【正文】 100℃加熱5小時高溫空白→20ml水浴100℃加熱5小時光照破壞→20ml光照箱4500LX照射40小時光照空白→20ml光照箱4500LX照射40小時酸破壞→20ml1mol/L鹽酸1ml，室溫放置10分鐘酸空白→20ml1mol/L鹽酸1ml，室溫放置10分鐘堿破壞→20ml1mol/L氫氧化鈉溶液2ml，室溫放置1小時堿空白→20ml1mol/L氫氧化鈉溶液2ml，室溫放置1小時氧化破壞→20ml30%雙氧水3ml，氧化空白→20ml30%雙氧水3ml，取上述溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。（～12，制劑的質量控制一第167~178頁） 富馬酸沃諾拉贊片吡啶3磺酸檢查破壞試驗結果名稱吡啶3磺酸總峰面積主峰面積/%物料平衡/%分離度峰純度未 破 壞/合格63379100/高溫破壞合格62286光照破壞合格71121酸 破 壞合格69644堿 破 壞合格73152氧化破壞合格62279計算公式：物料平衡%=（破壞后總峰面積/濃度）/（破壞前總峰面積/濃度）結論：溶劑不干擾本品的測定，各破壞條件下主峰與相鄰雜質峰的分離度符合要求，主峰未檢出不純物，樣品破壞前后物料守恒，故該方法測定本品有關物質的專屬性良好。雜質對照溶液：取雜質Ⅶ工作對照品適量，精密稱定，作為對照品溶液。 吡啶3磺酸檢查方法學驗證內容儀器設備島津LC20AT高效液相色譜儀、島津SPDM20A二極管陣列檢測器島津LC20AT高效液相色譜儀、島津SPDM20A紫外檢測器色譜條件選擇及溶液配制 同原料藥采用十八烷基鍵合硅膠為填充劑，（）為流動相A，甲醇為流動相B，進行梯度洗脫；紫外檢測器，檢測波長為261nm；。溶液穩(wěn)定性供試品溶液室溫放置8小時內溶液穩(wěn)定性良好。線性～，相關系數(shù)R2=1準確度%～%范圍內，準確度良好，RSD=%精密度重復性試驗：測得吡啶3磺酸含量RSD=%。檢測限。系統(tǒng)適用性主峰及各已知雜質與相鄰雜質分離良好，理論板數(shù)符合要求。（~102，制劑的質量控制一第140~166頁） 富馬酸沃諾拉贊片有關物質檢查耐用性試驗結果1耐用性研究項目方法及條件耐用范圍沃諾拉贊雜質Ⅰ雜質Ⅱ雜質Ⅲ雜質Ⅳ雜質Ⅴ雜質Ⅵ分離度分離度分離度分離度分離度分離度分離度色譜原條件 流速流動相比例54465050pH值鹽濃度 富馬酸沃諾拉贊片有關物質檢查耐用性試驗結果2耐用性研究項目方法及條件耐用范圍雜質Ⅲ%雜質Ⅰ%雜質Ⅱ%雜質Ⅳ%雜質Ⅴ%雜質Ⅵ%單雜%總雜%色譜原條件流速流動相比例54465050pH值鹽濃度平均值（%）RSD（%）結論：此方法測定本品有關物質耐用性良好。精密量取供試品溶液1ml，置200ml量瓶中，加流動相A稀釋制成至刻度，搖勻，作為對照溶液。取重復性項下供試品。 耐用性試驗 為考察色譜系統(tǒng)在輕微變化時的耐用性情況，通過改變流動相比例、流動相pH值、流動相鹽濃度、流速等色譜因素進行試驗，計算含雜質的量。（～75，制劑的質量控制一第129~139頁）按外標法以峰面積計算供試品溶液中各雜質的量。同法配制3份。同法配制3份。同法配制3份。供試品溶液：取20140701批原料適量（約相當于沃諾拉贊25mg），精密稱定，置50ml量瓶中，加流動相A適量，使充分溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；按外標法計算各已知雜質的百分含量。（~64，制劑的質量控制一第114~128頁） 富馬酸沃諾拉贊片有關物質檢查溶液穩(wěn)定性試驗結果（供試品溶液）名稱/時間0h3h6h9h12h平均值RSD%未知雜質1405937013886399842823985雜質Ⅰ10040953298789514104759888沃諾拉贊435466514354604943473026434439244343410143488750雜質Ⅱ214442134721812221022392322126未知雜質2835182367654934995788634 富馬酸沃諾拉贊片有關物質檢查溶液穩(wěn)定性試驗結果（對照溶液）名稱/時間0h3h6h9h12h平均值RSD%沃諾拉贊223519224561224146224257224210224139 