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酶在食品分析中的應(yīng)用(2)-展示頁

2025-01-17 07:36本頁面
  

【正文】 原與待測抗原二者競爭與抗體結(jié)合;經(jīng)過洗滌分離 , 最后結(jié)合于固相的抗體與待測抗原含量呈負相關(guān) 。 洗滌后 , 加入酶標抗球蛋白抗體 (酶標抗抗體 )和底物進行測定 。 間接法 ? 此法是測定抗體最常用的方法 。溫育后洗滌 , 加入酶標抗體和底物進行測定 。 ( 常用硫酸 ) 必需 酶標儀和酶標板 DNM9602A酶標分析儀 酶標板 ELISA的基本類型 ? 隨著 ELISA在生物檢測分析領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用 ,根據(jù)試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體條件 , 逐漸演變出了幾種不同類型的檢測方法: ( 5)捕獲法測 IgM抗體; ( 6) ABSELISA法; ( 7) PCR酶聯(lián)免疫測定法; ( 8)斑點免疫酶結(jié)合試驗。 測定的對象可以是抗體也可以是抗原 。 ? ( 2) 通過酶與底物產(chǎn)生 顏色反應(yīng) , 用于定量測定 。 ? ELISA自上世紀 70年代出現(xiàn)開始 , 就因其高度的準確性 、 特異性 、 適用范圍寬 、 檢測速度快以及費用低等優(yōu)點 , 在臨床和生物疾病診斷與控制等領(lǐng)域中倍受重視 , 成為檢驗中最為廣泛應(yīng)用的方法之一 。 如酶聯(lián)免疫法 、 酶電極法等 。 ? 3) 測定食品中酶的活性作為食品的指標 , 如過氧化物酶的測定 、 蜂蜜中酶的測定 。 ? 2) 催化待測物生成新的產(chǎn)物 , 而這種產(chǎn)物更容易被定量分析 。 1. 酶法分析的特點及應(yīng)用類型 ? 酶的特性 ? 酶法檢測的特點 催化效率高 專一性 靈敏性強 快速 特異性、準確 不需要物理分離,干擾少 酶在食品分析中的應(yīng)用類型 ? 1) 去除樣品中的雜質(zhì) 。 ? 到了 20世紀 50年代前已有 60種物質(zhì)能借助于酶法分析 。 ? 然而 , 酶法分析真正的發(fā)展應(yīng)歸于它在臨床實驗室中的廣泛應(yīng)用 。第 10章 酶在食品分析中的應(yīng)用 主要內(nèi)容: 1 酶法分析的特點及應(yīng)用類型 2 酶聯(lián)免疫測定( ELISA) 3 聚合酶鏈式反應(yīng)( PCR) 4 酶生物傳感器 5 酶抑制率法 酶法分析的發(fā)展 ? 酶在定量分析中的應(yīng)用可以追溯到 19世紀中期 。當時 , 曾采用麥芽提取物作為過氧化物酶源 ,以愈創(chuàng)木酚作為共底物或指示劑測定過氧化氫 。 酶法分析的發(fā)展 ? 如早在 1914年臨床上就開始采用脲酶測定尿中的尿素 , 但是在臨床實驗室中酶分析的真正突破要推遲到 1958年 , 當時轉(zhuǎn)氨酶分析發(fā)展成為診斷肝病和心臟病的一個有效手段 。 近年來 , 酶法分析發(fā)展迅速 , 廣泛應(yīng)用于臨床檢驗 、 食品 、 環(huán)境等生物及其它樣品的檢測 。 如測定果糖 、 多糖等 。 如:淀粉的測定 。 ? 4) 利用酶催化反應(yīng)所產(chǎn)生的一些信息 。 2 酶聯(lián)免疫測定( ELISA) ? 酶聯(lián)免疫測定 ( enzymelinked immunosorbent assay , ELISA) 是繼放射免疫測定技術(shù)之后發(fā)展起來的一項新的免疫學(xué)技術(shù) 。 ELISA的 基本原理 ? ( 1) 利用抗原與抗體的特異反應(yīng)將 待測物與酶連接 ( 或建立關(guān)聯(lián) ) 。 ? 它將 酶促反應(yīng)的高效率 和 免疫反應(yīng)的高度專一性 有機地結(jié)合起來 , 可對生物體內(nèi)各種微量有機物的含量進行測定 。 重點 ELISA試劑盒的組成 ? 完整的 ELISA試劑盒包含以下各組分: ( 1) 包被抗原或抗體的固相載體 ( 免疫吸附劑 ) ; (
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