microbialgenetics3細菌和放線菌的基因重組和遺傳分析-文庫吧資料
2024-08-29 01:35本頁面
【正文】 經(jīng)培養(yǎng)以后，可以看到出現(xiàn)了中央長有細菌的噬菌斑。 ? 抗性細菌不帶有噬菌體并且對噬菌體不敏感， ? 敏感細胞不帶有噬菌體同時對于噬菌體是敏感的， ? 溶源性細菌本身帶有噬菌體而對于外來的噬菌體則不敏感。但是一般大約 102～103細菌中才有一個進行自發(fā)釋放，而經(jīng)處理后釋放噬菌體的細菌可多達 90％。 ? 1)溶源性細菌和非溶源性細菌相區(qū)別 ? 溶源性細菌經(jīng)紫外線、絲裂霉素 C等處理后會大量地釋放噬菌體。 ? 前兩種是親本組合，后兩種是重組類型 大腸桿菌噬菌體 T4的一個三點測交 (二 ) 溫和噬菌體 ? 1 裂解反應和溶源化反應 ? 溶源性細菌失去了它的原噬菌體后就成為非溶源性細菌。 寄主范圍突變型 h (hr+)和快速溶菌突變型 r (h+r)噬菌體對寄主細菌 B進行混合感染 ? 把釋放出來的噬菌體接種在混合指示菌上。 ? 把 h和 h+噬菌體和大量的野生型細菌和抗 T2細菌混合接種。 突變型的噬菌斑 ? r突變型的噬菌斑比野生型的噬菌斑大而且邊緣清晰， ? m突變型的噬菌斑比野生型的噬菌斑較小而邊緣模糊， ? h突變型能在抗野生型噬菌體的細菌上形成噬菌斑。 ? 為了檢測噬菌體中的基因重組，首先必須要有突變型。 ? 噬菌體 T1的單菌釋放量多數(shù)是 100～ 200。 ? 經(jīng) 30min培養(yǎng)后將每一樣品混合大量敏感細菌涂在培養(yǎng)基上。 ? 從感染到噬菌斑數(shù)上升前的一段時間稱為潛伏期，從圖 T4的潛伏期是 24min。 2 一級生長實驗和單菌釋放實驗 ? 一級生長實驗：將噬菌體和細菌以 1： 10混合以保證每一噬菌體都有感染細菌的機會。 ? LT22帶有 P22溫和噬菌體 ,可以自由通過濾板。 ? 4）供體菌和受體菌 ： ? 供體菌： ? Hfr： strsthr+leu+azisT1slac+gal+ ? 受體菌 ： ? F strrthrleuazirT1rlacgal ? 將 4 108Hfr和 2 107 F對數(shù)期細菌混合，培養(yǎng)。 ? 這種在接合的特定時間內(nèi)人為的中斷雜交以測定重組子基因型的的方法稱 中斷雜交實驗 。 中斷雜交（ interrupted mating）技術 1957年由 wollman和 Jacob首次進行中斷雜交實驗 1)利用 Hfr F的接合過程，在不同時間取樣，并把樣品猛烈攪拌以分散接合中的細菌，然后分析 受體 細菌基因型，以時間 (分鐘 )為單位繪制遺傳圖譜，該圖譜是細菌染色體上基因順序的直接反映。 Mechanism of F’ x F Crosses F’ F’ F’ F’ F’ F F’ F oriT 5′P 3′OH 三、中斷雜交試驗及基因定位 ? 基因定位： 通過遺傳重組等手段確定不同的基因在染色體上的位置及相對距離，從而獲得遺傳圖譜。 3） F180。細胞。 F接合作用中， F180。 供體的缺口被封閉 受體中的 D N A 成環(huán)圖 12 － 3 8 F 因子 D N A 的轉(zhuǎn)移 ( 仿 B . L ew i n : 《 G E N E S 》Ⅵ , 1 9 9 7 ， Fi g 1 4 . 2 2 )滾環(huán)復制 滾環(huán)復制的電鏡照片 ② Hfr F Crosses chromosome Hfr strain integrated F plasmid F plasmid integration Formation of Hfr strain F+ strain Mechanism of Hfr x F Crosses 缺刻螺旋酶 Hfr部分基因組轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移頻率比 F+ F高 1000倍以上，為高頻重組 轉(zhuǎn)移時首先在 oriT開始，然后小部分 F因子，接著染色體基因組，最后是大部分 F因子， Hfr全部基因組轉(zhuǎn)移很難，所以 Hfr F仍為 F細胞。 合成互補鏈 3 39。T raY / I 多體在環(huán)上移動， D N A 解鏈 單鏈進入受體 3 39。 3 39。 (二 )細菌接合的三種方式 F plasmid donor cell (F+) F pilus The Fpilus is used for cellcell attachment recipient cell (F) chromosome chromosome ① F+ F Crosses replication and transfer of ssDNA F+ exconjugant F+ Note that the recipient cell bees F+ oriT 胞質(zhì)橋 ① F因子一條單鏈在 oriT（轉(zhuǎn)移和合成位點）打開， 5 ′端通過通道進入受體 ②受體細胞和供體細胞中兩個單鏈采取滾環(huán)復制， F因子全部轉(zhuǎn)移。 ? 接合第二步： F因子在復制同時通過胞質(zhì)橋通道進入受體細胞。 二 、 F 因子與接合作用 （一）接合作用條件 ：兩種菌 接觸 、供體菌含有 F因子 （致育因子） F因子 ? F因子是一種獨立于染色體之外的遺傳因子，為質(zhì)粒 。 回復突變的排除 若要發(fā)生兩種突變的回復突變，其幾率為 10－ 12， 這是不可能的。 Lederberg 和 Tatum將培養(yǎng)過一種營養(yǎng)缺陷型細菌的培養(yǎng)基經(jīng)過滅菌、過濾，然后加入到另一營養(yǎng)缺陷型菌培養(yǎng)物中。 接合作用的證明 轉(zhuǎn)化作用的排除 由于在報道接合試驗結(jié)果之前轉(zhuǎn)化實驗已經(jīng)是眾所周知，因此有人懷疑該結(jié)果是由轉(zhuǎn)化所導致的。 ? 共轉(zhuǎn)指數(shù) = a+b+ ／（ a+b+ ab+ +a+b+） ? 共轉(zhuǎn)指數(shù)越大，兩個基因相距越近 . 7類轉(zhuǎn)化子 3個基因相對位置？ 共轉(zhuǎn)指數(shù) =a+b+ ／ (a+b+ ab+ +a+b+) 共轉(zhuǎn)指數(shù)越大，兩個基因相距越近 . ?
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