蛋白質(zhì)綜合實(shí)驗(yàn)ppt課件-展示頁(yè)
2024-12-04 20:14本頁(yè)面
【正文】 原理： 在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)與 Cu2+絡(luò)合并將Cu2+還原成 Cu1+。 還有近來(lái)廣為應(yīng)用的蛋白定量方法 —— BCA法。蛋白質(zhì)綜合實(shí)驗(yàn) 蛋白質(zhì)濃度測(cè)定介紹 四種古老的經(jīng)典方法 : 定氮法，雙縮尿法（ Biuret法）、 Folin－酚試劑法（ Lowry法）和紫外吸收法。 新的測(cè)定法 : 考馬斯亮藍(lán)法（ Bradford法）。 在選擇方法時(shí)應(yīng)考慮 ① 實(shí)驗(yàn)對(duì)測(cè)定所要求的靈敏度和精確度； ②蛋白質(zhì)的性質(zhì)； ③溶液中存在的干擾物質(zhì)； ④測(cè)定所要花費(fèi)的時(shí)間。兩分子的 BCA(在 BCA反應(yīng)液中）螯合一個(gè) Cu1+ ，形成 紫色 的反應(yīng)復(fù)合物。 優(yōu)點(diǎn)：靈敏度非常高 。Folin酚反應(yīng)是在雙縮脲反應(yīng)的基礎(chǔ)上，引進(jìn) Folin試劑 (磷鉬酸 — 磷鎢酸試劑 )，蛋白質(zhì) — 銅絡(luò)合物能還原磷鉬酸 — 磷鎢酸試劑，生成 藍(lán)色 物質(zhì)。 ? 本法的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、較紫外吸收法靈敏10— 20倍，較雙縮脲法靈敏 100倍。 操作方法 血清蛋白的測(cè)定和標(biāo)準(zhǔn)曲線制作 試管編號(hào) 1 2 3 4 5 6 7 標(biāo)準(zhǔn)蛋白 (mL) 0 － 稀釋血清 (mL) － － － － － － ％ NaCl(mL) － － 堿性銅溶液 (mL) 混勻后室溫放置 20 min。 求算標(biāo)本血清中的蛋白質(zhì)濃度 ? ⑴查圖：利用測(cè)定管讀數(shù)在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出蛋白量（ X），最后如下算出標(biāo)本的蛋白含量： g％＝ X*（ 100/） *106 ? ⑵ 以標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管的吸光數(shù)，按下列公式計(jì)算： g％＝（ OD測(cè)定 /OD標(biāo)準(zhǔn) *標(biāo)準(zhǔn)管蛋白量） *（ 100/） 注意事項(xiàng) 1）加入酚試劑時(shí)動(dòng)作要快并立即搖勻，不應(yīng)出現(xiàn)混濁 2）標(biāo)準(zhǔn)曲線制備： 至少要有五個(gè)點(diǎn)以上。吸光度在 ～ 。 臨床意義
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1