基因表達(dá)和基因重組-文庫吧資料
2025-01-11 17:44本頁面
【正文】 于： 限制性內(nèi)切酶切割產(chǎn)生的平端 粘端補(bǔ)齊或切平形成的平端 目的基因 載體 限制性內(nèi)切酶 限制性內(nèi)切酶 T4 DNA連接酶 15186。C GATCC G G CCTAG + 目的基因用 Bam HⅠ 切割 GCC TA GGCC TA GGATCCGGATCCG載體 DNA用 Bam HⅠ 切割 GCC TA GGCC TA GGA TC CGGA TC CG重組體 GCC TA GGCC TA GGA TC CGGA TC CGGCC TAGCC TAGA TC CGGA TC CG載體自連 目的基因自連 同一限制酶切位點(diǎn)連接 不同限制酶切位點(diǎn)（非配伍末端）的連接 GAATT CCT TAAG AGA TCTTC TAGAEco RⅠ 切割位點(diǎn) GCTTAAATCTAGA ATTCGGATCTABg lⅡ 切割位點(diǎn) AATTC GATC TAGA ATTCGGATCTAAATTC G ATC TAG+ EcoRⅠ + Bg lⅡ 雙酶切 Eco RⅠ + Bg lⅡ 雙酶切 GCTTAAATCTAGA ATTCGGATCTAT4 DNA連接酶 15186。 DNA文庫 (genomic DNA library) 3. cDNA文庫 (cDNA library) 4. 聚合酶鏈反應(yīng) (polymerase chain reaction, PCR) （見第 22章） * 化學(xué)合成法獲取目的基因 由已知氨基酸序列推測可能的 DNA序列 組織或細(xì)胞染色體 DNA 基因片斷 克隆載體 重組 DNA分子 含重組分子的轉(zhuǎn)化菌 限制性內(nèi)切酶 受體菌 基因組 DNA文庫 存在于轉(zhuǎn)化細(xì)胞內(nèi)由克隆載體所攜帶的所有基因組 DNA的集合 * 從基因組 DNA文庫獲取目的基因 cDNA文庫 以 mRNA 為模板，利用反轉(zhuǎn)錄酶合成與 mRNA互補(bǔ)的 DNA，再復(fù)制成雙鏈 cDNA，與適當(dāng)載體連接后轉(zhuǎn)入受體菌，即獲得 cDNA文庫。 經(jīng)改造后具有 多克隆位點(diǎn) 。 具有 自我復(fù)制 功能。 常用載體 質(zhì)粒 DNA、噬菌體 DNA、病毒 DNA 宿主細(xì)胞 基因載體 載體的選擇標(biāo)準(zhǔn) ? 能自主復(fù)制； ? 具有兩個(gè)以上的遺傳標(biāo)記物，便于重組體的篩選和鑒定； ? 有克隆位點(diǎn)（外源 DNA插入點(diǎn)）即多個(gè)單一酶切位點(diǎn)； ? 分子量小，以容納較大的外源 DNA。 克隆載體 (cloning vector)為使插入的外源 DNA序列被擴(kuò)增而特意設(shè)計(jì)的載體。 基因組 DNA： 代表一個(gè)細(xì)胞或生物體整套遺傳信息的所有DNA序列。 編碼某種蛋白質(zhì) 研究某基因結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系 研究某基因與疾病的關(guān)系 按照人的愿望設(shè)計(jì)和建造非天然的基因表達(dá)體系。 這兩個(gè)相同的粘性末端稱為 配伍未端 (patible end)。 命名 Hin dⅢ 屬 系 株 序 Haemophilus influenzae d株 流感嗜血桿菌 d株的第三種酶 Ⅱ 類酶識別序列特點(diǎn) —— 回文結(jié)構(gòu) (palindrome) 切口 ： 平端切口 、 粘端切口 GGATCC CCTAGG Bam HⅠ GTC CAG G CCTAG GATCC G + GGATCC CCTAGG HindⅡ GTCGAC CAGCTG GAC CTG + 平端切口 粘端切口 同功異源酶 來源不同的限制酶 ， 但能識別和切割同一位點(diǎn) ， 這些酶稱 同功異源酶 。 GGATCC CCTAGG
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1