在大量基因間隔區(qū)，純粹的基因標(biāo)記在遺傳圖中會(huì)留下大片的無標(biāo)記區(qū)段。雖然經(jīng)過近百年的努力，目前這些標(biāo)記的數(shù)量仍然不多，因此限制了這些標(biāo)記的利用。 2 遺傳學(xué)圖譜 167。 遺傳作圖的標(biāo)記 DNA標(biāo)記（ DNA markers） : 是指以 DNA片段為標(biāo)記，通過DNA片段的電泳使 DNA產(chǎn)生多態(tài)性，如 RFLP等。 基因組學(xué) 杭州師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院 向太和 167。 2 遺傳學(xué)圖譜 167。 基因組學(xué) 杭州師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院 向太和 同工酶標(biāo)記 是指以同工酶帶型為標(biāo)記，通過電泳使同工酶帶型產(chǎn)生多態(tài)性。 ?生化性狀基因 ，如血型系列 (ABO)分析、血清蛋白、免疫蛋白、同工酶等。 2 遺傳學(xué)圖譜 167。 ? 親本間存在的多態(tài)性在后代中可以重演，即具有可遺傳性。 2 遺傳學(xué)圖譜 167。 物理圖的距離依作圖方法而異，如輻射雜種作圖的計(jì)算 單位為 厘鐳 (cR), 限制性片段作圖與克隆作圖的圖距為 DNA的分子長(zhǎng)度，即 堿基對(duì) (bp, kb)。 遺傳圖距單位為 厘摩 (cM), 每單位厘摩定義為 1%交換率。 遺傳圖 遺傳圖是應(yīng)用遺傳學(xué)分析方法將基因或其他 DNA順序 標(biāo)定在染色體上構(gòu)建的連鎖圖。 基因組學(xué) 杭州師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院 向太和 Clonebyclone測(cè)序 基因組學(xué) 杭州師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院 向太和 鳥槍法測(cè)序 基因組學(xué) 杭州師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院 向太和 混合法測(cè)序 (Hybrid strategy) 基因組學(xué) 杭州師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院 向太和 一 、遺傳圖譜與物理圖譜 基因組學(xué) 杭州師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院 向太和 167。 3)遺傳圖和物理圖各有優(yōu)缺點(diǎn) ,必須相互整合校正。 人類遺傳圖 基因組學(xué) 杭州師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院 向太和 為何要繪制遺傳圖與物理圖？ 1)基因組太大 ,必需分散測(cè)序 ,然后將分散的順序按原來位臵組裝 ,需要圖譜進(jìn)行指導(dǎo) 。 遺傳學(xué)作圖的標(biāo)記 167。基因組學(xué) 杭州師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院 向太和 第二章 遺傳圖繪制 167。 遺傳學(xué)圖與物理圖 167。 遺傳學(xué)作圖的方法 167。 2)基因組存在大量重復(fù)順序 ,會(huì)干擾排序 ,因此要高密度基因組圖。 基因組學(xué) 杭州師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院 向太和 ?結(jié)構(gòu)基因組的研究策略 結(jié)構(gòu)基因組的研究策略 基因組學(xué) 杭州師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院 向太和 基因組測(cè)序的策略 由上至下 (左 )和由下至上的測(cè)序 (右 ) 克隆重疊群指 導(dǎo)的測(cè)序 重疊群（ contig): 指相互間存在重疊順序的一組克隆。 2 遺傳學(xué)圖譜 167。 這一方法包括雜交實(shí)驗(yàn)，家系分析等。 物理圖 物理圖是應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)來直接將 DNA