【正文】 絲塊放在斜面的中央 。右手拿接種鉤 (已在火焰上灼燒滅菌又冷卻 )， 并同時用右手輕輕拔下兩支試管的棉塞或試管帽 。 注意事項： 母種的擴大繁殖不可無限制地移代 ， 移代過多菌種生活力減弱 ，從而影響大面積栽培的生產效益 。 轉管原因： 從外地購進或分離獲得的母種數量有限 ， 不能滿足生產的需要時 ， 要對初次獲得的母種進行擴大繁殖 ， 以增加母種數量 。 內容： 包括生產性狀、商品性狀、遺傳性狀三個方面。 一級菌種制作技術 — 出菇鑒定（試驗） 概念： 是菌種投入生產前必須做的結實性鑒定試驗 。 但有時由于菌種緊缺 ， 并且污染物不多 ， 也可用滅菌濾紙浸在 1％ 的多菌靈溶液中 ， 然后取出覆蓋于霉菌的生長點上 ， 以防止分生孢子的擴散 ， 然后用接種鏟切取一小塊遠離雜菌的健壯菌絲移至新的斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng) 。 一級菌種制作技術 — 菌種的純化 2． 污染物的排除 在菌種分離后 ， 細菌 、 霉菌的污染時有發(fā)生 ， 必須加以排除 。如果菌絲生長稀疏，也可采用單根菌絲分離法。 一級菌種制作技術 — 菌種的純化 一級菌種的純化：是指對分離獲得的菌種進行再提純 ， 成為生產所需要的菌種的方法 。 ② 有些子實體小而薄 ， 用組織分離法和孢子分離法較困難 。 特點：易感染雜菌 。 ② 分離過程較復雜 ， 適用于膠質菌類和小型傘菌 。 （ 3） 操作過程 （ 以傘菌類為例 ） 種菇選擇 — 種菇消毒 — 切取組織塊 — 移接組織塊至斜面中央 — 培養(yǎng) （ 25℃ 左右 ） 一級菌種制作技術 — 菌種分離 （四）菌種分離的方法 2． 孢子分離法 （ 1） 概念 利用子實體產生的成熟有性孢子分離培養(yǎng)獲得純菌種的方法 。 ② 適用于大型肉質子實體 ， 適用于孢子不易萌發(fā)的菌類 。 一級菌種制作技術 — 菌種分離 （四）菌種分離的方法 1． 組織分離法 （ 1） 概念 將食用菌的部分組織移接到斜面培養(yǎng)基上獲得純培養(yǎng)的方法 。 注意二點： 1． 嚴格樹立無菌觀念； 2． 嚴格遵循無菌操作規(guī)程 。 通過菌種分離得到的純菌絲體即為一級菌種 。 3． 操作過程 加水 ?裝鍋 ?蓋蓋 ?加熱 ?當壓力升為 時排放冷空氣 ?正式升壓 ?保壓（ ， 121℃ ，保持 2030min） ?停止加熱 ?自然降壓至零 ?排放余汽?開蓋 ?取出滅菌物品 ?趁熱擺斜面 ?檢驗滅菌效果（ 32℃ 空白培養(yǎng) 48h）。 用量不小于 30ml/m3；霧粒越細越好；適時更換藥液 （ 防止抗藥性 ） 。 臥式或立式高壓滅菌鍋：用于二 、 三級菌種培養(yǎng)基滅菌 。 注意：常壓滅菌鍋要設計合理 ， 主要是滅菌徹底與否 、 燃料費用 、 周轉速度 、 勞動強度、 污染率的高低 ， 直接影響經濟效益 。 持續(xù)滅菌 蒸 ， 100℃ 保持 12～ 14 h（ 方法：攻頭 ， 控中間 ， 保尾 ） 。 干熱滅菌 濕熱滅菌 常壓滅菌 間歇滅菌 第一次蒸 ， 100℃ 保持 1 h ?2837℃ 下培養(yǎng) 24 h ?