富馬酸沃諾拉贊片有關物質檢查溶液穩(wěn)定性試驗結果（雜質對照品溶液）峰面積/時間0h3h6h9h12h平均值RSD%雜質Ⅰ232331232403232799232538230054232025雜質Ⅱ250524250764251106251264250123250756雜質Ⅲ154679154344153319153644154283154054雜質Ⅳ222815222039224030223597222471222990雜質Ⅴ194349190641188570185235180721187903雜質Ⅵ244802246539250233246858237531245193結論：供試品溶液、對照溶液、雜質對照品溶液12h內穩(wěn)定性良好。分別取雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ工作對照品各適量，精密稱定，作為雜質對照品溶液。 溶液穩(wěn)定性試驗供試品溶液：取本品適量（約相當于沃諾拉贊25mg），精密稱定，置50ml量瓶中，加流動相A適量，振搖，使充分溶解，加流動相A稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。 取重復性項下供試品，由不同試驗人員分別在不同日期、不同儀器檢查其有關物質。重復測定6次，考察精密度。分別精密量取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。，取雜質Ⅰ、Ⅱ，雜質Ⅲ，雜質Ⅳ，雜質Ⅴ，雜質Ⅵ，混合均勻，作為供試品。將上述100片樣品置于研缽中研細，混勻，作為供試品粉末。線性關系試驗 同原料藥。檢測限試驗 同原料藥。定量限試驗 同原料藥。破壞性試驗 破壞試驗溶液的配制與處理：溶液稀釋步驟處理方法溶劑輔料空白→20ml無降解處理未破壞+→20ml無降解處理高溫破壞+→20ml水浴100℃加熱13小時高溫空白→20ml水浴100℃加熱13小時光照破壞+→20ml光照箱4500LX照射45小時光照空白→20ml光照箱4500LX照射45小時酸破壞+→20ml1mol/L鹽酸2ml，室溫放置42小時酸空白→20ml1mol/L鹽酸2ml，室溫放置42小時堿破壞+→20ml1mol/L氫氧化鈉溶液1ml，室溫放置42小時堿空白→20ml1mol/L氫氧化鈉溶液1ml，室溫放置42小時氧化破壞+→20ml高氯酸1ml，室溫放置17小時氧化空白→20ml高氯酸1ml，室溫放置17小時取上述溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。分別取雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ工作對照品各適量，精密稱定，作為雜質對照品溶液。梯度表如下：時間（分鐘） 流動相A（%） 流動相B（%）01000231000452080501000601000 溶液配制 供試品溶液：取本品細粉適量（約相當于沃諾拉贊25mg），精密稱定，置50ml量瓶中，加流動相A適量，振搖，使充分溶解，加流動相A稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。各已知雜質測的含量的RSD均小于10%。溶液穩(wěn)定性供試品溶液、對照溶液、雜質對照品溶液室溫放置12小時內溶液穩(wěn)定性良好。線性～，相關系數(shù)R2=雜質Ⅰ～，相關系數(shù)R2=雜質Ⅱ～，相關系數(shù)R2=雜質Ⅲ～，相關系數(shù)R2=雜質Ⅳ～，相關系數(shù)R2=雜質Ⅴ～，相關系數(shù)R2=雜質Ⅵ～，相關系數(shù)R2=準確度雜質Ⅰ%～%范圍內，準確度良好，RSD=%雜質Ⅱ%～%范圍內，準確度良好，RSD=%雜質Ⅲ%～%范圍內，準確度良好，RSD=%雜質Ⅳ%～%范圍內，準確度良好，RSD=%雜質Ⅴ%～%范圍內，準確度良好，RSD=%雜質Ⅵ%～%范圍內，準確度良好，RSD=%精密度重復性試驗：測得雜質Ⅰ含量RSD=%，雜質Ⅱ含量RSD=%，雜質Ⅲ含量RSD=%，雜質Ⅳ含量RSD=%，測得雜質Ⅴ含量RSD=%，雜質Ⅵ含量RSD=%，其他單雜含量RSD=%，其他總雜含量RSD=%。