【正文】 缺 2 缺 3 缺 414kb10kb直接診斷：檢測已知致病基因 Normal βΑGene Probe—— 與正常與正常 βΑ雜交雜交Mutation βS Gene Probe—— 與異常與異常 βS雜交雜交 βΑ/βΑ βΑ/βS βS/βS 正常探針 突變探針 Gene 缺失遺傳病的診斷? 1） α 地貧的 Gene診斷? α 基因不同程度的缺失引起不同類型的 α 地貧， α 基因缺失 1～ 4個。 Β地中海性貧血基因診斷（ PCRASO） 已知突變已知突變 Gene部位和性質(zhì)，合成寡和苷酸部位和性質(zhì)，合成寡和苷酸探針，探針， 32P標記，進行標記，進行 Southern Blot 雜交雜交 /斑斑點雜交。PCRASO斑點雜交或反向斑點雜交等技術(shù)。突變基因鐮狀紅細胞貧血患者基因組的限制性酶切分析PCRRE分析 MstII CCTGAGGCCTGTGG+﹣正常人 突變攜帶著 患者鐮狀紅細胞貧血患者基因組的限制性酶切分析? ：（ 2）無限制性酶切位點改變 直接診斷：檢測已知致病基因正常基因5180。鐮狀紅細胞貧血 HBSBeta株蛋白基因突變：5180。? 針對異常血紅蛋白病如鐮刀狀紅細胞貧血癥是由于 ?珠蛋白 基因的第 6位密碼子 GAG突變成 GTG， 導致蛋白結(jié)構(gòu)異常。? ：? （ 1）導致特異性限制性內(nèi)切酶位點改變 直接診斷：檢測已知致病基因? 血紅蛋白病可以由血紅蛋白結(jié)構(gòu)或合成異常所致的遺傳性疾病。第四節(jié) 遺傳病的基因診斷第四節(jié) 遺傳病的基因診斷直接診斷：檢測已知致病基因遺傳病的基因診斷是進行產(chǎn)前檢查和癥狀前診斷的唯一選擇，也是遺傳病預防最為有效的手段。第三節(jié) 基因診斷的應用前景 RFLP分析（ 20世紀 80年代 ）基因診斷的發(fā)展歷史第三節(jié) 基因診斷的應用前景基因診斷過程中存在的問題 遺傳病的基因診斷是在基因水平上對核酸堿基序列突變的檢測，從遺傳物質(zhì)的分子水平上揭示疾病的發(fā)生原因和分子機制。第二節(jié)對不同疾病采用不同基因診斷的策略對一些因基因表達異常出現(xiàn)的疾病，可通過基因表達的定量分析進行基因診斷。原理：從分析正常和異?；蚪M采用差異顯示等技術(shù)找到正常人和疾病患者之間的差異序列，進行克隆。第二節(jié)對不同疾病采用不同基因診斷的策略如高血壓、冠心病、腫瘤、精神病、自身免疫性疾病，由于疾病發(fā)生的原因復雜，涉及多基因、多因素。 如：用限制性內(nèi)切酶位點作為遺傳標記，利用該遺傳標記與相鄰的基因在遺傳過程中分離幾率很低，常常一起遺傳，形成連鎖特點，建立了染色體基因連鎖圖，根據(jù)基因連鎖圖，通過分析連鎖基因的遺傳標記，可判斷致病基因存在的可能性。 如：病原微生物的感染：病毒、細菌、寄生蟲、真菌等，及與疾病有關(guān)的機體內(nèi)源性基因：癌基因、抑癌基因、病理基因。 以大量已知序列的寡核苷酸、cDNA或基因片段作探針，檢測樣品中哪些核酸序列與其互補，然后通過定性、定量分析得出待測樣品的基因序列及表達的信息第二節(jié)對不同疾病采用不同基因診斷的策略 人類疾病多種多樣，致病原因不同，因此在基因診斷上也有不同途徑和策略。 將競爭模板作系列稀釋后，加入到恒量的樣品 DNA進行 PCR， 通過分離和分析競爭模板與樣品 DNA產(chǎn)量，對樣品 DNA進行定量分析。 競爭 PCR 與前述方法相似，即靶基因與參考標準在同一反應管中共同擴增，但參照標準通常是一段人工合成的模板而不是內(nèi)源性基因。即在同樣的反應條件下，在一個試管內(nèi)同步擴增來自同一 DNA 的一段靶序列和另一段內(nèi)標序列 (通常是管家基因或它們的 mRNA)。然后對該稀釋系列進行 PCR擴增測定 。缺點：不準確，影響因素多。優(yōu)點：簡單，可作粗糙的定量分析。如果在該標準稀釋系列范圍內(nèi)，擴增產(chǎn)物 /模板成線性相關(guān)，則可推導出同時擴增的待測樣本中 PCR模板的相對量 .161。PCR擴增的平臺效應梯度（系列）稀釋法：161。效應（ plateau?PCR定量分析方法有： 梯度（系列）稀釋法、 極限稀釋法、非競爭性對照法、競爭抑制法 、 熒光定量 PCR采用 PCR技術(shù)進行靶核酸的定量分析PCR擴增有限性 平臺期及平臺甲基化特異性 PCR技術(shù)（ MSPCR ）?以上介紹的基于 PCR擴增技術(shù)建立的基因診斷技術(shù)，只能提供定性結(jié)果，即有無突變。甲基化特異性 PCR技術(shù) 將 DNA先用亞硫酸鹽處理，這樣未甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)槟蜞奏?，而甲基化的不變，隨后行引物特異性的 PCR。 如在一般正常的細胞中，基因調(diào)控區(qū) CPG島處于非甲基化狀態(tài)，而當細胞發(fā)生癌變后，這些區(qū)域往往呈現(xiàn)甲基化狀態(tài)。 該技術(shù)是先制備濃度從低到高的變性劑的凝膠，然后將待測分析的 PCR擴增產(chǎn)物進行電泳，到 DNA電泳到變性劑濃度能使 DNA發(fā)生變性的位置時， DNA雙鏈分開，由于不同 DNA片段的堿基組成不同，因此在凝膠中泳動發(fā)生變性的位置不同，遷移率也不同，因此可以將相同長度但堿基組成不同的 DNA片段分開，從而能檢測出基因的突變。對長度相同而構(gòu)象不同的單鏈 DNA在非變性聚丙烯胺凝膠電泳中表現(xiàn)出不同的遷移率。 DNA經(jīng)變性形成單鏈后，在中性條件下單鏈 DNA會因其分子內(nèi)堿基之間的相互作用，形成一定的立體構(gòu)象。是將探針固定在膜上成為固定相，用 PCR產(chǎn)物作為液體相，進行雜交實驗。 PCR/ASO則是采用 PCR擴增受檢者基因的目標片段，并與相應的 ASO探針雜交，如果受檢者 DNA擴增的產(chǎn)物與正常探針雜交，而不與突變探針雜交，表示受檢者不存在突變基因；如果只有突變探針可以雜交，說明突變基因為純合子；如果兩者都存在，則說明突