20xx年醫(yī)學(xué)專題—卵母細胞和胚胎玻璃化冷凍方法-文庫吧資料
2024-11-19 04:55本頁面
【正文】 入VS2中，盡量減少帶入VS1。改變卵母細胞（胚胎）周圍的VS1溶液，直到ES溶液視覺上消失了。玻璃化2—1分鐘內(nèi)用巴斯德管吸入卵母細胞（胚胎）并放入VS1，在卵母細胞（胚胎）周圍快速地攪拌5次。然后將胚胎（胚胎）放到VS1中頂部,盡量減少攜帶ES溶液。第四部分 玻璃化這個部分對于卵母細胞和胚胎都是一樣的，以下1到7步驟應(yīng)在6090秒內(nèi)完成。舉例來說，一個好的胚胎8分鐘完全恢復(fù)，平衡步驟已經(jīng)完成。胚泡玻璃化解凍最好的時候是胚胎直徑達到140180ul的時候。胚胎于30秒內(nèi)自由脫落，它會自發(fā)地開始收縮，在ES滲透后，胚胎就會逐漸恢復(fù)到原來的大小，此時平衡步驟就完成了。然后將胚胎放到ES中頂部。用巴斯德管分別取出300ul 溶液，立刻放進復(fù)制板里（看右圖）。在平衡液這個部分，卵母細胞大小要完全恢復(fù)，在卵母細胞在ES浸泡前，卵黃周隙寬度平均的時候，這個部分就完成了。 卵母細胞—平衡4 (3分鐘)仿照上個步驟再增加20ul ES溶液到頂部，放置3分鐘。卵母細胞—平衡3 (3分鐘)調(diào)整秒表（有計算功能），為以下步驟檢查并設(shè)定好秒表。 第三部分 平衡卵母細胞—平衡1在復(fù)制板邊上分別寫上BS, ，300ul VS1和300ul VS2,放進復(fù)制板里（看下圖）。比較卵黃周隙與透明帶的寬度，并做記錄,這樣更容易知道在ES浸泡后完成平衡液步驟。第二部分 玻璃化準備1. 將BS、ES和VS放到室溫25℃27℃。（卵母細胞內(nèi)直徑：140um，胚胎內(nèi)直徑：140200um），盡量減少與玻璃解凍液的接觸以提高解凍后的成活率。質(zhì)量控制測試：每一批安全解凍配套都得到以下測試：*溶液：UPS不孕不育無菌測試（SAL 103） LAL拉爾內(nèi)毒素測試 小老鼠胚胎試驗（一個細胞）保存方法：*保存于48℃*在標簽所示有效日期前，本品性質(zhì)穩(wěn)定。放進37℃的培養(yǎng)箱中完成恢復(fù)。（圖三）4. 用巴斯德管吸起卵母細胞（胚胎），輕輕地將其放入WS2 頂部，當卵母細胞（胚胎）自動沉到底部的時候
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