【正文】 第 23 頁 結(jié)論：化合物 C有明顯降低小鼠血清甘油三脂，并且降脂可以降到正常水平 六個化合物對低密度脂蛋白膽固醇（ LDL）對和高密度脂蛋白膽固醇（ HDL）的影響 模型組血清低密度脂蛋白膽固醇（ LDL）明顯高于空白組 (P),模型組血清 LDL值明顯高于藥物 C 組 (P)，模型組和藥物 A、 B、 D、 E、 F 組的血清 LDL 值沒有顯著性差異（ P） , 藥物 C 組和空白組的血清 LDL 值沒有明顯差異 (P)。見表 1 表 1 各組小鼠血清膽固醇 (TC)水平的比較 (X 土 s) 組別 樣品數(shù)量 TC 值 (mmol\l) 空白組 10 土 模型組 10 士 康脂素藥業(yè)有限責(zé)任公司 創(chuàng)業(yè)計(jì)劃書 第四屆挑戰(zhàn)杯 康脂素藥業(yè)有限責(zé)任公司 商業(yè)計(jì)劃 第 22 頁 陽性對照組 10 士 A 10 士 B 9 士 C 9 士 D 10 士 E 8 士 F 10 士 結(jié)論 ：化合物 C由明顯降低小鼠血清總膽固醇，并且降脂可以降到正常水平。 結(jié)果 一般情況動物精神狀態(tài)良好，所有給藥組小鼠的大便、小便明顯增多，飲食尚可，灌胃前后無明顯不良反應(yīng)。 肝臟病理切片的檢查。 高密度脂蛋白的測定 :磷烏酸一鎂沉淀法。 甘油三酯的測定 :用酶終 點(diǎn)法測定。 觀察指標(biāo)及方法 實(shí)驗(yàn)動物的一般情況 :包括飲食、大小便及精神狀態(tài)的變化等。 給藥方法 小鼠造模的第一天開始灌胃，試驗(yàn)藥和陽性對照藥按照上述方法進(jìn)行配制給藥，其余給 \g 的生理鹽水，劑量按人與小鼠體表面積折算，每日一次，連續(xù) 10天 。 實(shí)驗(yàn)步驟：隨機(jī)將 60 只小鼠分成九組 :空白組、模型組、陽性對照組、化合物 A組、化合物 B 組、化合物 C組、化合物 D組，化合物 E組、化合物 F組，每組 10只 . 喂養(yǎng)與護(hù)理 空白組小鼠給予普通飼料 (購自河南醫(yī)學(xué)研究動物實(shí)驗(yàn)中心 )，其余各組給予高脂飼料 。 試驗(yàn)檢測試劑：膽固醇 (TC)試劑盒、甘油三酯 (TG)、低密度脂蛋白膽固醇 (LDLC)、高密度脂蛋白膽固醇 (HDLC)試劑盒。 實(shí)驗(yàn)藥物：將分離得到的六個單體化合物分別用 CMCNa 混懸，低溫保存，待用。該化合物有很好的體內(nèi)研究價值。 LGL 177。 D 177。 B 177。 C 177。 BHA 177。 177。 177。 177。 177。 177。 177。 177。 SD) Trolox 當(dāng)量 ( μmol/g） (X177。 177。 177。 177。 SD) Trolox 當(dāng)量 ( μmol/g） (X177。 FRAP 方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果 由表 2可知，六種單體化合物 ABTS法抗氧化活性由大到小依次是 C E B F D A LGL y = + R2 = 010 100 200 300 400 500Trolox濃度 (181。 177。 50 177。 177。 177。 177。 177。 E 177。 177。 25 177。 D 177。 177。 177。 177。 177。 25 177。 177。 177。mol/g A 177。 SD) 抑制率 （ %） IC50 （ 181。 康脂素藥業(yè)有限責(zé)任公司 創(chuàng)業(yè)計(jì)劃書 第四屆挑戰(zhàn)杯 康脂素藥業(yè)有限責(zé)任公司 商業(yè)計(jì)劃 第 17 頁 表 5 化合物清除 ABTS 自由基的半數(shù)抑制濃度（ N=3） No. 終濃度 （ 181。 177。 177。 BHT 177。 177。 177。 BHA 177。 177。 177。mol/g PG 177。 SD) 抑制率 （ %） IC50 （ 181。mol/L)清除率(%) 圖 3 Trolox 清除 ABTS自由基標(biāo)準(zhǔn)曲線 表 4 陽性對照品清除 ABTS 自由基的半數(shù)抑制濃度（ N=3） No. 終濃度 （ 181。 3 177。 3 177。 3 177。 3 177。 3 177。 3 177。 3 177。 3 177。 3 177。 177。 3 177。 3 177。 3 177。 3 177。 3 177。 3 177。 3 177。 3 177。 3 177。 康脂素藥業(yè)有限責(zé)任公司 創(chuàng)業(yè)計(jì)劃書 第四屆挑戰(zhàn)杯 康脂素藥業(yè)有限責(zé)任公司 商業(yè)計(jì)劃 第 15 頁 3 177。 3 177。 SD) 抑制率 （ %） IC50 （ 181。 注：“ N”為樣本數(shù) 表 2 化合物清除 DPPH 自由基的半數(shù)抑制濃度 No. 樣本數(shù) (N) 終濃度 （ 181。 3 177。 3 177。 BHT 3 177。 3 177。 