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min后，靜置分層；收集下層乙腈相，正己烷相留在分液漏斗，待本試樣后續(xù)脫脂重復(fù)使用。方法特點(diǎn)%～%之間， %～%之間， mg/kg。將提取液置于50 ℃水浴上氮?dú)獯蹈桑?mL 三氯甲烷溶解， μm微孔濾膜后用液相色譜分析。圖 11 番茄紅素標(biāo)準(zhǔn)溶液的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)圖（六） 高效液相色譜法測(cè)定保健食品中的番茄紅素[66]方法步驟稱取均勻試樣2 g( g)于50 mL離心管中，加10 mL的丙酮/石油醚(體積比為1:2)，加入10 mL水(固體樣品)，旋渦1 min，超聲振蕩10 min，5000 r/min 離心10 min，殘?jiān)儆?0 mL的丙酮/石油醚(體積比為1:2)提取1次，離心后合并濾液于100 mL分液漏斗中。在上述色譜條件下， min，標(biāo)準(zhǔn)溶液的多反應(yīng)檢測(cè)圖見(jiàn)圖13。質(zhì)譜條件：離子源：大氣壓化學(xué)源（APCI）；掃描方式：正離子掃描；檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；氣簾氣壓力（CUR）：30 Psi；霧化氣壓力（GS1）：80 Psi；離子源溫度（TEM）：380 ℃；放電針電流（NC）： μA；碰撞氣（CAD）： Psi；去簇電壓（DP）： V；碰撞室入口電壓（EP）： V；其它參數(shù)見(jiàn)表4。 （），于50mL離心管中，分別加入標(biāo)準(zhǔn)工作液1 mL，按以上實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行。測(cè)定方法 （），于50 mL離心管中，分別加入5 mL無(wú)水乙醇、50%氫氧化鉀溶液3 mL，旋渦混勻2 min，超聲提取10 min，置于80℃水浴鍋中皂化2h，每10 min振搖一次，冷卻至室溫，加入10 mL提取液，渦旋提取5 min，5000 r/min下離心3 min，分取上清液于旋蒸瓶中，再用10 mL提取液分別提取2次，合并提取液，40 ℃下旋蒸濃縮近干，用10 mL石油醚溶解殘?jiān)齼艋?。?）層析用氧化鋁（中性，74 μm ~ 150 μm）： 105℃干燥2h，于干燥器中冷至室溫，每100g 中加入2 mL水降活，混勻后密封，放置12h 后使用。（5）番茄紅素標(biāo)準(zhǔn)工作液：根據(jù)需要用含1% ng/mL、 ng/mL、 ng/mL、 ng/mL、 ng/mL、 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。（3）定容溶液：量取10 mL乙腈，加入90 mL含1% BHT的石油醚，搖勻。試劑和材料（1）含1% BHT的二氯甲烷溶液： g BHT（），用100 mL二氯甲烷溶解。圖 10 前花青素的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖方法特點(diǎn)方法的檢出限為：104 g/100g，104 g/100g。 離心機(jī)；液相色譜參考條件：色譜柱：耐低pH型的ODS C18柱， mm150 mm，5 μm；柱溫：35 ℃。將正丁醇與鹽酸按95:5的體積比混合后，取出15 mL置于具塞錐形瓶中， mL硫酸鐵銨溶液和2 mL試樣溶液，混勻，置沸水水浴回流，精確加熱40 min后，立即置冰水中冷卻，過(guò)微孔濾膜后高效液相色譜儀測(cè)定。含油試樣：根據(jù)試樣含量稱取50 mg~500 mg（ g）試樣于小燒杯中，用5 mL二氯甲烷使試樣溶解，并倒入50 mL容量瓶中，再用甲醇多次洗燒杯，并入50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。根據(jù)高錳酸鉀溶液的消耗量計(jì)算出試樣中過(guò)氧化氫酶活動(dòng)度。 過(guò)氧化氫酶活動(dòng)度X按式（3）計(jì)算：..........................（3）式中：X—過(guò)氧化氫酶活動(dòng)度，單位為毫克過(guò)氧化氫每克（mg H2O2/g）；V0—空白試驗(yàn)用去高錳酸鉀溶液體積，單位為毫升（mL）；V1—試樣滴定用去高錳酸鉀溶液體積，單位為毫升（mL）；c—試劑高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，單位為摩爾每升（mol/L）；m—試樣質(zhì)量，單位為克（g）；M—試樣水分含量，%；17— mL高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液[c（1/5 KMnO4）= mol/L]相當(dāng)?shù)腍2O2的質(zhì)量。（3） 空白試驗(yàn)： mL濾液于錐形瓶中，直接煮沸1 min。（2） 酶活動(dòng)度的測(cè)定 mL濾液于錐形瓶中，直接煮沸1 min。（二） 保健食品中過(guò)氧化氫酶（CAT）活性的測(cè)定[64]分析方法（1） 過(guò)氧化氫酶的提取稱取約1g試樣，倒入研缽中。方法特點(diǎn)本方法以修改Marklund方法和化學(xué)發(fā)光法測(cè)定保健食品中SOD活性。