基因工程部分復(fù)習(xí)-文庫吧資料
2024-10-13 15:42本頁面
【正文】 ，顯然如果需要從某一種專一抗體，需要首先從某個(gè)特定的 B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)大量細(xì)胞克隆，然后體外培養(yǎng)。 4）細(xì)胞融合途徑 ① 滅活病毒誘導(dǎo)：融合率較低，重復(fù)性不夠高 ② 化學(xué)誘導(dǎo)融合：用聚乙二醇（ PEG）介導(dǎo) ③ 電融合：將懸浮細(xì)胞在低壓交流電場(chǎng)（ 100～200v/cm）中聚集成串珠狀細(xì)胞群，或?qū)⑴囵B(yǎng)細(xì)胞形成單層接觸，然后加高壓電脈沖（ 1～, 脈沖寬 0～ 100μs），導(dǎo)致胞間細(xì)胞質(zhì)溝通，造成細(xì)胞融合。 教材： P61～ 68 3）、技術(shù)過程 ① 原生質(zhì)體制備 : 主要針對(duì)植物細(xì)胞和微生物細(xì)胞 ② 誘導(dǎo)細(xì)胞融合：可以通過三種途徑誘導(dǎo)兩種細(xì)胞融合在一起。 B 培養(yǎng)方式： 實(shí)驗(yàn)室：采用小搖瓶和小轉(zhuǎn)瓶形式 工業(yè)化生產(chǎn)（大規(guī)模培養(yǎng)）：通氣攪拌罐 （四）、動(dòng)物細(xì)胞融合和單細(xì)胞克隆等技術(shù)簡(jiǎn)介 1 細(xì)胞融合技術(shù) 1）、定義 細(xì)胞融合：兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞融合成一個(gè)雙核或多核細(xì)胞的現(xiàn)象 2）分類 同源融合細(xì)胞：基因型相同的細(xì)胞形成的融合細(xì)胞。 A 培養(yǎng)對(duì)象：極少數(shù)原代細(xì)胞適合懸浮培養(yǎng)，僅有造血細(xì)胞系、嚙齒類的腹水和小細(xì)胞肺癌。 B 營養(yǎng)要求 開始的培養(yǎng)基主要是全血清培養(yǎng)基，但由于血清的缺陷，目前開發(fā)無血清培養(yǎng)基是細(xì)胞培養(yǎng)的主要方向。細(xì)胞株具有特殊的表型性質(zhì)。一旦原代細(xì)胞進(jìn)行了傳代培養(yǎng)即成為細(xì)胞系。 ?一般情況下，非致死細(xì)胞可直接轉(zhuǎn)化為連續(xù)細(xì)胞，可以連續(xù)增殖；而其他細(xì)胞需要經(jīng)過環(huán)境適應(yīng)（如嚙齒動(dòng)物細(xì)胞）、雜交或基因修飾才能轉(zhuǎn)化為連續(xù)細(xì)胞。 獲得原代細(xì)胞是一系列細(xì)胞培養(yǎng)的第一步 獲得原代細(xì)胞的步驟： 解剖分離 培養(yǎng)液淋洗和切成碎片 再淋洗 酶法分離成單個(gè)細(xì)胞 離心分離后再培養(yǎng) B 連續(xù)化培養(yǎng) ? 大多數(shù)細(xì)胞系在有限的代數(shù)內(nèi)以不變的形式增殖，當(dāng)超過有限世代后，它們可能有兩種情況，一是衰老死亡，二是發(fā)育成永久細(xì)胞系或稱連續(xù)細(xì)胞系。大多數(shù)細(xì)胞屬于這類細(xì)胞。這種細(xì)胞包括癌細(xì)胞、表皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。但當(dāng)被放到新鮮培養(yǎng)基中，細(xì)胞重新生長(zhǎng)。 4）、動(dòng)物克隆技術(shù)的建立 1962年，英國學(xué)者 Grudon把非洲爪蟾小腸上皮細(xì)胞的核注入同種或異種非洲爪蟾未受精卵 (經(jīng)紫外線照射殺死卵細(xì)胞核 )中，約有 1％的重組卵發(fā)育成為成熟蛙。 1975年，免疫學(xué)家 Kohler和 Milstein利用仙臺(tái)病毒誘導(dǎo)綿羊紅細(xì)胞免疫的小鼠脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合，選擇到能分泌單一抗體的雜種細(xì)胞。 3）、細(xì)胞融合技術(shù)的建立和雜交瘤技術(shù)的誕生 1958年 , Okada發(fā)現(xiàn)紫外滅活仙臺(tái)病毒可引起艾氏腹水瘤細(xì)胞彼此融合。 1914年， Thomson建立了器官培養(yǎng)技術(shù)。 教材： P53～ 56 二、動(dòng)物細(xì)胞工程 （一）、動(dòng)物細(xì)胞研究歷史進(jìn)展和
環(huán)評(píng)公示相關(guān)推薦
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