【正文】 單鏈進(jìn)入受體 3 39。細(xì)胞。 ? 這種在接合的特定時間內(nèi)人為的中斷雜交以測定重組子基因型的的方法稱 中斷雜交實驗 。 ? 從感染到噬菌斑數(shù)上升前的一段時間稱為潛伏期，從圖 T4的潛伏期是 24min。 突變型的噬菌斑 ? r突變型的噬菌斑比野生型的噬菌斑大而且邊緣清晰， ? m突變型的噬菌斑比野生型的噬菌斑較小而邊緣模糊， ? h突變型能在抗野生型噬菌體的細(xì)菌上形成噬菌斑。 ? 1)溶源性細(xì)菌和非溶源性細(xì)菌相區(qū)別 ? 溶源性細(xì)菌經(jīng)紫外線、絲裂霉素 C等處理后會大量地釋放噬菌體。 2 溫和噬菌體和寄主細(xì)菌在生理上的關(guān)系 ① 用某一菌株的細(xì)菌所釋放的 λ去感染同一菌株的細(xì)菌時出斑率是 1； ②不論從哪一菌株的細(xì)菌釋放的 λ去感染細(xì)菌 C時出斑率都是 1； ③用它們感染 K12r或 Br時出斑率也是 l； ④但是凡是用從一株大腸桿菌所釋放的 λ去感染另一株大腸桿菌時，出斑都是 104或更低； ⑤用 K12(P1)細(xì)菌所釋放的 λ去感染 K12細(xì)菌時出斑率是 1； ⑥而用 K12細(xì)菌所釋放的 λ去感染 K12(PI)時出斑率只有 2 105。 ? λ ? 環(huán)化的 λDNA 分子以其附著位點 attp和染色體同源部分 attb位點配對交換 ,整合到到寄主染色體上 ,位于 gal和 bio基因之間 ? 與寄主同步復(fù)制 原噬菌體 E. coliλ噬菌體 gal bio gal bio gal bio gal bio gal bio bio attp attb λDNA分子脫離寄主染色體 ? 經(jīng)過 UV誘導(dǎo) , λ 脫離寄主 ,脫離方式有三種 : ? 正常脫離、向左偏離、向右偏離 ? 整合噬菌體 λ 發(fā)生錯誤脫離幾率一般僅有 106 ? 得到轉(zhuǎn) 導(dǎo) 噬菌體的頻也僅有 106 ? 因為 λ 失去部分自身基因 int和 xis與整和相關(guān)基因 ,因此多不能自我復(fù)制 ,只能依靠錯誤脫離產(chǎn)生的 106個 ,故為 屬于低頻轉(zhuǎn)導(dǎo) . 3） 低頻轉(zhuǎn)導(dǎo)類型 ? 穩(wěn)定轉(zhuǎn)導(dǎo)： λdg 攜帶的 gal基因與受體突變的 gal發(fā)生交換， gal與寄主一起復(fù)制，為穩(wěn)定遺傳 。 ? 由于細(xì)菌 DNA任何部分都有可能被包裝， 因此這種噬菌體的轉(zhuǎn)導(dǎo)作用稱 普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)。所以，只能在選擇性培養(yǎng)基平板上形成一個微小菌落（即其中只有一個細(xì)胞是轉(zhuǎn)導(dǎo)子）。雜合核有兩套染色體，供體染色體不完整，受體的完整。 ? 在轉(zhuǎn)移過程中 ，轉(zhuǎn)移的兩個方向隨時發(fā)生斷裂，每個細(xì)胞得到 NF不同片段。第二次交換發(fā)生在 a區(qū)，所得染色體包括幾乎全部 UF基因。 ? 2） F+ F+和 Hfr Hfr不可育 , NF NF 和 IF IF部分可育。 ? 鏈霉菌基因重組 方式 接合作用。 受體菌進(jìn)行分裂時，只有一個子細(xì)胞獲得這段 DNA，另一子細(xì)胞僅獲得供體基因的產(chǎn)物 — 酶，在表型上出現(xiàn)供體菌的某一特征。 4)高頻轉(zhuǎn)導(dǎo) ： 局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)存在的另外一種轉(zhuǎn)導(dǎo)方式 : λdg和 λ同時感染寄主 (gal)， λ首先整合到受體染色體上， λdg通過單交換整和 , 由于 λ能提自我供復(fù)制的所有條件 ,因此 λdg和 λ均能夠大量復(fù)制 ,誘導(dǎo)后兩者都可以成熟，從細(xì)胞中釋放出來 .其中 50%的轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體 可轉(zhuǎn)導(dǎo) gal。 