【正文】 時(shí)鐘，孵化器，照蛋箱，架盤(pán)天平，恒溫培養(yǎng)箱或CO2培養(yǎng)箱，低溫冰箱，普通冰箱，倒置顯微鏡。 接種動(dòng)物要盡量輕柔，保定要得當(dāng)、確實(shí)，以保證檢驗(yàn)人員的安全和接種部位及接種劑量的準(zhǔn)確。 兩“中和”物的量要準(zhǔn)確，中和溫度要恒定，中和期間要適當(dāng)搖動(dòng)，并有專(zhuān)人值守。除接種動(dòng)物外，所有操作均應(yīng)在生物安全試驗(yàn)室或超凈工作臺(tái)中進(jìn)行。用上述中和物接種靶動(dòng)物（方法1）、雞胚（方法2）或細(xì)胞培養(yǎng)（方法3），觀察其是否感染病毒，即可判斷疫苗病毒與血清的特異性。檢驗(yàn)結(jié)束后對(duì)操作臺(tái)、地面進(jìn)行徹底消毒，用過(guò)的吸管浸泡在消毒液中，檢驗(yàn)完畢后廢棄的產(chǎn)品均經(jīng)高壓滅菌處理。 判定 雞胚發(fā)育正常，CAM無(wú)異常，尿囊液紅細(xì)胞凝集陰性，該批制品判合格。 絨毛尿囊膜(CAM)接種試驗(yàn) 試驗(yàn)法 選擇發(fā)育良好的9～11日齡SPF雞胚10枚，(如為疫苗，至少含10個(gè)羽份)，在37℃培養(yǎng)7天，棄去在接種后24小時(shí)內(nèi)死亡的雞胚，但雞胚至少成活8/10，試驗(yàn)方可成立。培養(yǎng)結(jié)束時(shí)打開(kāi)雞胚，觀察雞胚有無(wú)異常，取尿囊液做紅胞凝集試驗(yàn)，室溫靜置15～30分鐘，觀察有無(wú)紅細(xì)胞凝集。 非禽源細(xì)胞（或細(xì)胞系）、種毒及其制品種毒或活疫苗 除另有規(guī)定者外，液體樣品取2～3瓶混合，凍干樣品取2～3瓶加入稀釋液溶解后混合，用相應(yīng)單特異抗血清在25℃中和1小時(shí)以完全中和樣品中的活性成分作為檢品，除另有規(guī)定者外，病毒中和劑量為1羽份。 試劑特異抗血清 檢驗(yàn)器具小試管、試管架、注射器(1ml)，吸管(1ml，5ml，10ml)，記號(hào)筆 樣品 每批樣品3～5瓶 其它 檢驗(yàn)用記錄紙、筆等4 檢驗(yàn)步驟 樣品處理 禽源細(xì)胞、種毒及其制品種毒或活疫苗 除另有規(guī)定者外，液體樣品取2～3瓶混合，凍干樣品取2～3瓶加入稀釋液溶解后混合，用相應(yīng)單特異抗血清在25℃中和1小時(shí)以完全中和樣品中的活性成分作為檢品。 嚴(yán)格無(wú)菌操作，防止交叉污染。2 注意事項(xiàng) 檢驗(yàn)所用原材料應(yīng)符合有關(guān)規(guī)定。1 技術(shù)依據(jù)及原理由于使用的生物活性原材料、生產(chǎn)過(guò)程等均可引起種毒、獸用病毒性活疫苗等污染外源病毒。8 附錄及附加說(shuō)明上述小瓶培養(yǎng)基是指100m小瓶中盛培養(yǎng)基20m1；小管培養(yǎng)基是指小試管()。7 結(jié)果判定 任何一次瓊脂平板上出現(xiàn)支原體菌落，判疫苗或血清不合格。 檢驗(yàn)完畢，開(kāi)封的檢品均要經(jīng)滅菌后再進(jìn)行處理。 檢驗(yàn)人員必須穿戴工作服和口罩。5 安全措施 檢驗(yàn)過(guò)程中注意防止對(duì)檢驗(yàn)人員和環(huán)境的污染。 每次移植培養(yǎng)陽(yáng)性對(duì)照，在同條件下培養(yǎng)觀察。也同時(shí)接種瓊脂平板2付。瓊脂固體平板培養(yǎng) 在每次液體培養(yǎng)物移植小管培養(yǎng)的同時(shí)，～，放在含5～10％二氧化碳的潮濕環(huán)境下36～38℃培養(yǎng)。在觀察期內(nèi)，如果發(fā)現(xiàn)小瓶或任何一支小管培養(yǎng)物顏色出現(xiàn)明顯變化，pH值變化達(dá)177。如在5日尚未見(jiàn)變化，繼續(xù)培養(yǎng)觀察5日，如此重復(fù)3次。如為凍干制品，則加液體培養(yǎng)基復(fù)原成混懸液后混合。檢測(cè)其他種類(lèi)的活疫苗用支原體培養(yǎng)基。3 材料、儀器、試劑的準(zhǔn)備及基本要求 儀器36～38℃普通溫箱，36～38℃二氧化碳培養(yǎng)箱，顯微鏡，試管架，10ml、5ml、2ml、1ml吸管，小試管和100ml培養(yǎng)瓶，記號(hào)筆，記錄紙。 保持實(shí)驗(yàn)室的清潔衛(wèi)生，嚴(yán)格遵守常規(guī)的消毒制度。 操作時(shí)禁止口吹吸管。2 注意事項(xiàng) 在檢測(cè)中必須遵守規(guī)定的程序，每次都必須設(shè)陽(yáng)性和陰性對(duì)照。