第二次蒸 ， 100℃ ， 保持 1 h ?培養(yǎng) 24 h ?第三次蒸 ， 100℃ ， 保持 1 h。 一級菌種制作技術 — 一級菌種培養(yǎng)基的滅菌 （ 二 ） 消毒與滅菌的方法 常用的滅菌方法 火焰滅菌 用于金屬器具 ， 火焰灼燒至紅 （ 在火焰 2/3處燒 ） 干燥箱滅菌 用于玻璃器皿 （ 培養(yǎng)皿 、 試管 、 三角瓶 、 吸管 ） 等 。 一級菌種制作技術 — 一級菌種培養(yǎng)基的滅菌 （ 一 ） 消毒與滅菌的概念 滅菌： 是應用物理和化學方法殺滅物品表面和內部所有的微生物 ， 是一種徹底的滅菌方法 。 高壓滅菌或干燥滅菌后備用 。 平板培養(yǎng)基的制作 平板培養(yǎng)基常用于單孢分離 ， 測定菌絲生長速度 ， 觀察菌落的形態(tài) ， 拮抗實驗 ， 測定接種空間雜菌數 。 ④ 瓊脂：是固化培養(yǎng)基最常用的凝固劑，一般用量為 2%。 ③ 礦物質：多在改良培養(yǎng)基或綜合培養(yǎng)基中作為食用菌對礦物質需求的補充劑 ， 同時對培養(yǎng)基物理性狀的改良起重要作用 。 瓊脂 （ 又稱洋菜 ） 是一級菌種培養(yǎng)基常用的凝固劑 一級菌種制作技術 — 一級菌種培養(yǎng)基的配制 （ 三 ） 一級菌種培養(yǎng)基常用的配方 1． 常用配方 PDA培養(yǎng)基 PSA培養(yǎng)基 馬鈴薯 （ 去皮 ） 200g 馬鈴薯 （ 去皮 ） 200g 葡萄糖 20g 蔗糖 20g 瓊脂 18～ 23g 瓊脂 18～ 23g 水 1000ml 水 1000ml 一級菌種制作技術 — 一級菌種培養(yǎng)基的配制 （ 三 ） 一級菌種培養(yǎng)基常用的配方 2． 一級菌種培養(yǎng)基配方設計 組成一級種培養(yǎng)基的材料大致可分為四種： ① 天然的有機物：應選擇新鮮 、 無霉味 、 無蟲蛀 、 無變質的優(yōu)質材料 ， 經熱浸提后取濾液入料 ， 為食用菌生長提供全面的營養(yǎng) 。 容器：一級菌種培養(yǎng)基通常用玻璃試管作容器 ， 按不同的配方加上瓊脂凝固劑 ， 制成瓊脂斜面培養(yǎng)基 ， 又叫斜面培養(yǎng)基 ， 簡稱斜面 。 2． 用途及要求 一級菌種是菌種生產的基礎 ， 一級菌種質量的優(yōu)劣 ，直接關系到二級菌種和三級菌種的質量 ， 對食用菌生產產生根本的影響 。 二、三級菌種常用化學藥品：工業(yè)級的石膏、碳酸鈣、石灰、 MgSO過磷酸鈣、KH2PO K2HPO4等。 二 、 三級菌種的培養(yǎng)基及其制種過程大同小異 。 菌種生產類型及生產流程 — 菌種生產類型 2． 二級菌種 由一級菌種擴大繁殖成的菌絲體 ， 有的稱為原種 ， 它是一級菌種和三級菌種之間的過度種 。 1． 一級菌種 從孢子分離培養(yǎng)或組織分離培養(yǎng)獲得的純菌絲體 ， 在生產上稱一級菌種菌絲體或一級菌種或試管種或母種 。 或者說是指人工培養(yǎng) ， 并供進一步繁殖的食用菌的純菌絲體 。 