【正文】 CDV 的流行病學(xué)調(diào)查和種特異性鑒定。因每種技術(shù)均有其優(yōu)缺點(diǎn)及諸多限 制因素 ,因此在對(duì)疑似犬瘟熱感染的動(dòng)物進(jìn)行診斷 時(shí) ,最好多種檢測(cè)方法相結(jié)合 ,以最大限度提高檢測(cè) 的敏感性和特異性。 依 據(jù) 雙 重 PCR 檢 測(cè) 技 術(shù) ,劉 大 飛 等 [3 5 ] 、 耿 慶 華 等 [3 6 ] 、 孫 園 園 等 [3 7 ] 均 建 立 了 C D V 與 另外一種病毒的雙重 PCR檢測(cè)方法 ,其敏感性明顯 高于商品化膠體金試紙條 ,并有利于檢測(cè)出兩種病 毒混合感染病料 ,且與普通 PCR 檢測(cè)結(jié)果的符合率 在 98%以上 ,該法可在臨床中推廣應(yīng)用。該方法需經(jīng)過(guò)兩輪 PCR 反 應(yīng) ,與 普 通 RTPCR 反 應(yīng) 相 比 大 大 提 高 了 反 應(yīng)的特異性 ,比免疫層析技術(shù) (IC)的敏感性更高 , 同 時(shí) 又 采 用 限 制 性 片 段 長(zhǎng) 度 多 態(tài) 性 (RFLP)分 析 技 術(shù)對(duì)擴(kuò)增的 NC 基因核苷酸序列進(jìn)行分析 ,以此來(lái) 確定是否為 CDV 野毒株感染。近年來(lái)在獸醫(yī)臨床上 CDV 膠體金檢測(cè)試 紙條廣泛應(yīng)用 ,是基層獸醫(yī)站和寵物醫(yī)院確診犬瘟 熱最常用 的輔助手段。 間接 ELISA 法是以特異性 CDV 抗原與固相載體聯(lián) 結(jié) ,形 成 固 相 CDV 抗 原 ,加 入 受 檢 樣 品 ,樣 品 中 的 特 異 CDV 抗 體 與 固 相 CDV 抗 原 結(jié) 合 ,形 成 固 相 抗 原抗體復(fù)合物 ,加入酶標(biāo)抗 CDV 抗體 ,固相免疫復(fù) 合 物 中 的 抗 體 與 酶 標(biāo) 抗 CDV 抗 體 結(jié) 合 ,從 而 間 接 地標(biāo)記上酶 ,再加入底物顯色 ,固相載體上的酶量與 樣 本 中 受 檢 抗 體 的 量 呈 正 相 關(guān) 。在 CDV 免疫學(xué)研究 中 ,因 H 和 F蛋白具有許多病毒中和性抗原表位 , 可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體 ,常作為合成疫苗和基因 工程亞單位疫苗的研究對(duì)象 [12]。 關(guān)鍵詞 :犬瘟熱 。 將 CDV 接 種 于 陽(yáng) 性 細(xì) 胞 和 親 本細(xì)胞觀察 CPE情況 ,判定陽(yáng)性細(xì)胞的敏感度。張文奎等 [18]對(duì)確診為 犬 瘟 熱 的 病 貉 肺 臟 、腦 、腎 臟 、胃 、脾 臟 、淋 巴 結(jié) 、扁 桃 體、鼻、足墊、支氣管進(jìn)行免疫組化檢測(cè) ,確定出 CDV 分 布 最 廣 泛 的 器 官 是 扁 桃 體 。 巢 式 RTPCR (nested RTPCR) 巢 式 R T P C R 是 一 種 變 異 的 R T P C R , 使 用 兩 對(duì) R T P C R 引 物 。特 異 性 強(qiáng) ,與 其 他 犬 類(lèi) 病 毒 不 發(fā) 生 交 叉反應(yīng) 。該技術(shù)是一種全 新的核酸擴(kuò)增方法 ,能在等溫條件下短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行 核酸擴(kuò)增 ,具有簡(jiǎn)單、快速、強(qiáng)特異性等特點(diǎn)。 