7 結(jié)果判定任何1瓶每克組織（或每頭劑）的非病原菌數(shù)，不應(yīng)超過(guò)所檢產(chǎn)品的規(guī)定數(shù)量。6 記錄和計(jì)算培養(yǎng)72小時(shí)后，分別計(jì)算每個(gè)平板的雜菌數(shù)，并把兩付平板的雜菌數(shù)相加后求平均數(shù)，作為該瓶的雜菌數(shù)。 滴撒在操作臺(tái)、地面的異物要進(jìn)行消毒處理。5 安全措施 檢驗(yàn)過(guò)程中注意防止對(duì)檢驗(yàn)人員和環(huán)境的污染。4 檢驗(yàn)步驟污染雜菌的制品至少重新抽檢3瓶，分別進(jìn)行雜菌計(jì)數(shù)。3 材料、儀器、試劑的準(zhǔn)備及基本要求 儀器36～38℃普通溫箱，試管架，10ml、5ml、1ml吸管，記號(hào)筆，記錄紙，顯微鏡。 各類(lèi)生物制品的檢驗(yàn)操作應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行。6 記錄和計(jì)算檢品在接種相關(guān)培養(yǎng)基后，每天觀察溫箱內(nèi)的培養(yǎng)情況并記錄觀察結(jié)1 技術(shù)依據(jù)及原理某些疫（菌）苗允許有一定數(shù)量的非病原性雜菌，但這類(lèi)制品如污染雜菌，必須作雜菌計(jì)數(shù)。 滴撒在操作臺(tái)、地面的異物要進(jìn)行消毒處理。5 安全措施 檢驗(yàn)過(guò)程中注意防止對(duì)檢驗(yàn)人員和環(huán)境的污染。如發(fā)現(xiàn)個(gè)別瓶有雜菌或結(jié)果可疑時(shí)，可重檢原瓶（如為安瓿或凍干制品，可重抽樣品），如無(wú)菌或無(wú)雜菌生長(zhǎng)，可作無(wú)菌或純粹通過(guò)。 如培養(yǎng)后混濁不易判定時(shí)，可移植l次，再判定。 血液制品和混濁制品如不加防腐劑或抗生素，接種量、培養(yǎng)條件、。 細(xì)菌性活疫苗（凍干制品恢復(fù)原量）及不含防腐劑、抗生素的其它制品或稀釋液，、 ，1支置37℃；1支置25℃，℃，均培養(yǎng)5日。1支置37℃；1支置25℃，℃，均培養(yǎng)5日，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。病毒液滅活后和細(xì)菌毒素脫毒后接種對(duì)本毒敏感的細(xì)胞、禽胚或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物，應(yīng)正常。 病毒原毒液和其它配苗組織乳劑、穩(wěn)定劑及半成品的無(wú)菌檢驗(yàn) ，1支置37℃培養(yǎng)；1支置25℃培養(yǎng)，觀察3～5日，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。 病原性鑒定 。 滅活檢驗(yàn) 用適于本菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，或?qū)Ρ径久舾械募?xì)胞、組織和動(dòng)物。 霉菌及腐生菌檢驗(yàn) 用葡萄糖蛋白胨湯（）。 成品的無(wú)菌或純粹檢驗(yàn)應(yīng)按每批或每個(gè)亞批進(jìn)行，每批按瓶數(shù)百分之一抽樣，但不應(yīng)少于5瓶，最多不超過(guò)10瓶，分別進(jìn)行檢驗(yàn)。4 檢驗(yàn)步驟 抽樣 應(yīng)隨機(jī)取樣并注意代表性。霉菌及腐生菌檢驗(yàn) 用葡萄糖蛋白胨湯（）。3 材料、儀器、試劑的準(zhǔn)備及基本要求 儀器24～26℃、36～38℃溫箱，檢驗(yàn)器具，試管架，10ml、5ml、1ml吸管，記號(hào)筆，記錄紙。 檢驗(yàn)過(guò)程要仔細(xì)、認(rèn)真。 為防止交叉污染，一個(gè)樣品用一個(gè)吸管或一個(gè)注射器。各類(lèi)生物制品必須按規(guī)定作無(wú)菌檢驗(yàn)或純粹檢驗(yàn)，全部操作應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行。1 技術(shù)依據(jù)及原理:生物制品（除另有規(guī)定者外）都不應(yīng)有外源微生物污染。 測(cè)定樣品真空時(shí)，注意遠(yuǎn)離疫苗瓶上的金屬帽，否則會(huì)造成錯(cuò)誤信號(hào)，甚至在金屬處將玻璃擊穿而造成漏洞。