【正文】 3?N N N N NP5? 3?+AdPP +[?An 3’ mRNAT T T T 5’ cDNAT T T T 5’GGGGGGGG T T T T 5’5’CCCC A A AAOligo(dT)引物反轉(zhuǎn)錄酶dNTPOligo (dC) 引物Taq DNA 聚合物（或 Klenow 片段）dNTP去除 mRNA鏈加 oligo(dG)末端轉(zhuǎn)移酶cDNA雙鏈全長雙鏈 cDNA的合成5’5’3’3’3’3’ DNA連接酶(ligase)AAAA3′→5′ 外切酶活性（又稱 RNA酶 H活性），特異性降解 RNADNA雜交分子中的 RNA部分（ 4）末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶（末端轉(zhuǎn)移酶 , terminal transferase）催化作用： 在二價陽離子存在下，它催化 dNTP加到 DNA分子的 3′羥基端。DNA)。(transcriptase)PCR）中對 DNA分子的特定序列進(jìn)行體外擴增（ 3）反轉(zhuǎn)錄酶 chain1988年 saiki在嗜熱水生菌 (thermusDNA聚合酶切口平移反應(yīng)，制備高比活探針； 5′→3′ 外切酶活性主要用途 :5′→3′DNA 聚合酶活性216。 末端脫氧核糖核酶轉(zhuǎn)移酶（末端轉(zhuǎn)移酶）(1)DNA聚合酶167。 大腸桿菌 DNA聚合酶 Ⅰ 及其大片斷（ Klenow片段）167。polymerases）能合成 DNA的酶稱 DNA聚合酶。 – modification甲基化酶與相關(guān)的 II型限制性內(nèi)切酶組成，它們識別相同序列，發(fā)揮不同功能。構(gòu)建基因組圖譜和文庫限制與修飾系統(tǒng)（ DNA雜交與序列分析pGCT5′II型限制性內(nèi)切酶的用途：IGCT5′3′AGC5′TCGpCGA3′5′TCG以 NruACGTC5′產(chǎn)生平末端（ blunt　 PstOHG3′I為例：　 IG5′OHAATTC3′AATTC3′I為例：３ ’－突出粘性末端限制性核酸內(nèi)切酶三種切口 ?產(chǎn)生 5′突出粘性末端（ stickystickend端、三種不同的切口：平末 (blunt216。識別序列４～６個堿基， 4個核苷酸序列，則每４ ４ （２５６）個堿基出現(xiàn)一個靶序列； 6個核苷酸序列出現(xiàn)的間隔是 4kb, 如一種菌株中有多種限制性內(nèi)切酶，用羅馬數(shù)字表示發(fā)現(xiàn)分離的先后順序。 第二、三字母（小寫，斜體），示該酶微生物種 名；216。I， EcoR II， EcoR V216。R株中幾種限制酶：　　　 、甲基化vIIbp)、甲基化、 ATP酶和 DNA解旋；vIII型：內(nèi)切 (識別位點周圍 2530分類vIendonuclease）或單鏈 DNA分子的 3’－ OH末端 加上同聚物尾以 RNA為模板合成互補的 cDNA鏈催化將把一個磷酸分子加到多核苷酸鏈的 切口平移反應(yīng)，制備高比活探針； 催化形成磷酸二酯鍵連接成一個整體在 DNA分子內(nèi)部的特異性的堿基序列內(nèi)部進(jìn)行切割(alkaline堿性磷酸酶 terminalDNA末端轉(zhuǎn)移酶(reversekinase)polymeraseDNA聚合酶 Iligase)(restriction限制性內(nèi)切核酸酶 工 具酶：系 指能用于 DNA和 RNA分子的切割，連接，聚合，反轉(zhuǎn)錄等有關(guān)的酶 系 統(tǒng)稱為工具酶 。 基因結(jié)構(gòu)、結(jié)構(gòu)功能及調(diào)控研究的基礎(chǔ)；167。 縮短進(jìn)化時間；167。（二）重組 DNA技術(shù)的意義167。engineering），遺傳工程 （ geictechnology)： 是指實現(xiàn)基因（或 DNA）克隆所采用的方法及技術(shù)路線等。