酶標(biāo)儀的工作原理與基本結(jié)構(gòu)-文庫吧資料
2025-06-24 01:31本頁面
【正文】 。在可見光范圍內(nèi)，比色皿常用無色光學(xué)玻璃或塑料制成；在紫外區(qū)，常用石英玻璃來制作。需要說明的是，這種濾光片上的標(biāo)稱吸光度值，可能與實(shí)際值有偏差，使用時(shí)要以實(shí)際使用的波長下的測定值為準(zhǔn)。另外還有一種濾光片叫中性濾光片，可以用它作吸光度的標(biāo)準(zhǔn)。干涉濾光片雖然性能優(yōu)越，但其價(jià)格昂貴。它大多采用多層鍍膜等復(fù)雜的工藝制成。（三）干涉濾光片由光的干涉原理可知，來自同一光源的兩束光線，在空間不同的路徑而相互疊加時(shí)，若光程差為波長的整數(shù)倍，則互相加強(qiáng)；若光程差為半個(gè)波長的奇數(shù)倍，則互相減弱。此外，雖然一般不認(rèn)為透明玻璃是濾光片，但是普通玻璃確實(shí)不能透過波長小于300nm而大于2600nm的光波。溫度變化還從其他途徑影響比色分析。濾光片的透光特性與溫度有關(guān)。如42號和50號的峰值波長分別為420nm和500nm，65號的半高波長為650nm。目前，國內(nèi)生產(chǎn)的光電比色計(jì)一般只附有常用的42號、50號和65號3塊波光片。陡度定義為：陡度＝半高波長/(λ1λ3)。半高波長是指曲線前沿TM /2處所對應(yīng)的波長，圖中用λ1表示。復(fù)合濾光片可以得到比玻璃濾光片窄得多的半寬度。（二）截止和復(fù)合濾光片截止濾光片的特性是其透光部分的透射比接近100，而其他部分的透射比則迅速下降為0，透光部分不存在兩端截止的通頻帶，因此，它沒有半寬度的概念，其透光特性如圖7所示。帶通濾光片的透光特性如圖6所示。其優(yōu)點(diǎn)是熱穩(wěn)定性較好、價(jià)格便宜，是普通光電比色計(jì)最常用的濾光片。圖6 吸收濾光片的透光曲線（一）吸收濾光片吸收濾光片又叫玻璃濾光片，它是在熔化的玻璃中摻以不同的添加劑制成的。半寬度越小，表示透過的單色光越純。即：半寬度＝λ2λ1。曲線上與最大透射比TM對應(yīng)的波長（480nm），叫峰值波長。濾光片通過單色光的純度，通常用其光譜特性曲線的半寬度表示。二、濾光片濾光片又叫濾色片，其作用是控制波長或能量的分布，即它只讓一定波長范圍內(nèi)的光通過，而將其余不需要的波長的光濾去，相當(dāng)于電路中的帶通濾波器。在直流供電時(shí)，通常采用電子穩(wěn)壓電路供電。這兩種鎢燈既可以用交流供電，也可以用直流供電。已知在可見光區(qū)，其能量輸出的波動(dòng)約為所加電壓波動(dòng)的4次方倍。鹵鎢燈的壽命通常可達(dá)2000h以上，它的另一優(yōu)點(diǎn)是體積比同功率的鎢絲燈要小得多。這一過程一般稱為鹵鎢循環(huán)或鎢的再生循環(huán)。當(dāng)鹵化鎢碰上高溫?zé)艚z時(shí)，又分解成鹵素和鎢。鹵鎢燈有比普通鎢燈高得多的發(fā)光效率和長得多的壽命，這主要是因?yàn)樵邴u鎢燈中，鎢蒸氣在靠近燈壁的低溫區(qū)與鹵素相結(jié)合，生成了揮發(fā)性的鹵化鎢氣體。（二）鹵鎢燈鹵鎢燈是在鎢燈中加入適量的鹵素或鹵化物（如碘鎢燈內(nèi)加入純碘，溴鎢燈中加入溴化氫）而制成的，有時(shí)也稱作鎢鹵素?zé)艉望u素?zé)?。?yán)重的會使燈壁發(fā)黑，無法使用。燈絲的溫度越高，蒸發(fā)速度越快。鎢絲燈的特點(diǎn)是結(jié)構(gòu)簡單、價(jià)格便宜、壽命較長，通常可以工作1000h以上。（一）鎢絲燈鎢絲燈是可見光區(qū)和近紅外區(qū)最常用的光源，它適應(yīng)的波長范圍在320～2500nm之間，如圖5所示。