犬瘟熱診斷技術(shù)的研究進(jìn)展-課程論文湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)-展示頁(yè)
2025-06-18 23:11本頁(yè)面
【正文】 年 12 月 17 日 犬瘟熱診斷技術(shù)的研究進(jìn)展 學(xué)生：呂軒 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院 摘 要 :近年來(lái) ,犬瘟熱已嚴(yán)重危害了犬及毛皮動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展 ,快速、準(zhǔn)確的診斷技術(shù)對(duì)于犬瘟熱的預(yù)防 顯得尤為重要?，F(xiàn)階段犬瘟熱診斷技術(shù)的研究主要有病毒分離培養(yǎng)與鏡檢觀察、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) (ELISA)、免 疫 組 化 、免 疫 膠 體 金 、核 酸 雜 交 、巢 式 RTPCR、實(shí) 時(shí) 熒 光 定 量 RT PCR、雙 重 PCR、基 因 芯 片 、液 相 芯 片 、環(huán) 介 導(dǎo) 等 溫 擴(kuò)增等。作者就犬 瘟熱診斷技術(shù)的研究進(jìn)展作一綜述 ,為有效預(yù)防和控制犬瘟熱的流行和暴發(fā)提供簡(jiǎn)便、高效的檢測(cè)技術(shù)。診斷技術(shù) 。 近年來(lái) ,人們對(duì)犬瘟熱病的研究雖取得很大進(jìn)展 ,但 由于該病在感染后多繼發(fā)細(xì)菌性、病毒性感染 ,早期 診斷困難 ,且動(dòng)物一旦發(fā)病死亡率高。作者就目前國(guó)內(nèi)外對(duì)犬瘟熱診 斷技術(shù)的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述 ,以期為該病的防控及 快速診斷技術(shù)研究提供參考。在 CDV 免疫學(xué)研究 中 ,因 H 和 F蛋白具有許多病毒中和性抗原表位 , 可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體 ,常作為合成疫苗和基因 工程亞單位疫苗的研究對(duì)象 [12]。 目前大多數(shù)毛皮動(dòng)物養(yǎng)殖國(guó)均有該病的流行 ,已 成為危害毛皮動(dòng)物的三大主要傳染病 (犬瘟熱、病毒 性腸炎、阿留申 )之一。但隨著 養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展 ,大范圍易感動(dòng)物的運(yùn)輸導(dǎo)致 CDV 的 發(fā)病規(guī)律不再具有季節(jié)性、周期性和地域性。 國(guó) 內(nèi) 外 試 驗(yàn) 結(jié) 果 表 明 , 穩(wěn) 定 表 達(dá) C D V 信 號(hào) 淋 巴 激 活 分 子 (S L A M ) 受 體 的 細(xì) 胞 株 , 能 有 效 分 離 CDV,并且不受傳代次數(shù)限制 ,產(chǎn)生比傳代細(xì)胞更 明 顯 的 細(xì) 胞 病 變 (CPE)。創(chuàng)建 穩(wěn) 定 表 達(dá) C D V S L A M 受 體 細(xì) 胞 株 的 一 般 方 法 為 : 采用分子克隆技術(shù)擴(kuò)增 SLAM 基因 ,構(gòu)建 SLAM 真核重組表達(dá)質(zhì)粒 ,并將其轉(zhuǎn)染于擬改造細(xì)胞 ,經(jīng) G418壓力篩選、單細(xì)胞克隆化、免疫熒光試驗(yàn)、 RTPCR、 Western bloting 等 篩 選 出 穩(wěn) 定 表 達(dá) SLAM 的 陽(yáng) 性 細(xì) 胞 。依 據(jù) 上 述 方 法 ,NaKano 等 [8] 成 功 建 立 穩(wěn) 定 表 達(dá) SLAM 的犬腎細(xì)胞和貓腎細(xì)胞 ,為犬瘟熱病毒學(xué)和 血 清 學(xué) 分 析 奠 定 基 礎(chǔ) 。