分子生物學(xué)-03復(fù)制-文庫吧資料
2025-01-01 03:39本頁面
【正文】 DNA聚合酶 III全酶分子、引發(fā)體和螺旋構(gòu)成的類似核糖體大小的復(fù)合體。到達(dá)前一岡崎片段時停止。如果后續(xù)鏈模板環(huán)繞DNA聚合酶 III全酶，并通過 DNA聚合酶 III，然后再折向與未解鏈的雙鏈 DNA在同一方向上，則后續(xù)鏈的合成可以和前導(dǎo)鏈的合成在同一方向上進(jìn)行。另外，全酶中還有 ATP分子它是 DNA聚合酶 Ⅲ 催化第一個脫氧核糖核苷酸連接在 RNA引物上所必需的，其他亞基的功能尚不清楚?！?39?！?39。全酶中所有亞基對完成 DNA復(fù)制都是必需的。這兩種機(jī)制保證了無論是環(huán)狀 DNA還是開環(huán) DNA的復(fù)制順利的解鏈。 引發(fā)過程： ? DNA螺旋酶首先在復(fù)制起點(diǎn)處將雙鏈DNA解開 ? 合成 RNA引物分子，分開雙鏈 DNA鏈 ? 單鏈 DNA結(jié)合蛋白 (SSB)結(jié)合在被解開的鏈上 ? 復(fù)制因子 X(n蛋白 )，復(fù)制因子 Y(n‘蛋白 )，n“蛋白， i蛋白， dnaB蛋白和 dnaC蛋白等6種蛋白質(zhì)組成的引發(fā)前體(preprimosome)，與單鏈 DNA結(jié)合生成中間物 ? 引發(fā)前體與引物酶 (primase)組裝成引發(fā)體 (primosome) ? 引發(fā)體在單鏈 DNA上移動，在 dnaB亞基的作用下識別 DNA復(fù)制起點(diǎn)位置 ? 引發(fā)體首先在前導(dǎo)鏈上合成 RNA引物，然后在后續(xù)鏈上沿 5‘→3’ 方向不停的移動，在一定距離上反復(fù)合成 RNA引物。 轉(zhuǎn)錄激活 (transcriptional activation) ： RNA聚合酶沿后續(xù)鏈模板轉(zhuǎn)錄一短的 RNA分子，分開 DNA雙鏈；特定序列與引發(fā)體結(jié)合，并在前導(dǎo)鏈模板 DNA上開始合成 RNA引物的過程。 前導(dǎo)鏈 (leading strand)的復(fù)制引發(fā)過程中還需要其他一些蛋白質(zhì)參與，如大腸桿菌的 dna A蛋白。 B．真 核生物 DNA連接 酶 五、 DNA復(fù)制過程 1 復(fù)制的引發(fā) (Priming) 包括 DNA復(fù)制起點(diǎn)雙鏈打開， RNA引物的合成， DNA聚合酶聚合反應(yīng)開始進(jìn)行。 需要 ATP參與提供能量 。 可連接 DNADNA， DNARNA，RNARNA和雙鏈 DNA粘性末端或平頭末端。在 DNA復(fù)制、修復(fù)和重組中起著重要的作用。OH生成磷酸二酯鍵。 DNA polymerases in human and SV40 6 DNA連接 酶 (DNA lygase) 催化 DNA鏈的 539?！?39?！?39。 (4) DNA聚合酶 δ，與原核生物的聚合酶類似，具有 3‘→5’ 核酸外切酶活性。 (2) DNA聚合酶 b， 45kD，單鏈，主要修復(fù)核內(nèi) DNA?！?39?！?39?！?39。 外切酶活性要求有單鏈 DNA為起始作用底物，但一旦開始后，便可作用于雙鏈區(qū)。 3‘→5’ 外切酶活性的最適底物是單鏈?zhǔn)?DNA； 539。 B． DNA聚合酶 II (DNA pol II) DNA復(fù)制所必需的酶；多種亞基，每個細(xì)胞中 1020個分子。 外切酶活性。 外切酶活性，但無 539。 催化特性： (1)補(bǔ)平作用：最適模板為雙鏈 DNA中間有空隙的單鏈 DNA部分； (2)具有 339。 ? 除了聚合酶活性外， DNA Pol I酶還具有： （ 1） 3‘ →5 ’外切酶活性 （ 2） 5‘→3’ 外切酶活性 ? DNA聚合酶活性和 5‘→3’ 外切酶活性協(xié)同作用，可以進(jìn)行缺口平移 (Nick translation)。 ? 109kD多肽，每個細(xì)胞有約 400分子。 引物酶與一般 RNA聚合酶的區(qū)別： （ 1）對雷米封不敏感，而 RNA聚合酶則敏感； （ 2）可以利用核糖核苷酸和脫氧核糖核苷酸
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