現(xiàn)代生物科技專題-文庫吧資料
2025-01-09 02:09本頁面
【正文】 DNA— DNA （二）其次，還需要檢測目的基因是 否轉(zhuǎn)錄出了 mRNA 這是檢測目的基因是否 發(fā)揮功能 的 第一步 檢測方法是 采用分子雜交技術(shù) DNA— mRNA —— 檢查是否成功 檢測 — 鑒定 —— ①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的 DNA 上是否插入了目的基因 ②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了 mRNA ③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì) 抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等 方法 —— 方法 —— 方法 —— DNA分子雜交 分子雜交 （注意與上不同之處） 抗原抗體雜交 四、篩選出獲得目的基因的受體細胞 DNA分子雜交示意圖 采用一定的技術(shù)手段，將兩種生物的 DNA分子的單鏈放在一起，如果這兩個單鏈具有互補的堿基序列，那么，互補的堿基序列就會結(jié)合在一起，形成雜合雙鏈區(qū)；在沒有互補堿基序列的部位，仍然是兩條游離的單鏈。 非編碼序列： 包括非編碼區(qū)和內(nèi)含子 原核細胞 真核細胞 不同點 編碼區(qū)是 _____的 編碼區(qū)是間隔的、 _____的 相同點 都由能夠編碼蛋白質(zhì)的 ______和具有調(diào)控作用的 ______區(qū)組成的 原核細胞與真核細胞的基因結(jié)構(gòu)比較 思考 編碼相同數(shù)目氨基酸的蛋白質(zhì)，原核細胞與真核細胞基因結(jié)構(gòu)一樣長嗎？ 連續(xù) 不連續(xù) 編碼區(qū) 非編碼 三、轉(zhuǎn)化受體細胞 轉(zhuǎn)化 —— 方法 將目的基因?qū)? 植物細胞 將目的基因?qū)? 動物細胞 將目的基因?qū)? 微生物細胞 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 基因槍法 花粉管通道法 —— 顯微注射法 —— 用鈣離子處理細胞（感受態(tài)細胞） 目的基因進入 _________內(nèi)，并且在 受體細胞內(nèi)維持 _____和 _____的過程 受體細胞 穩(wěn)定 表達 將目的基因?qū)胫参锛毎? （ 1）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 雙子葉植物中常用方法 （ 2）基因槍法 （ 3）花粉管通道法 單子葉植物常用的轉(zhuǎn)化方法，成本較高 我國獨創(chuàng)的轉(zhuǎn)化方法 如：我國的轉(zhuǎn)基因抗蟲棉 三、轉(zhuǎn)化受體細胞 書 P16 顯微注射技術(shù) 注入的是 含有目的基因的表達載體 是轉(zhuǎn)基因動物中采用最多、最有效的一種將目的基因?qū)雱游锛毎姆椒ā? ：能轉(zhuǎn)錄相應的信使 RNA，能 編碼蛋白質(zhì) 編碼區(qū) 非編碼區(qū) 原核細胞的 基因結(jié)構(gòu) ②有調(diào)控遺傳信息表達的核 苷酸序列，在該序列中， 最重要的是位于編碼區(qū)上 游的 RNA聚合酶結(jié)合位點。 轉(zhuǎn)錄完畢后， RNA鏈釋放出來，緊接著 RNA聚合酶也從 DNA模板鏈上脫落下來。 二、制備重組 DNA分子 —— 核心 ______處， 再加入適量 ___________，形成了一個重組 DNA分子（重組質(zhì)粒） 限制性核酸內(nèi)切酶 黏性末端 同一種限制性核酸內(nèi)切酶 的黏性末端 切口 DNA連接酶 相同 質(zhì)粒 DNA分子 限制酶處理 一個切口 兩個黏性末端 兩個切口 獲得目的基因 DNA連接酶 重組 DNA分子（重組質(zhì)粒） 同一種 : 二、制備重組 DNA分子 復制原點 +目的基因 +啟動子 +終止子 +標記基因 它們有什么作用？ 二、制備重組 DNA分子 補：原核細胞的基因結(jié)構(gòu) 非編碼區(qū) 非編碼區(qū) 編碼區(qū) 編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游 與 RNA聚合酶結(jié)合位點 啟動子 終止子 RNA聚合酶能夠識別調(diào)控序列中的結(jié)合位點，并與其結(jié)合。 人工合成 一、目的基因的獲取 _________切割 質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個切 口，露出 ____________。 c、延伸 （ 72℃ ）：在 Taq酶的作用下，從引物 的 5′ 端 →3′ 端 延伸，合成與模板互補 的 ________。 認真閱讀 13頁圖 16，討論： 目的基因是什么？ 受體細胞是什么？ 基因表達產(chǎn)物是什么？ 土壤農(nóng)桿菌在其中可能起什么作用？ 從基因文庫中獲取 將含有某種生物不同基因的許多 DNA片段，導入受體菌的群體中儲存，各個受體菌分別含有這種生物的不同的基因，稱為基因文庫。 其他載體 噬菌體、動植物病毒 在基因工程操作中，真正被用作載體的質(zhì)粒，都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進行過人工改造的。 作用 將外源 DNA攜帶進受體細胞后， 停留在細胞中進行自我復制 或 整合到染色體上 ，隨染色體 DNA進行同步復制。 三、基因進入受體細胞的 載體 —— “分子運輸車” 通常以質(zhì)粒作為載體 質(zhì)粒 —— 細菌細胞中一種很小的環(huán)狀 DNA分子。 （ 2） DNA聚合酶是 以一條 DNA為模板 ，將單個核苷酸通過形成磷酸二脂鍵形成一條與摸板互補的DNA鏈；而 DNA連接酶是將雙鏈上的兩個缺口同時連接起來。 G A A T T C C T T A A G 即脫氧核糖、磷酸基之間的連接 G P A P 分類 DNA連接酶 —— 只能將雙鏈 DNA片段互補的 黏性末端之間連接起來， 不能將雙鏈 DNA平末端之間進行連接 T4 DNA連接酶 —— 既可將雙鏈 DNA片段互補的 黏性末端之間連接起來， 也能將雙鏈 DNA平末端之間進行連接，但連接平末端的效率比較低 尋根問底 ： DNA連接酶和 DNA聚合酶是一回事嗎？為什么？ 不是。所以， 限制性核酸內(nèi)切酶在原核生物中主要起到切割外源 DNA、使之失效，從而保護自身的作用。 尋根問底 ： 根據(jù)你掌握的知識，你能推測這類酶存在于原核生物中的作用是什么嗎？ 原核生物容易受到自然界外源 DNA的入侵，但是生物在長期的進化過程中形成了完善的防御機制，以防止外來病原物的侵害。生物 選修 3 現(xiàn)代生物科技專題 標志： 1973年重組 DNA技術(shù)的誕生 目 錄 ?專題 1 基因
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