【正文】 時(shí)間 加水量 空白項(xiàng) (mg/g)1 1 1 20 1 2 1 2 40 2 3 1 3 60 3 4 2 1 20 3 5 2 2 60 1 6 2 3 40 2 7 3 1 60 2 8 3 2 40 3 9 3 3 20 1 K1 乙醇K2 醇浸K3 出物R 得率SS 3 。按照統(tǒng)計(jì)學(xué)中正交試驗(yàn)方法 ,我們采用L3 的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案進(jìn)行試驗(yàn)。2制法：金銀花的提取分離工藝見下述產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)部分、試劑與試藥 紫外分光光度計(jì)；型號(hào):TU—1800S；北京普析通用儀器公司電子分析天平型號(hào):AE240（梅特勒 —托利多集團(tuán)）；C對(duì)照品（河南大學(xué)天然藥物化學(xué)研究所提供） 金銀花采用水煎煮、濃縮的生產(chǎn)工藝 ,我們對(duì)此煎煮條件進(jìn)行篩選。1名稱、漢語(yǔ)拼音 康脂素 KANG ZHI SU本品主要成分是金銀花提取分離化合物，有調(diào)血脂之功效。 [原料藥材]金銀花：上述鑒別方法是采用薄層色譜法，將原料藥材與金銀花對(duì)照藥材進(jìn)行展開，顯色對(duì)比。 測(cè)定法: 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5～10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。 對(duì)照品溶液的制備: 精密稱取C對(duì)照品適量，置棕色量瓶中，加50％甲醇制成每1ml含4μg的溶液，即得（10℃以下保存）。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn): 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；％磷酸溶液（13：87）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為327nm。重金屬以及有害元素 照鉛、鎘、砷、汞、銅測(cè)定法（附錄Ⅸ B原子吸收分光光度法或附錄ⅨD電感耦合等離子體質(zhì)譜法）測(cè)定，鉛、鎘、砷、汞、銅分別不能超過(guò)千分之五、千分之三、千分之二、千分之二、百萬(wàn)分之二十。水分 照水分測(cè)定法（附錄Ⅸ H第二法）測(cè)定，%總灰分 %（附錄Ⅸ K）。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。另取化合物C對(duì)照品，加甲醇制成每 1ml含 1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。氣清香，味淡、微苦?；ㄝ嗑G色，先端5裂，裂片有毛，長(zhǎng)約2mm。表面黃白色或綠白色，貯久色漸深，密被短柔毛。:我國(guó)大部地區(qū)均產(chǎn)，而以山東產(chǎn)量最大，河南產(chǎn)的質(zhì)量較佳。3康脂素質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草說(shuō)明[名稱]金銀花。：化合物C能有效降低小鼠TC、TG、HDL、LDL，并且降脂效果非常顯著，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)任何的毒性作用，為高效低毒類藥物，非常有開發(fā)價(jià)值，根據(jù)《中藥非臨床安全性研究概論》要求，金銀花為藥食同源類中藥，安全性高，在金銀花中提取得到的化合物C經(jīng)過(guò)動(dòng)物毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)任何毒副作用，所以按照有關(guān)要求，臨床前研究只需要急性毒性實(shí)驗(yàn)和長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)數(shù)據(jù)。表5病理組織學(xué)檢查比較：從總體看30d 喂養(yǎng)試驗(yàn)化合物C對(duì)大鼠生長(zhǎng)發(fā)育無(wú)不良影響, 血常規(guī)、血清生化指標(biāo)均在正常值范圍內(nèi), 病理學(xué)檢查未見特異性病變。見表1 30d 后血紅蛋白含量、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)均正常值范圍內(nèi)(P) 各劑量組臟體比指標(biāo)與對(duì)照組比較物顯著性差異（P）　大體標(biāo)本檢查未發(fā)生明顯病變, 因此僅選正常對(duì)照組及高劑量組作組織病理學(xué)檢查。：金銀花3 個(gè)劑量組喂養(yǎng)的大鼠毛質(zhì)白, 有光澤, 外觀形態(tài)與陰性對(duì)照組比較無(wú)區(qū)別, 也無(wú)死亡現(xiàn)象。: 臟體比、大體觀察及病理組織檢查。：動(dòng)物的一般表現(xiàn)、體重。實(shí)驗(yàn)期間觀察動(dòng)物形態(tài), 每周稱重, 記錄飼料消耗量。：動(dòng)物按體重隨機(jī)分成4組, 每組22只,雄雌各半。BM 2V I生物組織冷凍包埋機(jī)。：樣品化合物C，實(shí)驗(yàn)用SD 大鼠由河南醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，體重范圍: 60g75g。：一般情況下，動(dòng)物精神狀態(tài)良好，灌胃前后無(wú)明顯不良反應(yīng)。：小鼠連續(xù)觀察三天后，第四天給小鼠化合物C 。：昆明種小鼠20只(雌雄各半)，由河南省醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。