3 177。 BHA 3 177。 3 177。 3 177。g/ml） PG 3 177。g/ml） A 值 (X177。若所測定樣品吸光度值超過線性范圍， 則需要進(jìn)一步稀釋樣品。 （ 3） FRAP 方法 將樣品用甲醇配制成一系列濃度，取 ml樣品加入 ml 新鮮配制的 TPTZ工作液，混勻， 37℃反應(yīng) 30 min 后測定 593 nm處吸光度。按照以下公式計(jì)算 自由基清除率： ABTS radical scavenging rate(%) = [（ AcontrolAsample） /Acontrol]179。 （ 2） ABTS 方法 將樣品用甲醇配制成一系列濃度，取 ml 樣品加入 ml ABTS 自由基工作液，混勻， 10 min后測定 734 nm處吸光度；同法 ml甲醇 + ml ABTS 自由基工作液混勻測定吸光度。按照以下公式計(jì)算自由基清除率： DPPH radical scavenging rate(%) = [（ AcontrolAsample） /Acontrol]179。 操作方法 （ 1） DPPH 方法 將樣品用甲醇配制成一系列濃度，取 ml 樣品加入 ml DPPH 甲醇溶液（ mmol/L），混勻， 30 min后測定 515 nm處吸光度；同法 ml 甲醇 + ml DPPH 溶液混勻測定吸光度。 NSN NNSE t E ts o 3o 3 sNSN NNSE t E ts o 3o 3 sA B T S A B T S r a d i c a l 圖 2 ABTS及其自由基結(jié)構(gòu) Structure of ABTS and its free radical （ 3） FRAP 方法及原理 康脂素藥業(yè)有限責(zé)任公司 創(chuàng)業(yè)計(jì)劃書 第四屆挑戰(zhàn)杯 康脂素藥業(yè)有限責(zé)任公司 商業(yè)計(jì)劃 第 13 頁 FRAP方法 的原理：在低 pH值的溶液中， Fe3+三吡啶三啞嗪（ tripyridyltriazine， TPTZ）可被抗氧化劑還原為二價鐵形式 ，呈現(xiàn)出明顯的藍(lán)色，并在 593 nm處有最大吸收，根據(jù)吸光度的大小計(jì)算出抗氧化活性的強(qiáng)弱。在 ABTS?+的最大吸收 波 長 （ 一 般 選 擇 734 nm ） 處 檢 測 吸 光 度 的 變 化 。當(dāng)有供氫能力的抗氧化劑存在時 ，孤對電子被康脂素藥業(yè)有限責(zé)任公司 創(chuàng)業(yè)計(jì)劃書 第四屆挑戰(zhàn)杯 康脂素藥業(yè)有限責(zé)任公司 商業(yè)計(jì)劃 第 12 頁 配對，吸收消失或減弱，而吸光度變小的程度與自由基被清除的程度呈定量關(guān)系，因而可用分光光度法進(jìn)行定量分析。 體外實(shí)驗(yàn)研究 試驗(yàn)方法及原理 （ 1） DPPH 方法及原理 DPPH法是 20世紀(jì) 50年代提出來的，最初用于發(fā)現(xiàn)食品中的供氫體，后來廣泛用于定量測定酚類物質(zhì)、黃酮類物質(zhì)、香辛料類、食品、水果和揮發(fā)油等的抗氧化能力。易溶于氯仿、乙酸乙酯 H2NMR(400 MHz ,CDCl3 ) :1(1H ,s , CHO) ,δ (1H ,d ,J =),δ (1H ,d ,J = Hz) ,δ (2H,s,H22),δ (3H,CH3)。故鑒定該化合物結(jié)構(gòu)為 E。易溶于氯仿、乙酸乙酯。故鑒定該化合物結(jié)構(gòu)為 D。 化合物 D:白色固體 (氯仿 ),熔點(diǎn) 70～ 72℃。 IR( KBr ,cm ) :3415,3113,2936 ,1717,1670,1451,1417,1 235,1157,999,854,763,543,1496； H2NMR(400 MHz,D2O):δ (1H,d,J=,H22),δ(1H,d,J=,H23) ,δ (2H ,13q,J=, , OCH2 ),δ (3H ,t ,J = Hz , CH3)； C2NMR(400 MHz ,D2 O) :δ ( COOH) ,δ (C22) ,δ (C23) ,δ (OCH2 ) ,δ ( CH3 )。易溶于甲醇、水。故鑒定該化合物為結(jié)構(gòu)為 B。易溶于丙酮、甲醇 .溴酚藍(lán)和三氯化鐵 鐵氰化鉀反應(yīng)均為陽性 ,推測其為酚酸性物質(zhì)。 UVλ max(MeOH,nm): 207， 258， 294； IR(KBr,cm ) : 3410， 2925， 2856， 1655， 1603, 1527， 1455， 1382， 1289，1 247， 939， 879， 823， 765， 638， 555； 1HNMR(400 MHz， Acetone ) :δ (1H ,d ,J = Hz ,H22)， (1H, dd, J = ， Hz， H26)， (1H, d, J = Hz, H25)；13CNMR(100 MHz， Acetone)δ： 122. 8(C21)， 117. 2(C22)， 145. 4(C23)， 150. 6(C24)，115. 5(C5)， (C2