【正文】 穩(wěn)定。分別在 0，2，4，6，8，12 h 進(jìn)樣10 μL，測(cè)定峰面積。表 31 連翹中蘆丁穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果連翹中蘆丁 峰面積0h 786712h 785894h 767646h 786268h 7872012h 78683計(jì)算其峰面積的 RSD 值為 %，說明樣品在 12 h 內(nèi)很穩(wěn)定。分別在 0，2，4，6，8，12 h 進(jìn)樣10 μL，測(cè)定峰面積。 師范學(xué)院 2022 屆本科畢業(yè)論文 90500001000001500002022002500000 2 4 6 8 10 12uL峰面積 圖 34 蘆丁線性回歸曲線 精密度試驗(yàn)在 節(jié)色譜條件下，精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液 5 μL，連續(xù)進(jìn)樣 5 次，測(cè)得標(biāo)準(zhǔn)樣品峰面積為：118576，119387，119670，120223，117573，RSD=%(n=5)。g范圍內(nèi)與峰面積成良好線性關(guān)系。得出對(duì)照品色譜圖(如圖 33)。mL 1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液 mL 作為待測(cè)對(duì)照品。HPLC測(cè)定樣品提取目標(biāo)組分后的殘?jiān)?，無待測(cè)組分的特征峰出現(xiàn)，說明已完全提取樣品中的蘆丁。具體操作為：將樣品分別用純甲醇超聲提取20,30,40,50,60 min，各重復(fù)提取3 師范學(xué)院 2022 屆本科畢業(yè)論文 8次，超聲提取按本實(shí)驗(yàn)條件測(cè)定蘆丁含量。0 1 2 3 4 5 6提 取 次 數(shù)提取百分率圖 32 樣品提取次數(shù)與目標(biāo)提取百分率關(guān)系在盡量完全的提取目標(biāo)成分的前提下，綜合考慮降低實(shí)驗(yàn)成本及縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間、提高效率，供品溶液由樣品通過3次提取配制而成。 流動(dòng)相的優(yōu)化由于黃酮類化合物常帶有酚羥基，在水中會(huì)部分解離，而未解離的羥基與固定相作用較強(qiáng)，從而導(dǎo)致拖尾，所以黃酮類的反相 HPLC 中需要加入酸調(diào)節(jié)pH 以抑制解離，克服拖尾現(xiàn)象，這與離子抑制色譜技術(shù)的原理是一致的 [14]，基于文獻(xiàn) [15]采用的流動(dòng)相體系，本試驗(yàn)通過對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行多次對(duì)比、優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，同時(shí)考慮降低實(shí)驗(yàn)成本，結(jié)果表明 V(% )∶V(磷酸溶液)為(6:4)混合溶液相對(duì)于其他流動(dòng)相有良好的分離效果，目標(biāo)與其他組分均之間到達(dá)基線分離(R)，且保留值適宜，滿足分析方法要求。在 205 nm 處供試品中的其它不明物組分有一定吸收，將對(duì)測(cè)定產(chǎn)生干擾，導(dǎo)致測(cè)定誤差，在 258 nm、360 nm 處雖無其它組分干擾吸收，但在 360 nm 處的吸收更強(qiáng)。Spectrum at time min.nm200 400 600 800mAU0100200mAU0100200 min圖 31 蘆丁對(duì)照品紫外光譜圖蘆丁與樣品相同保留值處組分峰紫外光譜具有良好一致性。3 結(jié)果與討論 檢測(cè)波長的選擇蘆丁對(duì)照品與供試品在本實(shí)驗(yàn)溶劑體系下，用二極管陣列檢測(cè)技術(shù) [12,13]對(duì)組分峰進(jìn)行全波段紫外光譜掃描。(6) 關(guān)機(jī)操作(a)全部測(cè)定完畢后，按規(guī)定用適當(dāng)溶劑(一般用甲醇)沖洗泵，進(jìn)樣器、柱及檢測(cè)器。(d)一個(gè)完整的測(cè)試方法包括：進(jìn)樣前的穩(wěn)流，一般 25 min；基線歸零；進(jìn)樣閥的 loadinginject 轉(zhuǎn)換；測(cè)試時(shí)間，隨樣品的不同而不同。(c)根據(jù)需要選擇配件，包括進(jìn)樣閥，泵，檢測(cè)器等。