實(shí)際上，這種理想的光源并不存在，所有光源的光強(qiáng)都隨波長而變。光電檢測器將照在它上面的光信號的強(qiáng)弱轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘柕拇笮?，最后由顯示部分將測量結(jié)果顯示出來。圖4 光電比色計(jì)方框圖光源發(fā)出的復(fù)合光經(jīng)濾光片濾除后，變?yōu)榻频膯紊?。一般的光電比色?jì)由光源、濾光片、比色皿、光電檢測器、放大和顯示等6部分組成。 第二節(jié) 光電比色計(jì)的基本結(jié)構(gòu)利用光電池或光電管等光電元件作檢測器，來測量通過有色溶液的透射比或吸光度，進(jìn)而求出物質(zhì)含量的方法叫光電比色法。在同樣工作條件下，用儀器測出Ax后，查標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可求得被測溶液的濃度值Cx 。（二）標(biāo)準(zhǔn)曲線法這種方法分以下幾步進(jìn)行：(1) 先配制5種以上標(biāo)準(zhǔn)濃度的溶液；(2) 測出每種溶液的吸光度A；(3) 做A、C標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，如圖3所示。 Ax/ AS由于儀器的性能和工作環(huán)境都是在不斷變化的，因此，在采用計(jì)算機(jī)時(shí)，必須每次都要對標(biāo)準(zhǔn)液和被測液進(jìn)行測量，然后利用上式進(jìn)行計(jì)算，否則，會帶來較大的測量誤差。這一關(guān)系式是設(shè)計(jì)光電比色計(jì)和分光光度計(jì)的基礎(chǔ)，也是比色分析的基本計(jì)算公式之一。Lx）如果測定時(shí)選用相同厚度的比色皿使L相等，并使用同一波長的單色光，再保持溫度相同，則K也相等。LS/（KxLx將兩式相除可得： AS /Ax ＝KSLS在待測溶液中： Ax＝Kx在標(biāo)準(zhǔn)溶液中： AS＝KS（一）計(jì)算法根據(jù)被測溶液濃度的大致范圍，先配制一已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。四、定量方法用光電比色計(jì)和分光光度計(jì)測定有色溶液的濃度有計(jì)算法和標(biāo)準(zhǔn)曲線法兩種。K值越大，說明比色分析時(shí)的靈敏度越高。L），它表示有色溶液在單位濃度和單位厚度時(shí)的吸光度。這一定律是比色分析和其他吸收光譜分析的理論基礎(chǔ)。此公式說明：在入射光一定時(shí)，溶液的吸光度與溶液的濃度及液層厚度成正比。C如果入射光的強(qiáng)度不同，則光的吸收只與液層厚度及溶液的濃度有關(guān)。當(dāng)一束平行單色光通過有色溶液時(shí)，由于溶液吸收了一部分光線，光線的強(qiáng)度就要減弱。在比色分析中，常把透過光的強(qiáng)度占入射光的強(qiáng)度的百分比[(It / Io)％]稱為透過率或透射比，用T表示，即T＝（It / Io）％。這樣，上式可簡化為：Io＝Ia +It當(dāng)入射光的強(qiáng)度一定時(shí)，被吸收的光的強(qiáng)度越大，透過光的強(qiáng)度就越小。設(shè)入射光的強(qiáng)度為IO ，吸光度的強(qiáng)度為Ia ，反射光的強(qiáng)度為Ir，透過光的強(qiáng)度為It。它是由朗伯定律和
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