【正文】 的載體基因工程中，攜帶目的基因進入宿主細胞進行擴增和表達的工具，稱為載體。 siRNA的設計原則RNAi 作用的成功與否，關(guān)鍵在于siRNA序列的結(jié)構(gòu)，不同結(jié)構(gòu)的siRNA序列沉默基因的效率差別很大，2001年，Elbashir S M等[應用化學合成法合成了siRNA，并發(fā)現(xiàn)可以誘導哺乳動物發(fā)生RNAi，他們進而據(jù)此提出了siRNA 設計方法：1)從起始密碼下游50~100nt開始搜索siRNA以避免出現(xiàn)于5′或3′端的UTRs 的蛋白結(jié)合位點，；2)搜索5′AA(N19)UU序列，如果沒有相應序列，可以選擇5′AA(N21)或5′NA(N21)；3)G/C含量在32%~79%之間[16]； 4)要確定siRNA對靶基因的特異性，可以利用Blast軟件在基因組中進行比對，；5)設置在基因組中無對應序列的siRNA的對照siRNA。 siRNA簡介RNA干擾作用是通過siRNA（small interfering RNA，siRNA）這類小RNA分子作為較穩(wěn)定的中間介質(zhì)實現(xiàn)的。 RNAi的特點RNAi具有高效性，也就是說與細胞內(nèi)的mRNA的量相比，注入細胞內(nèi)的siRNA的量要少得多。不同生物體內(nèi)的RNA干擾作用機制也各有不同，但是主要可以分為兩種類型：特異效應作用機制與非特異效應作用機制。RNAi有望成為分析人類基因組功能的有力工具，在腫瘤病因、免疫機制及治療等方面的研究上有廣闊的發(fā)展前景。為下一步抑制mrp1基因在腫瘤細胞中的表達奠定基礎(chǔ)。 DH5α后大量提取重組質(zhì)粒，經(jīng)菌落 PCR和 DNA測序分析檢測重組載體構(gòu)建結(jié)果。構(gòu)建針對mrp1 mRNA的RNA干擾表達載體。RNA干擾(RNA interference，RNAi)是近年來發(fā)現(xiàn)的能快速、高效、特異的沉默目的基因表達的技術(shù)，如能通過RNAi技術(shù)沉默MDR1基因，逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞的多藥耐藥性將為改善癌癥病人的化療效果奠定基礎(chǔ)。腫瘤細胞的多藥耐藥性（multidrug resistance, MDR）是導致腫瘤細胞化療失敗的主要原因。參考文獻：[1]孫明 《基因工程》 高等教育出版社 2005 [2]孟瑞芝 淺談基因工程在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應用 2009 [3]陳慧 基因工程技術(shù)在食品營養(yǎng)品質(zhì)、風味改良中的應用 牧與飼料科學 2010 31（4）2728 [4]賈志杰 我國基因工程藥物研究與應用新進展 長春中醫(yī)藥大學學報 2010 26（2）290291 [5]翟中和 《生命科學和生物技術(shù)》 山東教育出版社 1996 [6]鄭明剛 基因工程在生物柴油原料中的應用研究 農(nóng)業(yè)基礎(chǔ)科學 2010 2226 [7]方陵生 源自基因工程的新一代生物燃料 世界科學 2009 810 [8]趙宏韜 淺析基因工程倫理中的有利原則 東方企業(yè)文化 2010 202 [9]閆新甫 《轉(zhuǎn)基因植物》 2002 [10]韋凱 植物基因工程的應用及其發(fā)展 魅力中國 2009 45第四篇：基因工程論文學號：13054107基因工程結(jié)課論文院（系）名稱： 理學院 專業(yè)名稱： 生物科學 學生姓名： 姜己玉 所在班級： 131目錄摘要............................................................................................................................................2 第一章 緒論..............................................................3 1..1RNAi的研究進展....................................................3 ...........................................3 RNAi 的特點..................................................3 siRNA簡介.........................................................3 s iRNA 的設計原則..........................................3 用于 RNA i 的載體....................................................4 載體的選擇..................................................4 質(zhì)粒人工構(gòu)建的目的.................................................4 MRP1 的研究進展......................................................4 第二章 實驗材料與方法.....................................................5 實驗材料.............................................................5 宿主菌.............................................................5 載體通用引物................................................5 主要儀器..........................................................5 試驗方法.........................................................5 shRNA 的設計與退火..................................................5 合成干涉片段的退火..........................................6 重組載體的構(gòu)建..............................................6 菌落PCR初步篩選陽性重組子..................................7 測序鑒定重組載體...............................................7 第三章 結(jié)果與分析.........................................................8 質(zhì)粒經(jīng)HindⅢ和BamHI雙酶切后膠回收結(jié)果...........................8 質(zhì)粒經(jīng)HindⅢ和BamHI雙酶切后結(jié)果.............................8 目的片段的回收................................................8 重組質(zhì)粒的菌落PCR...................................................8 重組質(zhì)粒大量提取......................................................8 重組質(zhì)粒測序結(jié)果.................................................8 參考文獻..................................................................9摘 要癌癥嚴重威脅著人類的健康，其發(fā)病率呈上升趨勢。所以，我們要在抓住機遇，大力發(fā)展基因工程技術(shù)的同時，需要嚴格管理，充分重視轉(zhuǎn)基因生物的安全性。轉(zhuǎn)基因生物和常規(guī)繁殖生長的品種一樣，是在原有品種的基礎(chǔ)上對其部分性狀進行修飾或增加新性狀，或消除原來的不利性狀，但常規(guī)育種是通過自然選擇，而且是近緣雜交，適者生存下來，不適者被淘汰掉。解決基因工程倫理問題的基本思路可以概括為四個基本原則，即不傷害原則、有利原則、尊重原則以及公正原則[8]。在解決這些倫理問題之前，我們必須要先確立解決這些倫理問題的基本思路。比如基因藥物，它不僅能根治遺傳性疾病、惡性腫瘤、心腦血管疾病等，甚至人的智力、體魄、性格、外表等亦可隨意加以改造；還有，克隆技術(shù)如果不加限制，任其自由發(fā)展，最終有可能導致人類的毀滅。我國基因工程技術(shù)尚落后于發(fā)達國家，更應當加速發(fā)展，切不可坐失良機。所以，各國政府及一些大公司都十分重視基因工程技術(shù)的研究與開發(fā)應用，搶奪這一高科技制高點?；蚬こ痰陌l(fā)展前景由于基因工程運用DNA分子重組技術(shù)，能夠按照人們預先的設計創(chuàng)造出許多新的遺傳結(jié)合體，具有新奇遺傳性狀的新型產(chǎn)物，增強了人們改造動植物的主觀能動性、預見性。目前國外已有許多公司開始利用基因工程研究生物柴油及其他生物燃料，圣地亞哥藍寶石能源生物科技公司稱，他們有望在2011年前銷售由藻類生產(chǎn)出的“汽油”；科羅拉多州的Solix 生物燃料公司的第一個試點工廠，計劃于今年夏天正式投產(chǎn)營運[7]。此外，將含油微藻作為生物柴油原料，也在逐漸成為一個新的研究領(lǐng)域。9