【正文】 (分析純 ,北京北化精細(xì)化學(xué)品有限責(zé)任公司 )。 磷酸氫二鉀 (分析純 ,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限責(zé)任公司 )。 殼聚糖 (脫乙酰度 90%,上海伯奧生物科技有限責(zé)任公司 )。 試劑： 葡萄糖氧化酶 (GOD, Sigma)。 以鉑絲 (D=50um)作為工作電極 ,市售 Ag/AgCl電極作為參比電極 ,鉑絲(D=50um)作為對(duì)電極。 電化學(xué)工作站 (CHI760型 ,上海辰華儀器公司 )。 鉻版玻璃 (長(zhǎng)沙韶光鉻版有限責(zé)任公司 )。 SX2410箱式電阻爐 (沈陽市電爐廠 )。〔了解〕 第四十九頁，共九十一頁。血糖濃度如果過低 ,那么中樞神經(jīng)系統(tǒng)會(huì)發(fā)生嚴(yán)重的功能障礙 ,出現(xiàn)昏迷 ,即低血糖昏迷。正常人的血糖濃度在神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)下保持相對(duì)恒定的水平。 〔了解〕 第四十八頁，共九十一頁。然后與標(biāo)本懸浮液阻抗與濃度之間的定量曲線關(guān)系進(jìn)行比照，定量分析。 電化學(xué)測(cè)試儀由引線 1 和 2 連接微流控芯片，對(duì)樣本進(jìn)行電化學(xué)阻抗檢測(cè) 。 以某污水為分析樣本，進(jìn)行采樣、計(jì)數(shù)、預(yù)處理及檢測(cè)?！擦私狻? 第四十六頁，共九十一頁。 芯片上大腸桿菌電化學(xué)阻抗檢測(cè)定量分析：在優(yōu)化條件下，對(duì)系列濃度 ( 105～ 108 CFU / mL)大腸桿菌標(biāo)本進(jìn)行電化學(xué)阻抗檢測(cè)，以大腸桿菌濃度 ( C) 為橫坐標(biāo)，以某頻率下阻抗 ( |Z| ) 為縱坐標(biāo)，建立細(xì)菌標(biāo)本 | Z | 與 C 的關(guān)系曲線。 〔了解〕 第四十四頁，共九十一頁。研究顯示只要不出現(xiàn)高次諧波，高阻抗系統(tǒng)的擾動(dòng)幅值可以稍大。 擾動(dòng)振幅優(yōu)化：將大腸桿菌標(biāo)本靜置 90 min，測(cè)定不同擾動(dòng)振幅 ( 50 ～ 900 mV) 下大腸桿菌標(biāo)本的阻抗譜 。 芯片上大腸桿菌電化學(xué)阻抗檢測(cè)條件優(yōu)化：在緩沖溶液電導(dǎo)率為 uS /cm，掃描頻率 ～ 1. 0 10 6Hz，新制大腸桿菌標(biāo)本靜置 90 min 的條件下，測(cè)定不同擾動(dòng)振幅 ( 50 ～ 900 mV) 下大腸桿菌標(biāo)本 ( 107CFU / mL) 的阻抗譜，確定擾動(dòng)振幅。 〔圖〕 第四十一頁，共九十一頁。蓋片采用 SU8 陽膜制作的帶有微管道網(wǎng)絡(luò)的聚二甲基硅氧烷 ( PDMS) 薄膜，微管道深度為 30 um，寬度為 300 um，長(zhǎng)度為 15000 um，微管道體積 104 mL。 試驗(yàn)方法：芯片上陣列式電極是通過 MEMS 技術(shù)在玻璃基片上沉積的電極，對(duì)電極間距 k 分別為 130， 110， 90， 70 和 50 um，電極寬 d1為 100 um，相鄰電極間距 d2為 20 um， L 為 1780 um， D 為 1100 um。 細(xì)菌樣本 : 以大腸桿菌為主要菌群的某污水池為采樣點(diǎn)，按國家標(biāo)準(zhǔn)方法采集水樣。 緩沖溶液配制 : mol/L 甘露醇溶液為基質(zhì)，以磷酸鹽緩沖液 ( PBS) 調(diào)節(jié)至所需電導(dǎo)率，經(jīng) 微孔濾膜過濾得緩沖溶液。 甘露醇 ( AR，溫州東升化工 ) 。 儀器與試劑： VersaSTAT3 電化學(xué)工作站 ( 美國普林斯頓 ) 、 Sension5 電導(dǎo)率儀 ( 美國哈希公司 ) 、 OLYMPUS IX71顯微鏡 ( 日本奧林巴斯公司 ) 、SWCJO 超凈臺(tái) ( 蘇州凈化公司 ) 。將所建立的方法應(yīng)用于某污水中細(xì)菌檢測(cè)，結(jié)果與國標(biāo)法根本一致。 優(yōu)化條件：擾動(dòng)振幅 500 mV、緩沖溶液電導(dǎo)率為 uS/cm、掃描頻率范圍為 100 Hz1 MHz 的條件下，大腸桿菌的測(cè)試范圍為 105～ 10 8CFU / mL，檢出限為 104 CFU / mL。 、微流控芯片上大腸桿菌的電化學(xué)阻抗檢測(cè)方法研究 基于細(xì)菌懸浮液的阻抗特性和微流控芯片電化學(xué)阻抗檢測(cè)技術(shù)，采用所構(gòu)建的微流控芯片電化學(xué)阻抗分析系統(tǒng)，以大腸桿菌為樣本，優(yōu)化了擾動(dòng)振幅、緩沖溶液電導(dǎo)率、掃描頻率和新制大腸桿菌標(biāo)本靜置時(shí)間等參數(shù)，對(duì)大腸桿菌標(biāo)本、大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)合成樣本進(jìn)行電化學(xué)阻抗檢測(cè)，建立了一種大腸桿菌快速定量檢測(cè)方法。 