如下表2表2各組小鼠血清膽固醇(TG)水平的比較(X土s)組別樣品數(shù)量TG值(mmol\l)空白組10模型組10陽(yáng)性對(duì)照組10A10B9C9D10E8F10結(jié)論：化合物C有明顯降低小鼠血清甘油三脂，并且降脂可以降到正常水平 六個(gè)化合物對(duì)低密度脂蛋白膽固醇（LDL）對(duì)和高密度脂蛋白膽固醇（HDL）的影響模型組血清低密度脂蛋白膽固醇（LDL）明顯高于空白組(P),模型組血清LDL值明顯高于藥物C組(P)，模型組和藥物A、B、D、E、F組的血清LDL值沒(méi)有顯著性差異（P）, 藥物C組和空白組的血清LDL值沒(méi)有明顯差異(P)。見表1表1各組小鼠血清膽固醇(TC)水平的比較(X土s)組別樣品數(shù)量TC值(mmol\l)空白組10模型組10陽(yáng)性對(duì)照組10A10B9C9D10E8F10結(jié)論：化合物C由明顯降低小鼠血清總膽固醇，并且降脂可以降到正常水平。，所有給藥組小鼠的大便、小便明顯增多，飲食尚可，灌胃前后無(wú)明顯不良反應(yīng)。:磷烏酸一鎂沉淀法。:用酶終點(diǎn)法測(cè)定。:包括飲食、大小便及精神狀態(tài)的變化等。 給藥方法小鼠造模的第一天開始灌胃，試驗(yàn)藥和陽(yáng)性對(duì)照藥按照上述方法進(jìn)行配制給藥，\g的生理鹽水，劑量按人與小鼠體表面積折算，每日一次，連續(xù)10天。 實(shí)驗(yàn)步驟：隨機(jī)將60只小鼠分成九組:空白組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、化合物A組、化合物B組、化合物C組、化合物D組，化合物E組、化合物F組，每組10只. 喂養(yǎng)與護(hù)理空白組小鼠給予普通飼料(購(gòu)自河南醫(yī)學(xué)研究動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心)，其余各組給予高脂飼料。 試驗(yàn)檢測(cè)試劑：膽固醇(TC)試劑盒、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDLC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDLC)試劑盒。 實(shí)驗(yàn)藥物：將分離得到的六個(gè)單體化合物分別用CMCNa混懸，低溫保存，待用。該化合物有很好的體內(nèi)研究?jī)r(jià)值。LGL177。D177。B177。C177。BHA177。177。177。177。177。177。177。177。SD)Trolox當(dāng)量(μmol/g）(X177。177。177。177。SD)Trolox當(dāng)量(μmol/g）(X177。177。25177。LGL177。177。F177。177。177。177。177。50177。177。177。C177。177。177。B177。177。177。g/ml）RACT5181。g/ml）A 值(X177。177。177。25177。177。177。5177。177。177。177。g/ml）RACT50181。g/ml）A 值(X177。3177。3177。3177。3177。3177。3177。3177。3177。3177。177。3177。3177。3177。3177。3177。3177。3177。3177。3177。3177。3177。SD)抑制率（%）IC50（181。注：“N”為樣本數(shù)表2 化合物清除DPPH自由基的半數(shù)抑制濃度No.樣本數(shù)(N)終濃度（181。3177。3177。BHT3177。3177。3177。BHA3177。3177。3177。g/ml）PG3177。g/ml）A 值(X177。若所測(cè)定樣品吸光度值超過(guò)線性范圍，則需要進(jìn)一步稀釋樣品。 （3）FRAP方法將樣品用甲醇配制成一系列濃度， ml新鮮配制的TPTZ工作液，混勻，37℃反應(yīng)30 min后測(cè)定593 nm處吸光度。每份樣品平行操作3次，取平均值。按照以下公式計(jì)算自由基清除率： DPPH radical scavenging rate(%) = [（AcontrolAsample）/Acontrol]100式中，Acontrol為DPPH本身在測(cè)定波長(zhǎng)的吸收，Asample為樣品對(duì)DPPH作用后的吸收度數(shù)值（除去樣品自身吸收）。（1）DPPH方法將樣品用甲醇配制成一系列濃度， ml DPPH甲醇溶液（ mmol/L），混勻，30 min后測(cè)定515 nm處吸光度； ml甲醇+ ml DPPH溶液混勻測(cè)定吸光度。 圖2 ABTS及其自由基結(jié)構(gòu) Structure of ABTS and its free radical（3）FRAP方法及原理FRAP方法的原理：在低pH值的溶液中，F(xiàn)e3+三吡啶三啞嗪（tripyridyltriazine，TPTZ）可被抗氧化劑還原為二價(jià)鐵形式，呈現(xiàn)出明顯的藍(lán)色，并在593 nm處有最大吸收，根據(jù)吸光度的大小計(jì)算出抗氧化活性的強(qiáng)弱。在ABTS?+的最大吸收波長(zhǎng)（一般選擇734 nm）處檢測(cè)吸光度的變化。當(dāng)有供氫能力的抗氧化劑存在時(shí)，孤對(duì)電子被配對(duì)，吸收消失或減弱，而吸光度變小的程度與自由基被清除的程度呈定量關(guān)系，因而可用分光光度法進(jìn)行定量分析。 體外實(shí)驗(yàn)研究（1）DPPH方法及原理DPPH法是20世紀(jì)50年代提出來(lái)的，最初用于發(fā)現(xiàn)食品中的供氫體，后來(lái)廣泛用于定量測(cè)定酚類物質(zhì)、黃酮類物質(zhì)、香辛料類、食品、水果和揮發(fā)油等的抗氧化能力。易溶于氯仿、乙酸乙酯H2NMR(400 MHz ,CDCl3 ) :1(1H