紫色達(dá)利菊所含縮合單寧對(duì)肉牛后腸大腸桿菌抑制能力及其作用機(jī)理-文庫(kù)吧資料
2025-06-01 18:07本頁(yè)面
【正文】 微生物數(shù)量的測(cè)定 將活化后的細(xì)菌轉(zhuǎn)接到經(jīng)高壓滅菌后的 M9培養(yǎng)基中 ( (M9 Minimal Salts, Sigma ChemicalCo.)，同時(shí)每升中添加 5g 水解酪蛋白氨基酸（ casamino acids）， Mg2SO4 純培養(yǎng)及對(duì)細(xì)胞膜通透性的影響 ? ? 試驗(yàn)一，試驗(yàn)采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，將 100μl 致病性大腸桿菌 O157:H7（ 24h 培養(yǎng)液）加入到 95ml 培養(yǎng)基中，同時(shí)加入 5ml 一定濃度的縮合單寧（ 11 種）使終濃度為 400 μg/ml。 純培養(yǎng)及對(duì)細(xì)胞膜通透性的影響 ? 3. 縮合單寧的純化 凍干后的植物粗提物溶于 200ml 99%的乙醇中，然后與等比例去離子水混合，互溶后加入交聯(lián)葡聚糖柱（ Sephadex LH20）中，攪拌后真空抽濾，反復(fù)加入 50%乙醇水溶液直到真空抽濾溶液無(wú)色為止，棄去濾液，然后加入 50%丙酮水溶液，反復(fù)沖洗直到濾液變?yōu)闊o(wú)色，濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干后再經(jīng)氮?dú)獯祾邇x吹干后凍干，此時(shí)凍干樣為純縮合單寧，純化后的縮合單寧在低溫黑暗中保存（交聯(lián)葡聚糖使用前需浸泡在 50%丙酮水溶液中） 純培養(yǎng)及對(duì)細(xì)胞膜通透性的影響 ? 微生物樣品的準(zhǔn)備 非致病性大腸桿菌（ 25922。重復(fù)抽提一次，將兩層液相混合后經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（ 35℃ 120rpm, Laborota 4000 efficient, Heidolph, Germany）減壓蒸發(fā)掉溶于液相的丙酮，再經(jīng)氮?dú)獯祾邇x（ 40℃ ， OASYS heating evaporator 24 needles,NEVAPTM112. USA）濃縮凍干。為未來(lái)利用該縮合單寧抑制致病性微生物的研究及對(duì)不同抑菌性縮合單寧的篩選提供數(shù)據(jù) 。但相對(duì)于水解單寧易被吸收而對(duì)動(dòng)物機(jī)體造成的毒害作用，縮合單寧由于其不被動(dòng)物機(jī)體吸收，因此具有良好的應(yīng)用潛力，特別是對(duì)反芻動(dòng)物后腸消化道致病性微生物的抑制更顯重要。因此，如何有效利用利用自然藥物，如一些植物提取物，抑制大腸桿菌并
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