數(shù)據(jù)釆集處理：釆用自編的 Labview程序讀取各個(gè)循環(huán)焚光照片上液滴的焚光強(qiáng)度值 ,得到熒光強(qiáng)度隨反響循環(huán)數(shù)增加而改變的曲線。 C70s。之后進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，芯片上 PCR反響的熱循環(huán)設(shè)置為 95 176。采用熱裂解方式(95176。細(xì)胞染色后 ,使用 PBS(磷酸鹽緩沖液 )溶液清洗三次 ,并重懸于 PBS溶液 (含有BSA〔牛血清蛋白〕 mg/mL)中。向培養(yǎng)液中參加 uLCalceinAM細(xì)胞染色劑 ,在 37176。在細(xì)胞進(jìn)入指數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代。 實(shí)時(shí)定量 RTPCR焚光檢測(cè)系統(tǒng)的 Labview控制程序界面 第三十五頁，共九十一頁。 實(shí)時(shí)定量 RTPCR檢測(cè)系統(tǒng)示意圖 第三十三頁，共九十一頁。與之前基于體式熒光顯微鏡的檢測(cè)系統(tǒng)相比 ,該系統(tǒng)具有體積小、耗能少、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。并在 LED前端安裝窄帶濾光片 (470 nm,沈陽匯博光學(xué)技術(shù)有限責(zé)任公司 ),以降低背景干擾。 自動(dòng)化液滴生成及操控系統(tǒng)實(shí)物照片，浙江大學(xué)，分析化學(xué)實(shí)驗(yàn)室 第三十一頁，共九十一頁?！矆D〕 第二十九頁，共九十一頁。采用高密度親水點(diǎn)陣列芯片作為液滴承載與儲(chǔ)存平臺(tái)。 毛細(xì)管探針加工：為了提高液滴量取精確度 ,減少樣品攜出和交叉污染 ,實(shí)驗(yàn)中所用毛細(xì)管均采用手工拉制方法加工成圓錐形毛細(xì)管取樣探針。芯片設(shè)計(jì)成 16x16點(diǎn)陣 ,點(diǎn)直徑為 ,間距為。 實(shí)驗(yàn)芯片：采用AutoCAD 2024軟件繪制芯片掩膜圖。 CalceinAM (活細(xì)胞熒光染色別 ) Invitrogen, Life Technologies,USA。 PBS〔磷酸鹽緩沖液〕 (PH ): Gibco, Life Technologies, USA。 DMEM 〔細(xì)胞培養(yǎng)基〕高糖培養(yǎng)液 : Gibco, Life Technologies, USA。 〔了解〕 第二十六頁，共九十一頁。由于這種細(xì)胞異質(zhì)性的存在 ,轉(zhuǎn)錄組研究需要在單細(xì)胞水平進(jìn)行。 、基于納升級(jí)液滴陣列的自動(dòng)化單細(xì)胞實(shí)時(shí)定量 RT PCR系統(tǒng)的研究 綜述：研究基因型與表現(xiàn)型之間的關(guān)系是生物學(xué)及醫(yī)學(xué)開展的重要環(huán)節(jié) ,以定量測(cè)定細(xì)胞內(nèi)各類 RNA表達(dá)為目標(biāo)的轉(zhuǎn)錄組研究對(duì)于基因表達(dá)和分子診斷研究尤為重要。此外 ,該系統(tǒng)可在試劑消耗、檢測(cè)通量及系統(tǒng)集成化微型化等方面進(jìn)一步優(yōu)化改進(jìn) ,有望在大規(guī)模高通量分析領(lǐng)域發(fā)揮重要的作用。利用平面液滴的優(yōu)勢(shì) ,在經(jīng)外表修飾的親水點(diǎn)陣列芯片上 ,實(shí)現(xiàn)了液滴的定位和多步加樣操作。 〔知道〕 第二十四頁，共九十一頁。芯片硅烷化、光刻及濕法刻燭過程中 ,使用試刻的揮發(fā)性和腐蝕性較強(qiáng) ,盡量在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。芯片最長(zhǎng)使用時(shí)間可達(dá)一年。清潔后的芯片置于干凈的培養(yǎng)皿中 ,室溫存放。 C80176。清洗外表后 ,將芯片置于 2%RNase去除劑中浸泡5min,以減少 RNA降解 ,防止 PCR污染。 Labview數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)軟件界面 第二十三頁，共九十一頁。以參加 miRNA122的拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)值作為橫坐標(biāo) ,CT值為縱坐標(biāo)擬合出標(biāo)準(zhǔn)曲線。 數(shù)據(jù)采集處理：采用自編的 Labview程序讀取各個(gè)循環(huán)熒光照片上液滴的熒光強(qiáng)度值 ,得到熒光強(qiáng)度隨反響循環(huán)數(shù)增加的變化曲線。 〔圖〕 第二十頁，共九十一頁。以汞燈作為熒光激發(fā)光源 ,利用 Nikon體視熒光顯微鏡 (SMZ1500, Nikon, Japan )的光路系統(tǒng)采集熒光。 實(shí)時(shí)定量 RTPCR系統(tǒng)構(gòu)建：將芯片置于商品化基因擴(kuò)增儀 (MGL96G/Y,杭州朗基科學(xué)儀器有