實(shí)驗(yàn)一植物組織總dna的提取及dna的濃度測定4學(xué)時-文庫吧資料
2025-01-23 03:51本頁面
【正文】 度的測定南京曉莊學(xué)院生物實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心（ 1）葉片磨得 越細(xì)越好 。l蒸餾水至比色杯，進(jìn)行紫外光空白測定，然后倒掉蒸餾水，加入 200 181。l蒸餾水稀釋。南京曉莊學(xué)院生物實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心稱取樣品，液氮研磨，加入預(yù)熱的 (65℃ ) CTAB及 β巰基乙醇 保溫 1h,期間不停的搖均吸取上清液 ,移至新的離心管中 ,加入等體積氯仿：異戊醇（ 24： 1），輕緩顛倒混勻 ,10000rpm,10min 取上清液，移至新的離心管中 ,加等體積氯仿：異戊醇 ,顛倒混勻 , 10000rpm,10min取上清液，加入 （預(yù)冷），后 4 ℃ /20 ℃ 保溫沉淀10000rpm,10min離心取沉淀， 70%乙醇清洗兩次，吹干用 TE溶解 DNA,然后低溫保存南京曉莊學(xué)院生物實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心 取提取的 DNA溶液 2 181。l 75%的乙醇，將 DNA再洗 30 min；南京曉莊學(xué)院生物實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心（ 13） 10000 rpm離心 30 sec后，立即倒掉液體，將離心管倒立于鋪開的紙巾上；數(shù)分鐘后，直立離心管，干燥 DNA（自然風(fēng)干或用風(fēng)筒吹干）；（ 14）加入 50 181。l的 75%乙醇及 80 181。l的2%CTAB抽提緩沖液，輕輕攪動；(4) 將磨碎液分倒入 ml的滅菌離心管中，磨碎液的高度約占管的三分之二；(5) 置于 65℃ 的水浴槽或恒溫箱中，每隔 10 min輕輕搖動 ，40 min后取出；1. DNA的提取 南京曉莊學(xué)院生物實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心（ 6）冷卻 2 min后，加入氯仿 異戊醇（ 24： 1）至滿管，劇烈振蕩 2~3 min，使兩者 混合均勻 ；（ 7）放入離心機(jī)中 10 000 rpm離心 10 min，與此同時，將 600 181。 2% CTAB抽提緩沖溶液，異丙醇 , 氯仿 異戊醇等南京曉莊學(xué)院生物實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心 CTAB法流程圖植物材料 裂解液上層溶液液氮研磨 抽提細(xì)胞裂解 干燥溶解離心洗滌異丙醇沉淀DNA溶液南京曉莊學(xué)院生物實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心
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