分子生物學-03復制(編輯修改稿)
2025-01-15 03:39 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ll)中 。 B．真 核生物 DNA連接 酶 五、 DNA復制過程 1 復制的引發(fā) (Priming) 包括 DNA復制起點雙鏈打開， RNA引物的合成， DNA聚合酶聚合反應開始進行。 轉(zhuǎn)錄激活 (transcriptional activation) ： RNA聚合酶沿后續(xù)鏈模板轉(zhuǎn)錄一短的 RNA分子，分開 DNA雙鏈；特定序列與引發(fā)體結(jié)合，并在前導鏈模板 DNA上開始合成 RNA引物的過程。 前導鏈 (leading strand)的復制引發(fā)過程中還需要其他一些蛋白質(zhì)參與，如大腸桿菌的 dna A蛋白。 五、 DNA復制過程 1 復制的引發(fā) (Priming) 包括 DNA復制起點雙鏈打開， RNA引物的合成，DNA聚合酶聚合反應開始進行。 轉(zhuǎn)錄激活 (transcriptional activation) ： RNA聚合酶沿后續(xù)鏈模板轉(zhuǎn)錄一短的 RNA分子，分開 DNA雙鏈；特定序列與引發(fā)體結(jié)合，并在前導鏈模板 DNA上開始合成 RNA引物的過程。 RNA引物可能與減少 DNA復制起始處的突變有關(guān)。 引發(fā)過程： ? DNA螺旋酶首先在復制起點處將雙鏈DNA解開 ? 合成 RNA引物分子，分開雙鏈 DNA鏈 ? 單鏈 DNA結(jié)合蛋白 (SSB)結(jié)合在被解開的鏈上 ? 復制因子 X(n蛋白 )，復制因子 Y(n‘蛋白 )，n“蛋白， i蛋白， dnaB蛋白和 dnaC蛋白等6種蛋白質(zhì)組成的引發(fā)前體(preprimosome)，與單鏈 DNA結(jié)合生成中間物 ? 引發(fā)前體與引物酶 (primase)組裝成引發(fā)體 (primosome) ? 引發(fā)體在單鏈 DNA上移動，在 dnaB亞基的作用下識別 DNA復制起點位置 ? 引發(fā)體首先在前導鏈上合成 RNA引物，然后在后續(xù)鏈上沿 5‘→3’ 方向不停的移動，在一定距離上反復合成 RNA引物。 DNA復制的延伸 由 DNA聚合酶 III催化 ? 正超螺旋的解除 （ 1） DNA解鏈而產(chǎn)生正超螺旋可以被原來存在的負超螺旋所中和； （ 2） DNA拓撲異構(gòu)酶 I可以打開一條鏈，使正超螺旋狀態(tài)轉(zhuǎn)變成松弛狀態(tài)；而 DNA拓撲異構(gòu)酶 II（旋轉(zhuǎn)酶）可以在DNA解鏈前方不停地繼續(xù)將負超螺旋引入雙鏈 DNA。這兩種機制保證了無論是環(huán)狀 DNA還是開環(huán) DNA的復制順利的解鏈。 ? DNA生長鏈的延伸主要由 DNA聚合酶 III催化，由 7種多肽組成。全酶中所有亞基對完成 DNA復制都是必需的。 α亞基具有聚合功能和 539。→339。 外切酶活性， ε亞基具有 339。→539。 外切酶活性。另外，全酶中還有 ATP分子它是 DNA聚合酶 Ⅲ 催化第一個脫氧核糖核苷酸連接在 RNA引物上所必需的，其他亞基的功能尚不清楚。 ? 在 DNA復制叉處要能由兩套 DNA聚合酶 III在同一時間分別進行復制 DNA前導鏈和后續(xù)鏈。如果后續(xù)鏈模板環(huán)繞DNA聚合酶 III全酶，并通過 DNA聚合酶 III，然后再折向與未解鏈的雙鏈 DNA在同一方向上，則后續(xù)鏈的合成可以和前導鏈的合成在同一方向上進行。 ? 當 DNA聚合酶 III沿著后續(xù)鏈模板移動時，遇到 RNA引物后就開始延伸合成。到達前一岡崎片段時停止。復制叉繼續(xù)向前運動，產(chǎn)生了又一后續(xù)鏈岡崎片段。 ? DNA復制體 (replisome)：在復制叉附近，形成了以兩套DNA聚合酶 III全酶分子、引發(fā)體和螺旋構(gòu)成的類似核糖體大小的復合體。復制體在 DNA前導鏈模板和后續(xù)鏈模板上移動時便合成了連續(xù)的 DNA前導鏈和由許多岡崎片段組成的后續(xù)鏈。 ? 在 DNA合成延伸過程中主要是 DNA聚合酶 III的作用。當岡崎片段形成后， DNA聚合酶 I通過其 539?！?39。 外切酶活性
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