普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體 1）許多溫和噬菌體和某些烈性噬菌體感染供體菌后，在裂解過程中錯誤包裝產(chǎn)生的 . 2）噬菌體包裹的主要為供體 DNA 3）以鼠傷寒沙門氏菌 P22和大腸桿菌 P1為代表 二、轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體的類型 Potentially any donor gene can be transferred 供體菌 受體菌 recipient cell transducing particle general rebination transductant recipient chromosome 局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體 ? 1）溫和噬菌體感染供體菌后先經(jīng)過溶源反應(yīng)整合，再經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的 ? 2） 大腸桿菌溫和噬菌體 λ 和φ80 ? 3）攜帶很少供體 DNA prophage (integrated bacterial virus) improper excision donor cell (lysogen) transducing particles viral replication chromosome 三、 細(xì)菌轉(zhuǎn)導(dǎo)的過程 ? 1局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)（ specialized transduction） ? 1）定義：以噬菌體為媒介，只能使供體的 一個或少數(shù)幾個基因 轉(zhuǎn)移到受體的轉(zhuǎn)導(dǎo)作用稱局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)。可是它去感染別種細(xì)菌時出斑大為下降，說明每一種細(xì)菌有它特有的限制修飾系統(tǒng)，為一種細(xì)菌所修飾的 DNA只能避免被這種菌的限制酶所分解，可是不能避免為另一種細(xì)菌的限制酶所分解。 ? 在涂滿敏感細(xì)菌的培養(yǎng)皿上接種少量溶源性細(xì)菌并經(jīng)培養(yǎng)以后，可以看到出現(xiàn)了中央長有細(xì)菌的噬菌斑。 ? 前兩種是親本組合，后兩種是重組類型 大腸桿菌噬菌體 T4的一個三點測交 (二 ) 溫和噬菌體 ? 1 裂解反應(yīng)和溶源化反應(yīng) ? 溶源性細(xì)菌失去了它的原噬菌體后就成為非溶源性細(xì)菌。 ? 為了檢測噬菌體中的基因重組，首先必須要有突變型。 2 一級生長實驗和單菌釋放實驗 ? 一級生長實驗：將噬菌體和細(xì)菌以 1： 10混合以保證每一噬菌體都有感染細(xì)菌的機會。 中斷雜交（ interrupted mating）技術(shù) 1957年由 wollman和 Jacob首次進(jìn)行中斷雜交實驗 1)利用 Hfr F的接合過程，在不同時間取樣，并把樣品猛烈攪拌以分散接合中的細(xì)菌，然后分析 受體 細(xì)菌基因型，以時間 (分鐘 )為單位繪制遺傳圖譜，該圖譜是細(xì)菌染色體上基因順序的直接反映。 F接合作用中， F180。 3 39。 回復(fù)突變的排除 若要發(fā)生兩種突變的回復(fù)突變，其幾率為 10－ 12， 這是不可能的。 外源 DNA(a和 b基因 )轉(zhuǎn)化 遺傳學(xué)圖譜的繪制 ? 如果確定了兩個共轉(zhuǎn)化基因存在連鎖關(guān)系，可以根據(jù) 共轉(zhuǎn)化頻率 來進(jìn)行基因定位 . ? 同一染色體片段兩個基因位置越近，共轉(zhuǎn)化頻率越高。 He 利用 Gene gun轉(zhuǎn)化 DNA 二、轉(zhuǎn)化作用過程 受體細(xì)胞感受態(tài)出現(xiàn) 轉(zhuǎn)化因子的吸附和滲入