胡 嘉 欣 等 [4 5 ] 采 用 反 轉(zhuǎn) 錄 環(huán) 介 導(dǎo) 等 溫 擴(kuò) 增 (RTLAMP)技 術(shù) 對(duì) CDV N 基 因 保 守區(qū)的 8個(gè)位點(diǎn)設(shè)計(jì) 6條引物進(jìn)行 RTLAMP一 步 法 擴(kuò) 增 ,試 驗(yàn) 結(jié) 果 表 明 該 法 的 靈 敏 度 是 RTPCR 的 103 倍 ,整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程比 RTPCR縮短 ,具 有成本低、方便快捷等優(yōu)點(diǎn) ,適于獸醫(yī)臨床診斷和流 行病學(xué)調(diào)查等相關(guān)研究。 該 法 適 于 犬 瘟 熱 的 早 期 診 斷 。 第 2 對(duì) 引 物 稱(chēng) 為 巢 式 引 物 (因 為 其 在 第 1 次 RTPCR 擴(kuò) 增 片 段 的 內(nèi) 部 )結(jié) 合 在 第 1 次 RTPCR 產(chǎn) 物 內(nèi) 部 ,使 得 第 2 次 RTPCR 擴(kuò)增片段短于第 1次擴(kuò)增。a Sol237。 趙 建 軍 等 [9] 建 立 的 Vero rSLAM 細(xì)胞系接種 CDV 樣品 36~48h即可產(chǎn)生 典型 CDV致細(xì)胞融合病變 ,分離的 CDV保持較強(qiáng) 毒力。研究進(jìn)展 犬 瘟 熱由 犬 瘟 熱 病 毒 (canine distemper virus,CDV)感 染 所 致 ,該 病 呈 世 界 性 分 布 ,對(duì) 寵 物 犬 和 經(jīng) 濟(jì) 毛 皮 動(dòng) 物 (貂 、狐 、貉 )等 危 害 嚴(yán) 重 , 死 亡 率 可 達(dá) 8 0 % ~ 9 0 % ,1 9 9 7 年 的 《 中 華 人民共和國(guó)動(dòng)物防疫法》將其列為三類(lèi)動(dòng)物疫病。作者就目前國(guó)內(nèi)外對(duì)犬瘟熱診 斷技術(shù)的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述 ,以期為該病的防控及 快速診斷技術(shù)研究提供參考。 3 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù) ? 3 .1 酶 聯(lián) 免 疫 吸 附 試 驗(yàn) (E LIS A ) 該法是在細(xì)菌性、病毒性疾病檢測(cè)中應(yīng)用最廣 泛 的 技 術(shù) [1113],在 CDV 的 檢 測(cè) 中 常 用 夾 心 ELISA 法 檢 測(cè) CDV 抗 原 ,間 接 ELISA 法 檢 測(cè) CDV 抗 體 。 3 .3 免 疫 膠 體 金 技 術(shù) 免疫膠體金技術(shù)是利用抗原抗體特異性結(jié)合的 免疫反應(yīng)原理 ,將特異性的抗原或抗體以條帶狀固 定在膜上 ,膠體金標(biāo)記試劑 (抗體或單克隆抗體 )吸 附在結(jié)合墊上 ,當(dāng)待檢樣本加到試紙條一端的樣本 墊上后 ,通 過(guò)毛細(xì)作用向前移動(dòng) ,溶解結(jié)合墊上的膠 體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng) ,在檢測(cè)線處形成抗體 — 待測(cè)抗原 — 金標(biāo)抗體復(fù)合物 ,再移動(dòng)至固定的抗原 或抗體的區(qū)域時(shí) ,待檢物與金標(biāo)試劑的結(jié)合物又與 之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留 ,聚集在檢測(cè)帶上 ,在對(duì) 照線處形成抗金標(biāo)抗體 — 金標(biāo)抗體復(fù)合物 ,通過(guò)肉 眼即可觀察顯色結(jié)果 [20]。 楊 井 泉 等 [26]建 立 了 CDV 巢 式 RTPCR 檢 測(cè) 方 法 ,并 用 此 法