(5) 設(shè)計(jì)測(cè)試方法： (a)點(diǎn)擊 file，選擇 select users and methods，即可選取各種現(xiàn)有的測(cè)試方法。(4) 調(diào)節(jié)流量，初次使用新流動(dòng)相，可先試一下壓力，流速越大壓力越大，通常不要超過 2022。沖洗進(jìn)樣閥，需在 manual 菜單下，點(diǎn)擊purge 再點(diǎn)擊 start，沖洗速度不要超過 10 ml(3) 若系統(tǒng)有一段時(shí)間未用，或換了新流動(dòng)相，需先沖洗泵和進(jìn)樣閥。 島津 LC?20AT 高效液相色譜系統(tǒng)的操作(1) 打開 HPLC 工作站，連接流動(dòng)相管道和檢測(cè)系統(tǒng)。 高效液相色譜法測(cè)量 流動(dòng)相的準(zhǔn)備(1) 根據(jù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的流動(dòng)相，配制流動(dòng)相溶液，并根據(jù)需要選擇不同的濾膜( μm )進(jìn)行過濾。將待測(cè)樣品桑葚于 75℃干燥至恒重，粉碎過 mm 篩，精密稱定約 g，置于 25 mL 錐形瓶中，加入甲醇 15 mL，避光超聲處理 40 min，上清液轉(zhuǎn)入 師范學(xué)院 2022 屆本科畢業(yè)論文 525 mL 容量瓶。 供品溶液的制備將待測(cè)樣品連翹于 75℃干燥至恒重，粉碎過 mm 篩，精密稱定約 g，置于 25 mL 錐形瓶中，加入甲醇 15 mL，避光超聲處理 40 min，上清液轉(zhuǎn)入25 mL 容量瓶。 樣品制備 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備精密稱量經(jīng)五氧化二磷干燥的蘆丁對(duì)照品 mg，置 25 mL 容量瓶，用甲醇定容至刻度，搖勻，超聲，再精密吸取 1 mL 稀釋十倍，配制成濃度為232μgmol1，紫外檢測(cè)波長為 360 nm，進(jìn)樣量為 5 mL，柱溫為 35 ℃。目前國內(nèi)對(duì)連翹及桑葚中蘆丁含量測(cè)定主要有比色法、紫外分光光度法和HPLC 及 GC 法等，但比色法的干擾因素較多，而紫外分光光度法準(zhǔn)確度不高，因此本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定連翹及桑葚中蘆丁的含量。高效液相色譜的缺點(diǎn)是有“柱外效應(yīng)” 。 (5) 分析速度快、載液流速快：較經(jīng)典液體色譜法速度快得多，通常分析一個(gè)樣品在 15～30min，有些樣品甚至在 5min 內(nèi)即可完成，一般小于 1 小時(shí)。 (3) 高靈敏度：紫外檢測(cè)器可達(dá) ng，進(jìn)樣量在 μL 數(shù)量級(jí)。 (2) 高效：分離效能高。高效液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將 師范學(xué)院 2022 屆本科畢業(yè)論文 3具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。蘆丁的化學(xué)結(jié)構(gòu)式(如圖11)。其具有抗炎作用、維生素P樣作用、抗病毒作用、抑制醛糖還原酶作用等。作用與用途：現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)證明蘆丁有抗氧化 [8] 、抑制HepG2細(xì)胞的生長[9] 、降低單純性肥胖大鼠的血糖 [ 10] 、抗血小板活化因子與受體結(jié)合 [11]等作用。 師范學(xué)院 2022 屆本科畢業(yè)論文 2 蘆丁的簡介蘆丁(Rutin)又名蕓香苷、紫槲皮苷，為淺黃色針狀晶體(水)，熔點(diǎn)176℃，結(jié)構(gòu)為3’,4’四羥基3 蕓香糖黃酮，是一種來源很廣的黃酮類化合物。(2) 營養(yǎng)功效。價(jià)值用途：(1) 藥理作用。 桑葚的簡介桑葚，又稱桑果、桑棗，為?？坡淙~喬木桑樹的成熟果實(shí)。連翹的花及未熟的果實(shí)，采集后用水煮20分鐘，每天在早上或睡前用此水洗臉，有良好的殺菌、殺螨、養(yǎng)顏?zhàn)o(hù)膚作用。連翹種子可提取食用油脂。連翹中化學(xué)成分主要為木質(zhì)素類、黃酮類、苯乙醇苷類、C 6C2天然醇類等 [2,3]。果實(shí)含連翹酚、甾醇化合物、皂甙(無溶血性)及黃酮醇甙類、馬苔樹脂醇甙等。中藥味苦，性微寒。價(jià)值用途：(1) 藥用植物。 Rutin。 Forsyth