【正文】 tion chromatography， AC是指混合物隨流動相通過固定相 （ 吸附劑 ） 時，由于固定相對不同物質(zhì)的吸附力不同而使混合物分離的方法。 ? 20世紀 80年代初由 Jenson等集前人經(jīng)驗而發(fā)展起來的 毛細管電泳 （ Capillary electrophoresis， CE） ，在 90年代得到廣泛的發(fā)展和應(yīng)用。 ? 20世紀 60年代初， Giddings將氣 液色譜理論用于液 液色譜，同時 把高壓泵和化學(xué)鍵合固定相用于液相色譜， 于 60年代末出現(xiàn)了 高效液相色譜 （ HPLC） 。 ? 1959年 Porath和 Flodin提出了 凝膠色譜法 （ gel chromatography ） 。 ? 1944年 R. Consden、 A. H. Gorden和 Martin等發(fā)展了 紙色譜 。 ? 1956年 Van Deemter等在前人研究的基礎(chǔ)上發(fā)展了描述色譜過程的速率理論。 ? 1952年 James和 Martin發(fā)表了從理論到實踐比較完整的 氣液色譜法 gasliquid chromatography。1952年獲諾貝爾化學(xué)獎。 ? 1935年， Adams和 Holmes 合成了離子交換樹脂，并用于色譜分離，從而誕生了離子交換色譜法。 ? 色譜法的發(fā)展 ? 1931年， Kuhn、 Lederer用氧化鋁和碳酸鈣分離了 ?、 ?、 ?胡蘿卜素后才引起重視。 ? Karrer在 1937年， Kuhn在 1938年， Ruzicka在1939年相繼獲諾貝爾化學(xué)獎。在 Kuhn的指導(dǎo)下，他用碳酸鈣作吸附劑，在一小色柱中，成功地 分離了 ?、 ?、 ?胡蘿卜素 ，并發(fā)表了三篇論文，公布了他們的研究成果。 ? 1930年 12月，奧地利 22歲研究生 E. Lederer到海得堡 R. Kuhn領(lǐng)導(dǎo)的化學(xué)研究所研究類胡蘿卜素。tter的觀點，即過分強調(diào)制備工作，也反映出當(dāng)時有機化學(xué)家的一種普遍態(tài)度。tter（ 1915年獲諾貝爾化學(xué)獎獲得者） 1913年在其名著“葉綠素的研究”中，稱色譜法是一種“離奇的方法”，認為它不適用于制備工作，在吸附過程中，試樣組分可能發(fā)生化學(xué)變化。tter對色譜法的排斥和不信任。 It is very instructive to observe the adsorption phenomena during filtration through a powder. First a colourless, then a yellow （ carotene） liquid flows out from the bottom of the funnel, while a bright green ring forms at the top of the inulin column, below which a yellow ring soon appears. On subsequent washing of the inulin column with pure ligroin, both rings, the green and the yellow, are considerably widened and move down the column. . Tswett Tr. Varshav. Obshch. Estestvoispyt., Otd. Biol., 14 （ 1903） 20 ? 然而，在 20多年時間里，他的新分離方法并沒有受到科學(xué)界的重視。 ? 1903年， M. C. Tswett 進行了分離植物葉中各 種色素的實驗。在色譜分析中常用分配系數(shù)來描述組分對流動相和固定相的作用力的差別： K= Cs/Cm 分配系數(shù)的差異是色譜分離的根本原因 。 ③被分離的組分與流動相和固定相有不同的作用力。 ①凡是色譜分離都具有 stationary phase和mobile phase 。4. 色譜分離 Chromatographic resolution 也稱色譜法 （ chromatography） 色譜分離是分離科學(xué)的一次革命。 