王鏡巖生物化學(xué)-第35章dna的重組與基因工程-文庫(kù)吧資料
2025-01-26 22:33本頁(yè)面
【正文】 eering) ? 基因克隆示意圖 目的基因 載體 DNA( 限制性內(nèi)切酶切開(kāi) )宿主細(xì)胞重組體已轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞繁殖陽(yáng)性克隆株 表達(dá) 工具酶 常用的工具酶 限制性核酸內(nèi)切酶 切割 DNA DNA連接酶 生成 3′ 5′磷酸二酯鍵 DNA聚合酶 Ⅰ 探針標(biāo)記、補(bǔ)平 3′末端 反轉(zhuǎn)錄酶 cDNA合成 多聚核苷酸激酶 5′磷酸化、探針標(biāo)記 末端轉(zhuǎn)移酶 3′末端多聚尾 堿性磷酸酶 切除末端磷酸基 （一）重組 DNA技術(shù)的相關(guān)概念 限制性核酸內(nèi)切酶 細(xì)菌限制修飾體系 限制性核酸內(nèi)切酶 甲基化酶 識(shí)別特異的位點(diǎn) —酶切位點(diǎn) 回文結(jié)構(gòu) 4～ 6 bp 出現(xiàn)兩種末端 粘性末端 粘端 平頭末端 平端 配伍末端 G AA TT CC TT AA GE co R ⅠC CC G GGG GGC CCSm a l Ⅰ（一）重組 DNA技術(shù)的相關(guān)概念 目的基因（外源基因） cDNA 逆轉(zhuǎn)錄 基因組 DNA 基因工程的目的 目的基因拷貝 克隆載體 基因表達(dá)產(chǎn)物 表達(dá)載體 目的基因 target DNA （一）重組 DNA技術(shù)的相關(guān)概念 自我復(fù)制 克隆載體、表達(dá)載體 原核載體 ：質(zhì)粒 (pBR322,pUC… ）噬菌體（ λ， M13） 真核載體 ：動(dòng)物病毒載體 pLXSN 質(zhì)粒 — 存在于細(xì)菌染色體外的小型環(huán)狀雙鏈 DNA分子 理想的質(zhì)粒 。Chapter35 DNA的重組與基因工程 基因重組與基因工程 ？ Geic rebination Chapter35 DNA的重組與基因工程 一、 DNA的重組的分類(lèi) 同源重組、特異位點(diǎn)重組和轉(zhuǎn)座重組等類(lèi)型 二、自然界的基因轉(zhuǎn)移和重組 自然界的基因轉(zhuǎn)移和重組是無(wú)目的 基因工程有目的 基因重組 (geic rebination)— — 整段DNA在細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞間 ,甚至不同物種間進(jìn)行交換 ,并能在新的位置上復(fù)制 ,轉(zhuǎn)錄和翻譯。 Chapter35 DNA的重組與基因工程 二、自然界的基因轉(zhuǎn)移和重組 結(jié)合作用 結(jié)合作用 —— 質(zhì)粒 DNA從一個(gè)細(xì)胞（細(xì)菌）轉(zhuǎn)移至另一個(gè)細(xì)胞（細(xì)菌） 轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)導(dǎo)作用 （ 1）轉(zhuǎn)化作用 transformation
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