檢測限；雜質Ⅰ；雜質Ⅱ；雜質Ⅲ；雜質Ⅳ；雜質Ⅴ；雜質Ⅵ的檢測限為60ng。系統(tǒng)適用性主峰及各已知雜質與相鄰雜質分離良好，理論板數(shù)符合要求。 分析方法的驗證 按照《化學藥物質量控制分析方法驗證技術指導原則》、《化學藥物質量標準建立的規(guī)范化過程技術指導原則》、《化學藥物雜質研究技術指導原則》等以及《中國藥典》2010年版二部附錄中有關的指導原則提供以下方法學驗證資料。精密量取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取富馬酸沃諾拉贊工作對照品適量，同法測定，按外標法以峰面積計算，即得。試藥與試劑：磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。如MUG陽性、靛基質陽性，判檢出大腸埃希菌；如MUG陰性、靛基質陰性，判未檢出大腸埃希菌。觀察后，沿培養(yǎng)管的管壁加人數(shù)滴靛基質試液，液面呈玫瑰紅色，為靛基質陽性；呈試劑本色，為靛基質陰性。于24h在366nm紫外光下觀察，同時用未接種的MUG培養(yǎng)基作本底對照。（2）控制菌的檢查法大腸埃希菌：試驗組取1：10供試液10ml，分別加入100ml、200ml的膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，加入10～100cfu/ml試驗菌，3537℃培養(yǎng)1824h；，接種至5mlMUG培養(yǎng)管內，培養(yǎng)5h與24h時，置紫外燈366nm處觀察，然后沿培養(yǎng)基管壁加入數(shù)滴靛基質試液。菌液組測定試驗所加入試驗菌的菌數(shù)。直接接種法：取1:，分別加入1ml約含50～100cfu/m15株試驗菌。：用平皿法，依法檢查（中國藥典2010年版二部附錄Ⅺ J）。 微生物限度：營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、膽鹽乳糖培養(yǎng)基、MUG培養(yǎng)基、%氯化鈉溶液。 計算公式：含量（%）=（W對分別為對照品的稱樣量，mg；P對為對照品的含量；A樣、A對分別為供試品、對照品溶液中沃諾拉贊的峰面積；V樣、V對分別為供試品溶液、對照品溶液的稀釋體積） 分別測定每片以標示量為100的相對含量，求其均值和標準差以及標示量與均值之差的絕對值：如，則供試品的含量均勻度符合規(guī)定；若，則不符合規(guī)定；若，且，則應另取20支復試，根據(jù)初、復試結果，計算30支的均值、標準差和標示量與均值之差的絕對值：如，則供試品的含量均勻度符合規(guī)定；若，則不符合規(guī)定。按外標法以峰面積分別計算每片中沃諾拉贊的含量。 對照品溶液：取富馬酸沃諾拉贊工作對照品適量（約相當于沃諾拉贊10mg），精密稱定，置100ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。試驗條件：十八烷基鍵合硅膠柱（5μm 250mm）； 紫外檢測器（檢測波長為230nm）； 流動相：（）甲醇（52:48）； 溶劑：流動相； 流速：。 含量均勻度檢查方法：含量均勻度檢查法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅹ E） 高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅴ D)儀器與用具：高效液相色譜儀、電子分析天平、十八烷基鍵合硅膠柱（5μm 250mm）、容量瓶、移液管、燒杯，PH計。具體試驗操作：取本品，照溶出度測定法（中國藥典2010年版二部附錄X C第二法），轉速為每分鐘50轉，依法操作，經(jīng)30分鐘時，取溶液適量濾過，精密量取續(xù)濾液適量，用溶出介質定量稀釋成每1ml中約含沃諾拉贊11μg的溶液，作為供試品溶液；另取富馬酸沃諾拉贊工作對照品適量，用溶出介質溶解并定量稀釋制成每1ml中約含沃諾拉贊11μg的溶液，作為對照品溶液，精密量取供試品溶