植物組織培養(yǎng)的一些注意事項(編輯修改稿)
2024-07-27 05:38 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 發(fā)生。用莖尖作外植體時, 應(yīng)在室內(nèi)或無菌條件下對枝條進行預(yù)培養(yǎng)。將枝條用水沖洗干凈后插入無糖的營養(yǎng)液或自來水中, 使其發(fā)枝, 然后以這種新抽的嫩枝條作為外植體, 便可大大減少材料的污染?；蛟跓o菌條件下對采自田間的枝條進行暗培養(yǎng), 待抽出徒長的黃化枝條時取材, 也可明顯地減少污染。對木本植物等難以消毒的材料可采用多次滅菌法。如將切好的外植體放入1 . 3%次氯酸鹽溶液中(商品漂白粉25%的溶液)消毒30min , 然后用無菌水沖洗3 次, 再放在無菌條件下,次日用2 . 6%次氯酸鈉滅菌30min , 然后用無菌水沖洗3 次。也可采用多種藥液多次浸泡法,以加強滅菌效果。材料內(nèi)部易感染病菌, 在這種情況下, 必須在培養(yǎng)基中加入抗生素類, 防止初代培養(yǎng)物污染。2） 、人為污染的防止接種前應(yīng)用肥皂將手仔細洗凈后, 再用70%酒精擦洗雙手, 并需及時剪除指甲。在工作中特別要注意避免交叉感染, 雙手必須清潔, 工具則用一次即需消毒一次。工作人員呼吸所產(chǎn)生的污染, 主要是接種時說話或咳嗽所引起的, 因此, 操作時嚴禁談話, 并應(yīng)戴上口罩, 也應(yīng)穿工作服, 戴工作帽。污染中特別注意一種呈乳白色的細菌污染, 這種細胞為芽孢桿菌。法國林木育種協(xié)會鑒定為遲緩芽孢桿菌( Bacillus lenlus) , 它外被莢膜, 耐高溫, 一般消毒劑難以殺死。它可隨培養(yǎng)材料、用具等傳播。 它可出現(xiàn)在培養(yǎng)基表面, 或呈滴形云霧狀存在于培養(yǎng)基內(nèi)。若出現(xiàn)應(yīng)嚴格滅菌, 清洗用具, 更換消毒酒精。防止外植體褐變1）、褐變的影響因素褐變是由于組織中的多酚氧化酶被激活, 使細胞的代謝發(fā)生變化, 酚類物質(zhì)被氧化后產(chǎn)生醌類物質(zhì), 這類物質(zhì)呈棕褐色, 它們會逐漸擴散到培養(yǎng)基中, 抑制其他酶的活性, 毒害培養(yǎng)的材料。褐變的影響因素是復(fù)雜的, 隨植物種類、基因型、外植體的部位及生理狀況等的不同而危害的程度也有區(qū)別。材料本身的生理狀態(tài)不同, 接種后褐變的程度也不同。如在歐洲栗的培養(yǎng)中, 用幼年型的材料培養(yǎng)含醌類物質(zhì)少, 而用成年型材料培養(yǎng)時含醌類物質(zhì)多。而在卡德利亞蘭的培養(yǎng)中, 較短的新生莖致褐物質(zhì)含量高, 而較長的新生莖致褐物質(zhì)含量低, 另外致褐物質(zhì)的含量也因季節(jié)的不同而不同, 冬季褐變少, 夏秋季褐變最嚴重, 存活率最低。在枝條上取芽的時期及所取部位不同也有區(qū)別, 如歐洲栗取1 月后半月的芽培養(yǎng)則醌的形成少, 而在5 月～6 月取芽培養(yǎng)則醌類物質(zhì)發(fā)生嚴重。在第一至第四個芽的生長期單寧類物質(zhì)合成多, 因此, 接種后褐變也嚴重。油棕用幼嫩外植體( 如胚)培養(yǎng)較少褐變, 而用高度分化的葉片接種后則容易褐變?？