菌種 （ 廣義 ） ：是指以保藏 、 試驗 、 栽培和其它用途為目的 ， 具有繁衍能力 ， 遺傳特性相對穩(wěn)定的孢子 、 組織或菌絲體及其營養(yǎng)性或非營養(yǎng)性的載體 。 第二步 ：栽培 —— 將繁殖好的菌種接種于培養(yǎng)料（培養(yǎng)基質）上，以培植食用菌的子實體。 食用菌在生長發(fā)育過程中需要哪些營養(yǎng)物質 ？ 在生產中如何解決 ？ 食用菌在生長發(fā)育過程中需要哪些環(huán)境條件？在生產中如何控制？ 制種技術 食用菌一般是通過播種來菌種來栽培的 ， 食用菌生產包括兩個步驟： 第一步 ：培養(yǎng)菌種 —— 通過采收孢子或從菇體組織中分離來培養(yǎng)食用菌的純菌絲體 ， 并逐級擴大繁殖 。 （ 3） 食用菌與動物：依靠動物幫助才能完成生活史循環(huán)的食用菌種類較少 ， 典型的例證是白蟻 “ 栽種 ” 雞縱 。 （ 1） 食用菌與微生物：許多微生物能為食用菌提供必要的營養(yǎng)物質 。適合菌絲生長的 pH值一般在 3～ 8之間，以 6～ 。 子實體形成之后 ， 食用菌的呼吸作用旺盛 ， 對氧氣的需求量急劇增加 。 一般菌絲生長期對氧氣的需求量較小 ， 對二氧化碳也不敏感 。 根據子實體形成時期對光線的要求 ， 一般可以將食用菌分為喜光型 、 厭光型和中間型 3種類型 。 食用菌的生活條件 — 環(huán)境條件 食用菌細胞內不含葉綠素，不能進行光合作用，因此不需要直射光。 適當的空氣相對濕度 ， 能夠促進子實體表面的水分蒸發(fā) ， 從而促進菌絲體中的營養(yǎng)向子實體轉移 ， 又不會使子實體表面干燥 ， 導致子實體干縮 。 （ 1）培養(yǎng)料的含水量：適合食用菌菌絲生長的培養(yǎng)料的含水量在 60％左右。 根據食用菌子實體分化時對溫度變化的反應不同 ， 又可把食用菌分為兩種類型：恒溫型與 變溫型 。孢子產生的適溫低于孢子萌發(fā)的適溫。 （ 1）食用菌對環(huán)境溫度的反應規(guī)律 在最適溫度范圍內，食用菌的營養(yǎng)吸收、物質代謝強度和細胞物質合成的速度都較快，生長速度最高，生長適溫在 20～ 30℃ 之間。許多食用菌還需要微量的核黃素 (維生素 B2)、吡哆醇 (維生素 B6)、生物素 (維生素 H)、煙酸 (維生素 PP)、葉酸等，由于天然培養(yǎng)基或半合成培養(yǎng)基使用的馬鈴薯、酵母粉、麥芽汁、麩皮、米糠等天然物質中各種維生素含量非常豐富，因此一般不需要另行添加。 這類物質用量甚微卻作用很大 ， 維生素類物質主要起輔酶作用 ， 生長因子對食用菌的生長發(fā)育有促進作用 。 木屑 、 作物秸稈及畜糞等生產用料中的礦質元素含量一般是可以滿足食用菌生長發(fā)育要求的 ， 但在生產中常添加石膏 1％ ～ 3％ ，過磷酸鈣 1％ ～ 5％ ， 碳酸鈣 1％ 一 2％ ， 硫酸鎂 0． 5％ ～ 1％ ， 草木灰等給予補充 。 微量元素包括鐵 、 鈷 、 錳 、 鉬 、 硼等 ， 培養(yǎng)基中的濃度在 1ppm左右即可 。 可分為大量元素和微量元素 。 