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正文內(nèi)容

卵母細(xì)胞和胚胎玻璃化冷凍方法-文庫吧資料

2024-10-03 21:40本頁面
  

【正文】 入VS2中,盡量減少帶入VS1。改變卵母細(xì)胞(胚胎)周圍的VS1溶液,直到ES溶液視覺上消失了。玻璃化2—1分鐘內(nèi)用巴斯德管吸入卵母細(xì)胞(胚胎)并放入VS1,在卵母細(xì)胞(胚胎)周圍快速地攪拌5次。然后將胚胎(胚胎)放到VS1中頂部,盡量減少攜帶ES溶液。第四部分 玻璃化這個部分對于卵母細(xì)胞和胚胎都是一樣的,以下1到7步驟應(yīng)在6090秒內(nèi)完成。舉例來說,一個好的胚胎8分鐘完全恢復(fù),平衡步驟已經(jīng)完成。胚泡玻璃化解凍最好的時候是胚胎直徑達到140180ul的時候。胚胎于30秒內(nèi)自由脫落,它會自發(fā)地開始收縮,在ES滲透后,胚胎就會逐漸恢復(fù)到原來的大小,此時平衡步驟就完成了。然后將胚胎放到ES中頂部。用巴斯德管分別取出300ul 溶液,立刻放進復(fù)制板里(看右圖)。在平衡液這個部分,卵母細(xì)胞大小要完全恢復(fù),在卵母細(xì)胞在ES浸泡前,卵黃周隙寬度平均的時候,這個部分就完成了。 卵母細(xì)胞—平衡4 (3分鐘)仿照上個步驟再增加20ul ES溶液到頂部,放置3分鐘。卵母細(xì)胞—平衡3 (3分鐘)調(diào)整秒表(有計算功能),為以下步驟檢查并設(shè)定好秒表。 第三部分 平衡卵母細(xì)胞—平衡1在復(fù)制板邊上分別寫上BS, ,300ul VS1和300ul VS2,放進復(fù)制板里(看下圖)。比較卵黃周隙與透明帶的寬度,并做記錄,這樣更容易知道在ES浸泡后完成平衡液步驟。第二部分 玻璃化準(zhǔn)備1. 將BS、ES和VS放到室溫25℃27℃。(卵母細(xì)胞內(nèi)直徑:140um,胚胎內(nèi)直徑:140200um),盡量減少與玻璃解凍液的接觸以提高解凍后的成活率。質(zhì)量控制測試:每一批安全解凍配套都得到以下測試:*溶液:UPS不孕不育無菌測試(SAL 103) LAL拉爾內(nèi)毒素測試 小老鼠胚胎試驗(一個細(xì)胞)保存方法:*保存于48℃*在標(biāo)簽所示有效日期前,本品性質(zhì)穩(wěn)定。放進37℃的培養(yǎng)箱中完成恢復(fù)。(圖三)4. 用巴斯德管吸起卵母細(xì)胞(胚胎),輕輕地將其放入WS2 頂部,當(dāng)卵母細(xì)胞(胚胎)自動沉到底部的時候
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