dna的粗提取與鑒定-文庫吧資料
2024-07-28 18:25本頁面
【正文】 核的破裂。 然后，用放有 紗布的漏斗 將血細胞液過濾至 500mL。） ①過程 ② 檸檬酸鈉作用 防止血液凝固 ③ 作用機理 檸檬酸鈉能與血漿中的 Ca2+發(fā)生反應，生成檸檬酸鈣絡合物，血漿中游離的 Ca2+大大減少，血液就不會凝固 . 雞血細胞破碎以后釋放出的 DNA，容易被玻璃容器吸附，所以在提取過程中為了減少DNA的損失，最好使用塑料的燒杯和試管盛放雞血細胞液 . ④注意事項 討論：提取雞血中的 DNA時，為什么 除去血液中的上清液？ 答：血液分為兩部分，一部分是血漿，一部分是血細胞，離心后除去的上清液是血漿 . 方法步驟 將制備好的雞血細胞液 5 mL～ 10mL，注入到 50 mL燒杯中。實驗時。將燒杯中的血液臵于冰箱內(nèi)，精臵一天，使血細胞自行沉淀。 課前準備雞血細胞液 取質(zhì)量濃度為 0． 1g/ml的 檸檬酸納溶液（抗凝劑） 100ml，臵于 500ml燒杯中。 實驗材料和用具： 雞血細胞液（ 5~10ml）；體積分數(shù)為 95%的冷酒精溶液（實驗前臵于冰箱內(nèi)冷卻 24h）；蒸餾水；質(zhì)量濃度為 0．１ g/ml的檸檬酸納溶液；務質(zhì)量的濃度分別為 2mol/L和0． 015mol/L的氯化納溶液；二苯胺試劑。利用這一原理，可以進一步提取出含雜質(zhì)較少的 DNA。利用這一原理，可以使溶解在 NaCl溶液中的 DNA析出?；旌暇鶆蚝?，將試管臵于沸水中加熱 5min,待試管冷卻后，比較兩只試管中溶液顏色的變化，看看溶解有 DNA的溶液是否有 藍色． 案例：以雞血為實驗材料進行 DNA的粗提取 三、實驗案例 ②雞血細胞極易吸水脹破，而用動物肝臟細胞作實驗材料常常需要勻漿和離心，對設(shè)備要求較高，操作繁瑣，歷時較長 雞血細胞做實驗材料的原因 ①雞血細胞核的 DNA含量豐富，材料易得 實驗原理 ① DNA在 NaCl溶液中的溶解度，是隨著 NaCl的濃度的變化而改變的。因此，通過反復溶解與析出 DNA，就能夠除去與 DNA溶解度不同的多種雜質(zhì) . 討論：方案二與方案三的原理有什么不同？ 答：方案二是利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白，從而使提取的 DNA與蛋白質(zhì)分開；方案三利用的是 DNA和蛋白質(zhì)對高溫耐受性的不同，從而使蛋白質(zhì)變性，與 DNA分離 . （四） DNA的析出與鑒定 DNA的析出用的是與濾液體積相等的 冷卻的酒精溶液（體積分數(shù)為 95 ％） ，靜臵 2－3min，溶液中會出現(xiàn) 白色絲狀物， 這就是粗提取 DNA。 C以上才會變性 ③洗滌劑可以溶解細胞的細胞膜，去除脂質(zhì)和蛋白質(zhì) ,但對 DNA沒有影響 DNA的鑒定 ① DNA與二苯胺（沸水浴）會染成藍色，
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