手足口病的實(shí)驗(yàn)診斷-文庫(kù)吧資料
2025-03-02 10:05本頁(yè)面
【正文】 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的診斷意義 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的診斷意義 當(dāng)無(wú)法進(jìn)行病毒分離或未分離到病毒時(shí)，血清學(xué)診斷方法可以作為病毒感染的間接證據(jù)。 從疑為死于 EV71（或其它腸道病毒）的 尸檢標(biāo)本 中檢測(cè)到相應(yīng)的腸道病毒核酸，或分離到病毒或腸道病毒 IgM陽(yáng)性，即可證明是該腸道病毒是病因。 ? 一般采取的原則為： ? （ 1） 病毒分離陽(yáng)性率遠(yuǎn)高于對(duì)照人群； ? （ 2） 病程中有特異性抗體變化并排除其他病毒感染； ? （ 3） 從病變組織中分離出病毒 。 結(jié)果解釋 RTPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果解釋 實(shí)驗(yàn)室診斷原則 ? 人腸道病毒在自然界廣泛存在且種類(lèi)繁多 ， 一病多原 、一原多癥是腸道病毒感染的重要特征 。 RNase Free dH2O 模板RNA AMV逆轉(zhuǎn)錄酶（ 10U/μl） dNTPs（ each） 皰疹液和腦脊液： 直接用于 RNA提取。 病毒核酸檢測(cè) — RTPCR 方法特點(diǎn)： ? 快捷、簡(jiǎn)便 ? 高度靈敏、特異 ? 具有病原診斷意義 ? 高效的通用型技術(shù)平臺(tái) 糞便標(biāo)本： 采用氯仿進(jìn)行處理。 手足口病的診斷一般是通過(guò)采集適當(dāng)?shù)呐R床標(biāo)本后進(jìn)行基因檢測(cè)、抗原檢測(cè)、血清學(xué)抗體檢測(cè)、病毒分離和病鑒定 手足口病的實(shí)驗(yàn)室診斷 手足口病的實(shí)驗(yàn)室診斷方法 ? 病毒分離 ? 抗體檢測(cè) ? 核酸檢測(cè) ? 蛋白 /核酸芯片 標(biāo)本 病毒分離 CPE陽(yáng)性 RTPCR 及序列測(cè)定 腸道病毒 非腸道病毒 測(cè)雙份血清 中和抗體滴度 RTPCR Real time RTPCR 檢測(cè)病毒核酸 序列測(cè)定 無(wú) CPE 常規(guī)實(shí)驗(yàn) 補(bǔ)充實(shí)驗(yàn) 中和定型 手足口病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)流程 病毒分離培養(yǎng) ? 用于病毒分離的標(biāo)本： 包括糞便、咽拭子和皰疹液，如果患者出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，可以采集腦脊液標(biāo)本 ? 適用的細(xì)胞 RD細(xì)胞（人胚胎橫紋肌肉瘤細(xì)胞）、 Hep2細(xì)胞（人喉上皮癌細(xì)胞） 病毒分離培養(yǎng) ? 標(biāo)本的處理 糞便： 2g 加 PBS 10ml，振蕩混勻， 1500g低溫離心20min，上清 咽拭子：于采樣管中充分洗滌拭子， 4℃ 下 10000rpm離心 20min，上清 腦脊液和皰疹液：直接接種 病毒分離培養(yǎng) ? 培養(yǎng)觀察： 36℃ 培養(yǎng)逐日觀察，第 1代培養(yǎng)見(jiàn)可疑 CPE 至觀察滿7天后再繼續(xù)凍融傳代，待穩(wěn)定 CPE出現(xiàn)后 , 20℃ 或 70℃ 凍存以備進(jìn)一步鑒定； 如果 7天之后沒(méi)有出現(xiàn) CPE，需盲傳 2代繼續(xù)觀察，盲傳2代后仍不出現(xiàn) CPE則判定為陰性； ? 鑒定：中和試驗(yàn) 血清抗體檢測(cè) ? 方法 中和實(shí)驗(yàn)、 ELISA ? IgM：?jiǎn)畏菅杭毙云? ? IgG ：雙份血：急性期，恢復(fù)期 ? 陰轉(zhuǎn)陽(yáng)，四倍升高，四倍降低均可診斷近期感染 病毒核酸檢測(cè) — RTPCR RTPCR(Reverse Transcriptase PCR) ? 用于 RNA病毒的檢測(cè)，酶促催化使 RNA逆轉(zhuǎn)錄成 cDNA第一鏈，逆轉(zhuǎn)錄與第一次 PCR在同一系統(tǒng)內(nèi)進(jìn)行，逆轉(zhuǎn)錄完成后，加熱滅活逆轉(zhuǎn)錄酶，
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