朱穎等 [10]建立了能穩(wěn)定表達(dá) CDV 細(xì) 胞受體 SLAM 的 BHK21/SLAM 細(xì) 胞 系 ,感 染 CDV 12h 即出現(xiàn) CPE,且明顯提高了病毒的增殖力 ,該試驗(yàn) 為 CDV的分離、生物學(xué)特性研究及疫苗生 產(chǎn)等提 供了敏感的細(xì)胞系。 3 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù) ? 3 .1 酶 聯(lián) 免 疫 吸 附 試 驗(yàn) (E LIS A ) 該法是在細(xì)菌性、病毒性疾病檢測(cè)中應(yīng)用最廣 泛 的 技 術(shù) [1113],在 CDV 的 檢 測(cè) 中 常 用 夾 心 ELISA 法 檢 測(cè) CDV 抗 原 ,間 接 ELISA 法 檢 測(cè) CDV 抗 體 。 間接 ELISA 法是以特異性 CDV 抗原與固相載體聯(lián) 結(jié) ,形 成 固 相 CDV 抗 原 ,加 入 受 檢 樣 品 ,樣 品 中 的 特 異 CDV 抗 體 與 固 相 CDV 抗 原 結(jié) 合 ,形 成 固 相 抗 原抗體復(fù)合物 ,加入酶標(biāo)抗 CDV 抗體 ,固相免疫復(fù) 合 物 中 的 抗 體 與 酶 標(biāo) 抗 CDV 抗 體 結(jié) 合 ,從 而 間 接 地標(biāo)記上酶 ,再加入底物顯色 ,固相載體上的酶量與 樣 本 中 受 檢 抗 體 的 量 呈 正 相 關(guān) 。 Litster 等 [15 ] 對(duì) 美 國(guó) 某 一 醫(yī) 療 點(diǎn) 用于檢測(cè) CDV 抗體滴度的 ELISA 試劑盒的準(zhǔn)確性 進(jìn)行檢測(cè) ,結(jié)果顯示該試劑盒的敏感性為 %, 特異性為 %,被證明是測(cè)定犬血清中 CDV 抗 體滴度的簡(jiǎn)便有效工具。 3 .2 免 疫 組 化 技 術(shù) ? 免疫組化技術(shù)可對(duì) CDV 在各組織中分布情況 進(jìn)行檢測(cè)。其一般步驟為 :將固定于中性 甲 醛 溶 液 中 的 病 料 (腎 臟 、肺 臟 、腦 、淋 巴 結(jié) 等 )修 剪 、 石蠟包埋制塊、切片 ,經(jīng)免疫組化染色后在 光學(xué)顯微 鏡下觀察。劉雯等 [17]采用間接免疫組化法對(duì) 6只 人工感染的比格犬腸組織 CDV 抗原進(jìn)行定位檢 1320 中 國(guó) 畜 牧 獸 醫(yī) 42 卷 測(cè) ,結(jié)果顯示 CDV 抗原主要在小腸絨毛和李氏隱 窩的上皮細(xì)胞胞漿內(nèi) ,說(shuō)明 CDV對(duì)腸組織的損害 主要在小腸黏膜上皮組織。 Renter237。s 等 [19]對(duì)德國(guó)柏林市區(qū) 97只自由放養(yǎng)的浣熊進(jìn)行免 疫 組 化 檢 測(cè) ,結(jié) 果 證 實(shí) 有 74 只 感 染 CDV。 3 .3 免 疫 膠 體 金 技 術(shù) 免疫膠體金技術(shù)是利用抗原抗體特異性結(jié)合的 免疫反應(yīng)原理 ,將特異性的抗原或抗體以條帶狀固 定在膜上 ,膠體金標(biāo)記試劑 (抗體或單克隆抗體 )吸 附在結(jié)合墊上 ,當(dāng)待檢樣本加到試紙條一端的樣本 墊上后 ,通 過(guò)毛細(xì)作用向前移動(dòng) ,溶解結(jié)合墊上的膠 體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng) ,在檢測(cè)線處形成抗體 — 待測(cè)抗原 — 金標(biāo)抗體復(fù)合物 ,再移動(dòng)至固定的抗原 或抗體的區(qū)域時(shí) ,待檢物與金標(biāo)試劑的結(jié)合物又與 之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留 ,聚集在檢測(cè)帶上 ,在對(duì) 照線處形成抗金標(biāo)抗體 — 金標(biāo)抗體復(fù)合物 ,通過(guò)肉 眼即可觀察顯色結(jié)果 [20]。
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