表 1 SOD活性測(cè)定加樣表試液空白樣液SOD液A液/mL蒸餾水/mL樣液或SOD液/μL—B液/mL液體樣品按式（1）計(jì)算：SOD活力（U/mL）= ..........................（1）式中：U/mL—SOD酶活力單位；ΔA325—鄰苯三酚自氧化速率；ΔA’325—樣液或SOD酶液抑制鄰苯三酚自氧化速率；V—所加酶液或樣液體積，單位為毫升（mL）；D—酶液或樣液的稀釋倍數(shù)；—反應(yīng)液總體積，單位毫升（mL）。樣液和SOD酶液抑制鄰苯三酚自氧化速率按上述步驟分別加入一定量樣液或酶液使抑制鄰苯三酚自氧化速率為1/2ΔA325（min1），即ΔA’325（min1）。測(cè)定方法鄰苯三酚自氧化速率測(cè)定 在25℃左右，于10 mL， mL， mL。B液： mol/L鄰苯三酚鹽酸溶液。四、功效成分檢測(cè)方法（一）保健食品中超氧化物歧化酶（SOD）活性的測(cè)定修改的Marklund方法試劑A液： mol/L三羥甲基氨基甲烷（Tris）鹽酸緩沖溶液（內(nèi)含1 mmol/LEDTALi H等[61]用LCAPCIMS法測(cè)定魚子中的類胡蘿卜素和維生素A的含量，同時(shí)方法還研究了測(cè)定過(guò)程中基質(zhì)效應(yīng)的影響。方法操作簡(jiǎn)單,靈敏度高,線性范圍寬。樣品用水溶解破膜,以乙酸乙酯提取，用HPLC檢測(cè)番茄紅素的含量。 μg/mL ~18 μg/mL ,%~% , %~%。DingQiang Lu[58]建立反相高效液相色譜法測(cè)定番茄紅素微膠囊中番茄紅素含量的方法。該法采用Waters NovaPak C18 ( mm150 mm id. 4 μm),以甲醇：乙腈(80:20)為流動(dòng)相,470 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)， % , %； %, %。在3mg/ kg ~ 24 mg/ kg添加水平, % ~% , %~%。趙平娟[55]建立了番茄及其制品中番茄紅素高效液相色譜法測(cè)定方法。g/mL~ 181。L時(shí)，檢出限3104 g/kg，定量限1103 g/kg。其方法原理是利用番茄紅素易溶于二氯甲烷等溶劑的理化特性，試樣經(jīng)焦性沒(méi)食子酸二氯甲烷溶液提取，定容，過(guò)濾后進(jìn)高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離后，由紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)保留時(shí)間和峰面積進(jìn)行定性和定量。張?jiān)瞥萚53]建立了高效液相色譜示差折光檢測(cè)法測(cè)定維生素C葡萄糖注射液含量的方法， g/L~ g/ g/L~ g/L的濃度范圍內(nèi)呈線性，%%，%%。謝志鵬等[52]建立并應(yīng)用了一種集高效液相色譜(HPLC)、流動(dòng)注射(FI)和電化學(xué)發(fā)光三者優(yōu)點(diǎn)于一體的HPLCFI聯(lián)用電化學(xué)發(fā)光分析新方法，方法基于將在線恒電流電解產(chǎn)生ClO與Luminol構(gòu)成了較強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光體系，而維生素C對(duì)該化學(xué)發(fā)光體系有抑制作用，與流動(dòng)注射技術(shù)相結(jié)合。何優(yōu)選等[51]建立了一種高效液相色譜測(cè)定沙田柚果肉中維生素C含量的方法。利用該方法對(duì)400份谷子種質(zhì)資源進(jìn)行了鑒定、評(píng)價(jià), 并篩選出一批高維生素E含量的種質(zhì)資源。Amin Ismail等[48]用高效液相色譜法測(cè)定了5種蔬菜在不同種植方式下維生素C、β胡蘿卜素和葉黃素含量的變化。 μg/mL~ μg/mL。高效液相色譜法周林宗等[45]研究了固相萃取富集和預(yù)分離微柱高效液相色譜快速測(cè)定枸杞樣品中類胡蘿卜素的方法，方法采用用二極管矩陣檢測(cè)器檢測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為450 nm，枸杞樣品中的幾種類胡蘿卜素在5 min內(nèi)可達(dá)到基線分離，方法標(biāo)準(zhǔn)回收率為95%~103%，%~%。HerreroMart237。根據(jù)凝膠上電泳分離的SOD區(qū)帶的著色深淺與面積大小，對(duì)樣品進(jìn)行半定量分析，也可制作校正曲線計(jì)算樣品中的SOD含量。電泳則采取垂直板聚丙烯酰胺凝膠電泳。%，%。楊萬(wàn)興等[43]建立了高效薄層掃描法測(cè)定維生素E霜中維生素E含量的方法。薄層色譜法薄層色譜法測(cè)定維生素E只適用于αE。化學(xué)發(fā)光法化學(xué)發(fā)光法[42]測(cè)定SOD：在25℃ mL pH ， mL 1 mmol/LEDTANa2溶液， mL 1mmol/L黃嘌呤溶液，5 μmol/L的測(cè)試管中再加10 μL待測(cè)樣本(對(duì)照管中加入10 μL生理鹽水，放入發(fā)光儀測(cè)試室)，最后加入100 μL黃嘌呤氧化酶應(yīng)用液，啟動(dòng)反應(yīng)。OH與喹啉經(jīng)芳香羥基化反應(yīng)，羥基化喹啉在堿性介