主要內(nèi)容 概述 色譜分離的分類 生物工程中的色譜分離 色譜分離的基本理論 吸附色譜 離子交換色譜 分配色譜 凝膠色譜 高速逆流色譜 徑向色譜分離法 連續(xù)環(huán)狀色譜分離法 概述 色譜法的定義 色譜法的發(fā)展簡史 色譜法的特點 色譜法的定義 ? 色譜法 chromatography ? 是利用混合物中各組分在兩相中分配系數(shù)不同，當(dāng)流動相推動樣品中的組分通過固定相時，在兩相中進行連續(xù)反復(fù)多次分配，從而形成差速移動，達到分離的方法。 ②固定相是不動的，流動相對固定相作相對的運動。這種作用力有吸附力，溶解力 ，離子交換能力等。 色譜法的發(fā)展史 ? 色譜法的誕生 ? 常見的分離方式如過濾、蒸餾、沉淀、結(jié)晶、離心、萃取、膜分離等在分離復(fù)雜的混合物時就顯得力不從心了。創(chuàng)立了 色譜法。其中一個重要原因是德國著名化學(xué)家 R. Willst228。 ? Willst228。他寫道：“ 色譜法只能在試樣很少的情況下使用，似乎不適合于制備目的 …… ” ? Willst228。因此，茨維特的技術(shù)是超越其時代的。他對文獻進行了仔細考察，從文獻中了解到茨維特的色譜技術(shù)。這標志著色譜法的復(fù)興。從此以后，色譜法得到普遍的公認，成為最有效的分離提純手段。Tswett的方法是借助于各組分在固定相中吸附能力的強弱不同而進行分離的，稱為 吸咐色譜adsorption chromatography。 ? 1941年 A. J. P. Martin和 R. L. M. Synge發(fā)明了分配色譜法（ partition chromatography） 。 Archer John Porter Martin Richard Laurence Millington Synge ? 1941年 Martin和 Synge提出用氣體代替液體作流動相的可能性。 ? 1957年 Golay開創(chuàng)了開管柱氣相色譜法 opentubular column chromatography， 即 毛細管柱氣相色譜法 capillary column chromatography。 ? 1965年 Giddings總結(jié)和發(fā)展了前人的色譜理論 。 ? 1949年 Macllean等在氧化鋁中加入淀粉粘合劑制作薄層板使 薄層色譜法（ thin layer chromatography） 得以實際應(yīng)用， 1956年 E. Stahl對 TLC的標準化、規(guī)范化及應(yīng)用面做了大量工作并 開發(fā)出薄層色譜板涂布器之后，才使TLC得到廣泛地應(yīng)用。 ? 1967年 Porath、 Axen和 Ernback成功地創(chuàng)立了 親和色譜法 （ affinity chromatography ） 。 ? 20世紀 80年代初毛細管 超臨界流體色譜 （ SFC）得到發(fā)展， 90年代未得到較廣泛的應(yīng)用。 ? 同時集 HPLC和 CE優(yōu)點的 毛細管電色譜 在 20世紀90年代后期受到重視。 ? 吸附作用力可以是 物理吸附作用 ，也可以是 化學(xué)吸附作用 。物理吸附和化學(xué)吸附可以同時發(fā)生，在一定條件下也可以互相轉(zhuǎn)化。 ? 在此基礎(chǔ)上發(fā)展起來的新的吸附色譜技術(shù)，如 疏水作用色譜 （ hydrophobic interaction chromatography， HIC） 、 金屬螯合作用色譜（ metal chelation chromatography， MCC）和 共價作用色譜 （ covalent interaction chromatography， CIC） 等，所用吸附劑一般為有機基質(zhì)并通過化學(xué)修飾后制成，它們都有比較明確的作用機理，即 疏水作用 、 螯合作用 和 共價作用 。廣泛用于生物大分子的分離純化中。 ? 親和作用是特殊的吸附作用。 ? 分配色譜可分為 正相色譜 （ normal phase chromatography， NPC） 和 反相色譜（ reversed phase chromatography， RPC） 。 ? 凝膠色譜 ? 凝膠色譜 （ gel chromatography， GC）以凝膠為固定相，是一種根據(jù)各物質(zhì)分子大小不同而進行分離的色譜技術(shù)，因而又稱為分子篩色譜（ molecular sieve chro