植物組織培養(yǎng)的一些注意事項-文庫吧資料
2025-07-06 05:38本頁面
【正文】 培養(yǎng)周期增殖的倍數(shù)n = 全年可增殖的周期次數(shù)例如月季每5 周轉接一次, 甲品種每次增殖3 倍, 乙品種每次增殖5 倍, 丙品種每次增殖7 倍, 假定一開始都是一個芽, 那么這三個品種一年能繁殖多少呢? 根據(jù)公式可知:n =365d/35d= 10 .4 , 即每年可轉接10 次, 那么這三個品種年繁殖率分別計算如下:甲品種Y = 131 0 = 59 000 = 5 .9104乙品種Y = 151 0 = 9 760 000 = 9 .76106丙品種Y = 171 0 = 282 000 000 = 2 .82108從上可知甲品種每5 周轉接一次, 一年可繁殖出5 萬多苗, 乙品種每周期增殖5 倍, 一年可得900 多萬苗, 而丙品種每周期增殖7 倍, 一年可繁殖出2 億苗來。試管繁殖速率及計算統(tǒng)計試管苗增殖速度, 有以苗為單位, 也有以芽或未生根的小莖作單位的, 以原球莖球狀體或胚狀體因難以統(tǒng)計, 則以瓶為單位。連續(xù)轉移：對于易褐變的材料, 進行連續(xù)轉移, 可以減輕醌類物質對培養(yǎng)物的毒害作用。外植體應有較強的分生能力, 在最適宜的細胞脫分化和再分化的培養(yǎng)條件下, 使外植體處于旺盛的生長狀態(tài), 便可大大減輕褐變。培養(yǎng)時間過長接種后材料培養(yǎng)時間過長, 未及時轉移, 也會引起材料的褐變, 甚至導致全部死亡, 這在培養(yǎng)過程中是經(jīng)常可見的。在芽旺盛增殖時, 褐變也被抑制。細胞分裂素6 芐基氨基嘌呤或激動素有刺激多酚氧化酶活性提高的作用, 這在甘蔗的組織培養(yǎng)中表現(xiàn)十分明顯。例如油棕用MS無機鹽培養(yǎng)基容易引起外植體的褐變, 而用降低了無機鹽濃度的改良MS 培養(yǎng)基時則可減輕褐變, 而且可獲得愈傷組織和胚狀體?？傊? 分生部位接種后形成的醌類物質少, 而分化的部位則形成的醌類物質較多。在第一至第四個芽的生長期單寧類物質合成多, 因此, 接種后褐變也嚴重。而在卡德利亞蘭的培養(yǎng)中, 較短的新生莖致褐物質含量高, 而較長的新生莖致褐物質含量低, 另外致褐物質的含量也因季節(jié)的不同而不同, 冬季褐變少, 夏秋季褐變最嚴重, 存活率最低。材料本身的生理狀態(tài)不同, 接種后褐變的程度也不同。防止外植體褐變1）、褐變的影響因素褐變是由于組織中的多酚氧化酶被激活, 使細胞的代謝發(fā)生變化, 酚類物質被氧化后產(chǎn)生醌類物質, 這類物質呈棕褐色, 它們會逐漸擴散到培養(yǎng)基中, 抑制其他酶的活性, 毒害培養(yǎng)的材料。 它可出現(xiàn)在培養(yǎng)基表面, 或呈滴形云霧狀存在于培養(yǎng)基內。法國林木育種協(xié)會鑒定為遲緩芽孢桿菌( Bacillus lenlus) , 它外被莢膜, 耐高溫, 一般消毒劑難以殺死。工作人員呼吸所產(chǎn)生的污染, 主要是接種時說話或咳嗽所引起的, 因此, 操作時嚴禁談話, 并應戴上口罩, 也應穿工作服, 戴工作帽。2） 、人為污染的防止接種前應用肥皂將手仔細洗凈后, 再用70%酒精擦洗雙手, 并需及時剪除指甲。也可采用多種藥液多次浸泡法,以加強滅菌效果。對木本植物等難以消毒的材料可采用多次滅菌法。將枝條用水沖洗干凈后插入無糖的營養(yǎng)液或自來水中, 使其發(fā)枝, 然后以這種新抽的嫩枝條作為外植體, 便可大大減少材料的污染。為此對于培養(yǎng)材料的取材就應很認真地加以選擇, 以減少污染的發(fā)生。 田間生長的材料比溫室生長的材料帶菌多。3）、操作技術過關污染的防治1）、植物材料的選擇及防止污染通常多年生的木本材料比一二年生的草本材料帶菌多。 還要注意掌握適宜的環(huán)境條件。 初代培養(yǎng)物的建立1）、保證無菌2）、條件合適：首先, 一定要選擇好合適的作物種類、品種及培養(yǎng)的部位。根據(jù)8 個實驗結果, 如出苗數(shù)量、苗高、生根數(shù)、移栽成活率等, 綜合考慮, 根據(jù)需要選取各最適培養(yǎng)條件。現(xiàn)根據(jù)因素和水平的多少選擇一個適合本實驗的正交表, 選L8 (27)最理想, 填表時, 因素水平對號入座, 見表( 2 13 )。在進行實驗前可根據(jù)要測試因素的多少及每種因素所考察的水平, 選擇適合的正交表, 然后按表進行實驗。大多數(shù)生物統(tǒng)計學書都列出了可供選擇的正交表,如L4 ( 23 ) , L8 (27 )見(表2 11 , 表2 12) 。例如, 一個7 因素水平的實驗, 若將各因素水平全部組合都做一遍, 需要27 = 128 次, 而正交設計只需做8 次實驗就可以了, 雖然實驗次數(shù)減少了, 但因為各因素水平搭配均勻, 8 次實驗基本代表了全部實驗的情況。2 ）、正交實驗設計植物離體培養(yǎng)的成功是由多種因素決定的。莖尖、莖段等基部插入固體培養(yǎng)基中, 葉片通常將葉背接觸培養(yǎng)基, 這是由于葉背氣孔多, 利于吸收水分和養(yǎng)分的緣故。接種時輕輕取下封口紙, 動作要慢以免氣流沖入瓶中造成污染。材料的分離、切取和接種切割動作要快, 防止擠壓使材料受損傷而招致培養(yǎng)失敗, 也要避免使用生銹的刀片, 以防止氧化現(xiàn)象產(chǎn)生。工作人員的頭發(fā)、衣服、手指中都帶有許多雜菌, 為此要穿上工作服, 戴上帽子, 也必須剪除指甲, 并用肥皂擦洗, 最好再在新潔爾滅溶液中浸泡10min , 接種操作前則用70%酒精擦洗。接種前超凈工作臺面要用新潔爾滅或酒精擦洗,并定期清洗過濾膜, 以延長使用壽命。四、材料的接種接種室的消毒：植物組織培養(yǎng)技術實際上是一種無菌操作和無菌培養(yǎng)技術, 做好接種室的消毒是至關重要的。材料有絨
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