重組 DNA技術(shù) (rebinant(cloning)，基因克?。?gene又稱 分子克隆 )獲取這一群體的過程稱為 克隆化（cloning）DNA克隆 (DNA（一）有關(guān) DNA克隆的相關(guān)概念克?。?clone） :有人提出人基因組編碼的約 6萬種蛋白質(zhì)是從幾千個獨立的外顯子混編而來。）：產(chǎn)生許多新功能的蛋白質(zhì)外顯子混編是生物進(jìn)化的一個重要過程，得益于真核生物 DNA編碼序列的組織方式：斷裂基因含有長長的內(nèi)含子，含有許多的重復(fù)序列，并處于外顯子的兩側(cè)。Exon轉(zhuǎn)座子組成： 反向重復(fù)序列轉(zhuǎn)座酶編碼基因抗生素抗性等有用的基因IR IRTransposase—— 可從一個染色體位點轉(zhuǎn)移到另一位點的分散重復(fù)序列。結(jié)構(gòu)外，還帶有抗性或其他標(biāo)記基因。發(fā)生形式： 保守性轉(zhuǎn)座 (conservative transposition) 復(fù)制性轉(zhuǎn)座 (duplicative transposition)167。repeats）組成。由轉(zhuǎn)座酶（ transposase）、一個分離的反向重復(fù)序（invertedsequence， IS(轉(zhuǎn)座重組分類：167。 由插入序列和轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移或重排。RSS)。signal9核苷酸序列重組信號序列（ RSS）重排機制：重鏈 (IgH)基因的 VDJ重排和輕鏈 (IgL)基因的 VJ重排均發(fā)生在特異位點上。12/23間隔序列 核苷酸序列 ACAAAAACC加入復(fù)合物，切割七核苷酸序列位點等 RAG1activatingCACAGTG此重排的重組酶基因 ragACAAAAACCCACAGTG?Chain ?Chain HChain23 12231223 12spacertoheptamernonamer,inareplementaryelementsTheseimmunoglobulingenestothatvariableregionbelowaboveareConsensusgeneformanyofsinglearestatesThetherighttoisBofanizationtheleft,onisgermlineanizationsegments.immunoglobulinofTheVLJV mRNAHin重組酶 H1鞭毛素(b)h1hinhin h2 阻遏基因 rh1H片段倒位h1H2與阻遏基因 mRNAHin重組酶 H2鞭毛素 阻遏蛋白(a)（二）細(xì)菌的特異位點重組沙門氏菌 H片段 特異位點重組 (倒位 )決定鞭毛相轉(zhuǎn)變DNAH片段216。216。attL attR整合 切除216。BOP180。excisionasePOP180。factor,integrationintegrase,site,attPattBE. coli DNAInt, IHF Int, IHF , Xis? DNA噬菌體 DNA的整合和切除att:LTR)。 terminalλ噬菌體的整合酶識別噬菌體和宿主染色體的特異靶位點發(fā)生選擇性整合；216。拼接重組體 位點特異性重組： 由整合酶催化，在兩個DNA位點特異的短序列之間發(fā)生的切割和連接反應(yīng) :l?3180。5180。5180。3180。切開的鏈并非原來斷裂的鏈，重組體異源雙鏈區(qū)的兩側(cè)來自不同親本 DNA。片段重組體拼接重組體 （見模型圖 左 邊產(chǎn)物）：3180。3180。5180。5180。（見模型圖 右 邊產(chǎn)物）： rebinant)片段重組體Holliday模型同源重組步驟① 兩個同源染色體 DNA排列整齊② 一個 DNA的一條鏈斷裂、并與另一個 DNA對應(yīng)的鏈連接，形成 Holliday中間體③ 通過