菌絲生長階段要求含氮量較高，以碳氮比 (15～ 20):1為宜，含氮量過低，菌絲生長緩慢；子實體發(fā)育階段要求培養(yǎng)基含氮量較低，以碳氮比 (30～ 40):1為宜，含氮量過高，則抑制子實體的發(fā)生和生長。 培養(yǎng)基中氮的濃度對食用菌的生長發(fā)育影響較大 。 食用菌主要利用各種有機氮 ， 也可以利用無機氮 。 食用菌的碳源物質有纖維素 、 半纖維素 、 木質素 、 淀粉 、 果膠 、 戊聚糖類 、 有機酸 、 有機醇類 、單糖 、 雙糖及多糖類的物質 。 食用菌的生活條件 — 營養(yǎng)條件 （ 二 ） 食用菌對營養(yǎng)物質的需求 攝取營養(yǎng)的方式不同，營養(yǎng)物質的來源也不同，但對營養(yǎng)物質的需求卻基本相同，大致包括碳源、氮源、無機鹽類及生長因素四大類營養(yǎng)物質。 食用菌中 ， 整個生活史都是營寄生生活的情況十分罕見 ， 多是在生活史的某一階段營寄生生活 ， 而其他時期則營腐生生活 ，為兼性寄生 。 商業(yè)性栽培的食用菌幾乎都是腐生性菌類 。 1． 腐生性食用菌 是能夠分泌各種胞外酶和胞內酶 ， 分解已經死亡的有機體 ， 從中吸收養(yǎng)料的食用菌 。 1． 草菇的生活史： 初級同宗結合 2． 雙孢蘑菇的生活史： 次級同宗結合 ， 單因子控制 、 二極性 3． 滑菇的生活史： 二極性異宗結合 ， 單因子控制 、二極型 4． 香菇的生活史： 四極性異宗結合 ， 雙因子控制 、四極性 食用菌的生活史 — 復習思考題 四 、 復習思考題 1． 什么是食用菌的生活史 ？ 2．舉例說明食用菌的生活史有哪些類型。 ⑨ 擔孢子彈射，待條件適宜時進入新的生活史。 在一般情況下 ， 每個擔子形成 4個單核的擔孢子 。 減數分裂使兩個不同交配型的細胞核的遺傳物質發(fā)生分離和重組 ， 形成 4個單倍體核 。 ⑦ 來自兩個親本的一對交配型不同的單倍體細胞核在擔子中融合 (核配 )， 形成 — 個雙倍體細胞核 。 ⑤ 在適宜的環(huán)境條件下 ， 雙核菌絲發(fā)育成結實性菌絲 (三生菌絲 )并組織化 ， 產生子實體 。多數食用菌的雙核菌絲具有鎖狀聯合 。 ③ 兩條可親和的單核菌絲融合 (質配 )。 食用菌的生活史 — 傘菌類的典型生活史 二 、 食用菌中傘菌類的典型生活史 食用菌中傘菌類的典型生活史由以下九個階段組成 ① 擔孢子萌發(fā) ， 生活史開始 。即從孢子在適宜的條件下萌發(fā)開始，先形成單核菌絲，單核菌絲融合形成雙核菌絲，當雙核菌絲發(fā)育到生理成熟階段，菌絲扭結生長成子實體，子實體產生新一代孢子，至孢子散落而告終。 3． 傘菌子實體主要由哪幾部分組成 ？ 各部分有何特征 ？ 4．試述擔子菌子實體的發(fā)育類型。 4．半被果型：擔子果自幼被封閉，但孢子成熟時子實層裸露。 2． 被果型：擔子果一直被包裹著 ， 直至孢子成熟 。 一般子囊果的發(fā)育類型可分為閉囊殼 、 子囊殼 、 子囊盤 、 子囊腔四種 ， 擔子果的發(fā)育類型可分為裸果型 、 被果型 、 假被果型 、 半被果型四種 。 食用菌的形態(tài)結構 — 子實體的形態(tài)結構 （ 3） 菌托 由于外菌幕的撕裂方式不同 ， 菌托的形狀各異 。 （ 2） 菌環(huán)