5 安全措施 使用真空檢測(cè)器時(shí)，人體不要接近儀器的頭部電簧，以免高頻電流的電擊，（但沒(méi)有生命危險(xiǎn)）。 將放電簧頭對(duì)準(zhǔn)被檢樣品（簧頭不要觸到瓶壁），打開(kāi)開(kāi)關(guān)，間歇適用（時(shí)開(kāi)時(shí)關(guān)）。4 檢驗(yàn)步驟 取待檢樣品，一字排列于暗室的操作臺(tái)上，使瓶與瓶之間有一定距離。 樣品 所有被檢樣品。 被檢樣品從冷庫(kù)中取出應(yīng)擦干瓶壁上的水份，樣品達(dá)到室溫后再進(jìn)行測(cè)定。2 注意事項(xiàng) 按照規(guī)定要求，在檢驗(yàn)過(guò)程中至少要有一名檢驗(yàn)員和一名復(fù)核員共同進(jìn)行，確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。1 技術(shù)依據(jù)及原理依據(jù)《獸用生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》附錄中的真空度測(cè)定法，即使用高頻火花真空測(cè)定器測(cè)定。 按F3預(yù)滴定 按F1自動(dòng)輸入樣品量 按F2顯示樣品重量 按F3 確認(rèn)樣品重量 滴定至終點(diǎn)自動(dòng)打印出結(jié)果，打印結(jié)束，按F3返回到待機(jī)模式 ，同法操作。 水份測(cè)定： 將樣品置天平稱(chēng)重 連續(xù)按F3鍵，顯示屏出現(xiàn)please add sample ～。l純水置天平稱(chēng)重) 注射器放回天平后按F3。 滴定儀屏幕顯示待機(jī)模式Drift值在25以下指示箭頭穩(wěn)定→(平指)時(shí)，開(kāi)始滴定標(biāo)定滴度： 按F2鍵至顯示屏出現(xiàn)H2O ISO 3696 連續(xù)按F3鍵至顯示屏出現(xiàn)please add sample gapprox 天平去皮，通過(guò)進(jìn)樣孔注入已稱(chēng)重的純水，(用10181。3 檢驗(yàn)步驟 接通電源、打開(kāi)費(fèi)休水份滴定儀(梅特勒DL31)主機(jī)、打印機(jī)、天平開(kāi)關(guān)。 樣品 每批疫苗4個(gè)樣品。 試劑卡氏試劑、無(wú)水甲醇，純水。雞新城疫滅活疫苗生產(chǎn)工藝流程圖、主要過(guò)程控制點(diǎn)和控制項(xiàng)目注：*為關(guān)鍵控制點(diǎn) 為控制項(xiàng)目抽 樣*檢 驗(yàn)*裝箱入庫(kù)*貼 簽*分 裝清 洗 膠 塞*脈動(dòng)蒸汽滅菌分裝前、中、后無(wú)檢*乳化加 塞壓 蓋安全檢驗(yàn)無(wú)菌檢驗(yàn)效力檢驗(yàn)鋁蓋分裝瓶*滅菌清洗*滅菌物理性狀清洗*油相制備*水相制備甲醛含量測(cè)定硫柳汞含量測(cè)定15℃冷凍保存收 獲 *非免疫種蛋種蛋選擇種蛋消毒前孵化接種途徑接種劑量無(wú)菌檢驗(yàn)毒價(jià)測(cè)定*后孵化及照蛋*接 種*冷 蛋照蛋時(shí)間培養(yǎng)溫濕度冷蛋時(shí)間冷蛋溫度無(wú)相應(yīng)抗體*滅活 滅活檢驗(yàn) 附錄1 技術(shù)依據(jù)及原理卡氏法是利用卡氏試劑中的碘和二氧化硫在砒啶和甲醇溶液中能與水起定量反應(yīng)的原理，從而測(cè)定水份。 效力檢驗(yàn) 用30～60日齡健康易感雞（HI抗體≤1：4）15只，其中10只各皮下或肌肉注射疫苗20μl（），另5只不免疫作對(duì)照，21～28日后，連同條件相同的對(duì)照雞5只，各肌肉注射105ELD50強(qiáng)毒，觀察14日，對(duì)照組全部死亡，免疫組至少保護(hù)7只為合格。 無(wú)菌檢驗(yàn) 按《無(wú)菌檢驗(yàn)或純粹檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》進(jìn)行，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。 粘度 用1ml吸管（），吸取25℃左右的疫苗1ml，令其垂直自然流出。雙相苗為水包油包水型，滴于冷水中，應(yīng)呈云霧狀擴(kuò)散。 劑型 單相苗為油包水型。8 分裝 定量分裝，加蓋密封。乳化后取3～5ml以3000r/min離心10分鐘，若分層嚴(yán)重應(yīng)再攪拌1次。 取油相2份放入乳化罐內(nèi)，開(kāi)動(dòng)電機(jī)慢速轉(zhuǎn)動(dòng)攪拌，同時(shí)徐徐加入胚液1份，加完后再以10000r/min攪拌。乳化后，取3～5ml以3000r/