【正文】 ................................................. 1 1 文獻(xiàn)綜述 .............................................................................................................................. 2 纖維素酶研究意義 ..................................................................................................... 2 纖維素酶簡(jiǎn)介 ............................................................................................................. 3 纖維素酶作用機(jī)理 ..................................................................................................... 4 纖維素酶的影響因素 ................................................................................................. 5 生產(chǎn)纖維素酶的生物 ................................................................................................. 6 生產(chǎn)纖維素酶菌種的研究現(xiàn)狀 ................................................................................. 8 纖維素酶的合成機(jī)理 ................................................................................................. 9 纖維素酶的生產(chǎn)及分離純化 ................................................................................... 10 固體發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶 .................................................................................... 10 液體深層發(fā)酵 ................................................................................................ 10 纖維素酶的分離純化 .................................................................................... 11 纖維素酶的應(yīng)用 ....................................................................................................... 12 在發(fā)酵工業(yè)上的應(yīng)用 .................................................................................... 12 在飼料工業(yè)中的應(yīng)用 .................................................................................... 12 在紡織工業(yè)的應(yīng)用 ........................................................................................ 13 在造紙工業(yè)的應(yīng)用 ........................................................................................ 13 在纖維素乙醇開(kāi)發(fā)利用方面應(yīng) 用 ................................................................ 13 在其他方面的應(yīng)用 ........................................................................................ 14 木質(zhì)纖維素 ............................................................................................................. 14 木質(zhì)纖維素的組成 ...................................................................................... 14 木質(zhì)纖維素的預(yù)處理 ................................................................................... 15 利用基因工程途徑構(gòu)建高產(chǎn)纖維素酶的工程菌 .................................................. 18 纖維素酶基因的克隆表達(dá) ........................................................................... 18 纖維素酶分子改造 ...................................................................................... 19 本課題的研究?jī)?nèi)容及意義 ..................................................................................... 22 2 產(chǎn)纖維素酶的微生物篩選與鑒定 .................................................................................... 24 引言 ......................................................................................................................... 24 大連理工大學(xué)碩士學(xué)位論文 V 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備 ..................................................................................................... 24 實(shí)驗(yàn)菌種及培養(yǎng)基 .................................................................................... 24 主要化學(xué)試劑 .............................................................................................. 25 主要實(shí)驗(yàn)儀器 ................................................................................................ 26 實(shí)驗(yàn)方法 ................................................................................................................... 26 山西土壤樣品與大連小平島海泥樣品的預(yù)處理 ........................................ 26 分散與差速離心法（ DDC） ..................................................................... 26 篩選樣品中產(chǎn)纖維素酶微生物的技術(shù)路線 ................................................. 27 山西土壤樣品與大連小平島海泥樣品中的微生物的分離培養(yǎng) ................ 27 霉菌 M20 的 DNA 提取 ................................................................................ 29 霉菌 M20 rDNA—ITS 區(qū) PCR 的引物擴(kuò)增 ............................................ 30 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論 ..................................................................................................... 31 降解纖維素菌種纖維素酶活力定性比較結(jié)果 ............................................ 31 產(chǎn)纖維素酶菌種的鑒定結(jié)果 ........................................................................ 31 本章小結(jié) ................................................................................................................. 32 3 纖維素酶活測(cè)定與產(chǎn)酶 條件優(yōu)化 .................................................................................... 34 引言 ......................................................................................................................... 34 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備 ........................................................................................................ 34 實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基 ..................................................................................................... 34 主要化學(xué)試劑 ................................................................................................ 35 主要實(shí)驗(yàn)儀器 ................................................................................................ 36 實(shí)驗(yàn)方法 ................................................................................................................... 37 DNS 試劑的配制 ............................................................................................ 37 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 ................................................................................ 37 DNS 法測(cè)定纖維素酶活力 ............................................................................ 37 M20 搖瓶培養(yǎng)與發(fā)酵條件 ............................................................................ 38 M20 發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶流程 ............................................................................ 38 M8 的搖瓶培養(yǎng)與發(fā)酵條件及產(chǎn)酶流程 ...................................................... 39 多因素對(duì)微生物搖瓶