不同亞種牛卵母細(xì)胞克隆效率和胚胎移植效果分析-文庫吧資料
2025-01-24 16:19本頁面
【正文】 不同亞種卵母細(xì)胞克隆胚和受體牛組合進(jìn)行胚胎移植效果比較 亞種內(nèi) (黃牛卵母細(xì)胞 — 受體黃牛、奶牛卵母細(xì)胞 — 受體奶牛 )胚胎移植效果顯著高于亞種間 (黃牛卵 母細(xì)胞 — 受體奶牛、奶牛細(xì)胞 — 受體黃牛 )胚胎移 植的效果?？梢姸咝氏喈?dāng)， 統(tǒng)計無顯著差異。 實驗結(jié)果 ? 不同亞種牛卵母細(xì)胞克隆效率比較 可見魯西黃牛來源重構(gòu)胚的 融合率顯著高于荷斯坦奶牛。每日觀察，記錄并計算妊娠率、產(chǎn)犢率，活產(chǎn)率以及非妊娠牛的返情時間。體外培養(yǎng) 6～ 7d，分別記錄卵裂數(shù)和囊胚數(shù)。 胚胎的體外培養(yǎng) ? 將重構(gòu)胚用 TL— Hepes清洗 5遍放入預(yù)先準(zhǔn)備好的鋪有 MEF的培養(yǎng)盤中 (用 CO2已平衡 5 h的含 1％ FBS的 ACM胚胎培養(yǎng)液置換含 10％ FBS的 DMEM— F12細(xì)胞培養(yǎng)液，加石蠟油覆蓋 )，置 CO2培養(yǎng)箱， ℃ ，5％ CO2和 100％ 濕度條件下培養(yǎng)。 供核細(xì)胞與卵母細(xì)胞融合 ? 將 KCCs依次在 TL— Hepes與融合液中進(jìn)行梯度洗滌 (TL— HEPES與融合液的比例為 3： 1， 2： 2， 1： 3)，最后在融合液中平衡后放入融合槽內(nèi)，轉(zhuǎn)動卵母細(xì)胞使供核細(xì)胞與卵母細(xì)胞接觸面與電場垂直，同時在直流脈沖的場強(qiáng)為 ，脈沖時間為 10μs，脈沖次數(shù)為 2次，脈沖間隔為 1s的條件下融合后，在TL— Hepes液中洗 2遍，放入 ACM液中， 2h后觀察融合率，并進(jìn)行下一步激活處理。每注完一批，將 KCCs放入 TL— Hepes中，置于 ℃ 加 熱板上。 ? 核移植前，用 ％ 胰酶消化貼壁細(xì)胞，將消化下來的細(xì)胞用不含血清的 DMEM洗滌 1遍后，用 Pronase酶處理，最后將細(xì)胞重懸于 DMEM中備用。 盲吸法去核 供核細(xì)胞處理 ? 用于核移植的供體細(xì)胞為本所凍存復(fù)蘇
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