傊? 分生部位接種后形成的醌類物質(zhì)少, 而分化的部位則形成的醌類物質(zhì)較多。培養(yǎng)基成分過高的無機鹽濃度會引起棕櫚科植物外植體酚的氧化。例如油棕用MS無機鹽培養(yǎng)基容易引起外植體的褐變, 而用降低了無機鹽濃度的改良MS 培養(yǎng)基時則可減輕褐變, 而且可獲得愈傷組織和胚狀體。激素使用不當(dāng)時, 材料也容易褐變。細胞分裂素6 芐基氨基嘌呤或激動素有刺激多酚氧化酶活性提高的作用, 這在甘蔗的組織培養(yǎng)中表現(xiàn)十分明顯。在外植體最適宜的脫分化條件下, 分生能力強的細胞大量增殖, 酚類的氧化會受到抑制。在芽旺盛增殖時, 褐變也被抑制。此外, 培養(yǎng)條件不適宜, 如溫度過高或光照過強, 均可使多酚氧化酶的活性提高, 從而加速被培養(yǎng)組織的褐變。培養(yǎng)時間過長接種后材料培養(yǎng)時間過長, 未及時轉(zhuǎn)移, 也會引起材料的褐變, 甚至導(dǎo)致全部死亡, 這在培養(yǎng)過程中是經(jīng)?？梢姷摹?） 、褐變的防止選擇適當(dāng)?shù)耐庵搀w和培養(yǎng)條件： 選擇適當(dāng)?shù)耐庵搀w和培養(yǎng)條件是克服褐變的最主要的手段。外植體應(yīng)有較強的分生能力, 在最適宜的細胞脫分化和再分化的培養(yǎng)條件下, 使外植體處于旺盛的生長狀態(tài), 便可大大減輕褐變?？寡趸瘎┑淖饔茫涸谂囵B(yǎng)基中加入抗壞血酸、聚乙烯吡咯烷酮( PVP)、半胱氨酸等抗氧化劑, 或用抗氧化劑進行材料的預(yù)處理或預(yù)培養(yǎng), 可減輕醌類物質(zhì)的毒害。連續(xù)轉(zhuǎn)移：對于易褐變的材料, 進行連續(xù)轉(zhuǎn)移, 可以減輕醌類物質(zhì)對培養(yǎng)物的毒害作用。 試管苗的增殖與繼代培養(yǎng)（一）、加快試管苗的繁殖速度試管苗繁殖類型試管繁殖類型共有五種：微型扦插型、叢生芽增殖型、器官發(fā)生型、胚狀體發(fā)生型、原球莖發(fā)生型，一定要注意其遺傳穩(wěn)定性, 前三種途徑一般能保持遺傳穩(wěn)定性。試管繁殖速率及計算統(tǒng)計試管苗增殖速度, 有以苗為單位, 也有以芽或未生根的小莖作單位的, 以原球莖球狀體或胚狀體因難以統(tǒng)計, 則以瓶為單位。大多數(shù)以芽和苗作單位。試管苗理論上一年能繁殖多少, 可用下面的簡單公式計算:Y = mXnY = 年繁殖數(shù)m = 無菌母株苗數(shù)X = 每個培養(yǎng)周期增殖的倍數(shù)n = 全年可增殖的周期次數(shù)例如月季每5 周轉(zhuǎn)接一次, 甲品種每次增殖3 倍, 乙品種每次增殖5 倍, 丙品種每次增殖7 倍, 假定一開始都是一個芽, 那么這三個品種一年能繁殖多少呢? 根據(jù)公式可知:n =365d/35d= 10 .4 , 即每年可轉(zhuǎn)接10 次, 那么這三個品種年繁殖率分別計算如下:甲品種Y = 131 0 = 59 000 = 5 .9104乙品種Y = 151 0 = 9 760 000 = 9 .76106丙品種Y = 171 0 = 282 000 000 = 2 .82108從上可
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1