16基因工程和蛋白質工程-文庫吧資料
2025-01-18 23:56本頁面
【正文】 提供了重要的條件，即將一種外源基因與質粒重組后，再轉入細菌中去復制繁殖，使外源基因得以增殖。 研究比較深入的質粒有大腸桿菌的性因子（ F因子）、大腸桿菌素因子和抗藥因子等 抗藥因子（質粒）在其 DNA上編碼有某些酶的基因，表達產生的酶對鏈霉素、氯霉素、磺胺、青霉素、四環(huán)素、卡那霉素等藥物能產生生物化學修飾，使之鈍化而失效 ——染色體以外的遺傳單元 質粒的作用 質粒 DNA能從細菌中提出來，又能再轉入細菌。 ?限制性內切酶切割 DNA的方式 （ 5’3’鏈）和對稱軸左邊（ 3’5’鏈）切開 從識別序列的中間切開產生平齊末端（ bluntends）， 如 HaeⅢ 即分別在 5’3’鏈和 3’5’鏈對稱軸的左右方切開 ，形成帶有凸出的 5’磷酸基團的粘性末端（ Cohesive ends）， 如 EcoRⅠ （ 5’3’鏈）和對稱軸左邊（ 3’5’鏈）切開 形成帶有凸出的 3’羥基的粘性末端，如 pstI ——分離法及合成法 （ 1） DNA片段的直接提取 （ 2）用噬菌體或質粒直接從宿主細胞中將目 的基因攜出 （ 3）使用相應的 mRNA分離基因 二、基因載體 ——染色體以外的遺傳單元 ——感染細菌的病毒 質粒是一種環(huán)狀雙鏈的 DNA分子。名稱后的羅馬數(shù)字，表示在該特殊菌株中發(fā)現(xiàn)此酶的先后次序。 限制性內切酶的命名 用細菌同名的第一個字母（大寫）和種名的前兩個字母（小寫）構成酶的基本名稱。 基因工程 是 1973年由美國斯坦福大學科恩和舊金山大學醫(yī)學院的博耶創(chuàng)立的概念 第二節(jié) 基因工程 DNA重組 的 技術路線 Foreign DNA to be inserted Plansmid vector Joining Rebinant DNA molecule Introduction into host cells by transformation Host chromateme Slection for cells coteining a rebinant DNA molecule Cloning + 目的基因的制備 載體 的構建 目的基因與載體的重組 重組 體 導入 宿主細胞進行擴增 克隆基因的鑒定 一、目的基因的獲得 二、基因載體 三、重組 DNA的篩選及表達 一、目的基因的獲得 ——特異性切割 DNA的手術
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