【正文】 中更是離不細(xì)胞培養(yǎng)，雜交瘤單克隆抗體，完全是通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)實(shí)現(xiàn)的，既使是現(xiàn)在飛速發(fā)展的基因工程抗體也離不開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)?，F(xiàn)代生物技術(shù)一般認(rèn)為包括基因工程技術(shù)、細(xì)胞工程技術(shù)、酶工程技術(shù)和發(fā)酵工程技術(shù)，而這些技術(shù)的發(fā)展幾乎都與細(xì)胞培養(yǎng)有密切關(guān)系，特別是在醫(yī)藥領(lǐng)域的發(fā)展，細(xì)胞培養(yǎng)更具有特殊的作用和價(jià)值。（三）、牛血清的質(zhì)量要求和制備技術(shù)工藝牛血清質(zhì)量在細(xì)胞培養(yǎng)中的重要性生物技術(shù)已經(jīng)被世界各國(guó)視為一種高技術(shù)，在整個(gè)科學(xué)技術(shù)中占據(jù)了特殊的顯著地位，特別是生命科學(xué)的發(fā)展更離不生物技術(shù)，生命科學(xué)的發(fā)展備受各國(guó)的重視。 (5)若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。若在37℃放置太久，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。 (2)解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。推薦在－20℃儲(chǔ)存胎牛血清，避免反復(fù)凍融。不但節(jié)省時(shí)間，更確保血清的質(zhì)量! 為什么儲(chǔ)存在冰箱中的胎牛血清會(huì)出現(xiàn)沉淀? 有些胎牛血清產(chǎn)品沒(méi)有預(yù)老化，儲(chǔ)存在2－8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀(guān)察，像是“小黑點(diǎn)”，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì)使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。 有必要做熱滅活嗎? 實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。最好不使用過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞過(guò)濾膜。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量。但必須注意的是，融解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。若一次無(wú)法用完一瓶，建議無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。 保存血清最好的方法? 我們建議血清應(yīng)保存在5℃至2O℃。 培養(yǎng)基及其它添加物和試劑可反復(fù)凍融嗎？ 大部分添加物和試劑最多可以?xún)鋈?次，如果次數(shù)更多都會(huì)在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，將會(huì)影響它的性能。 培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長(zhǎng)期保存嗎？ 一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí)，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。血清蛋白會(huì)結(jié)合和滅活一些抗生素。如果沒(méi)有沉淀產(chǎn)生，培養(yǎng)基可以正常使用，如果出現(xiàn)沉淀，只能丟棄這些培養(yǎng)基。您可以在使用前松開(kāi)瓶口，在CO2培養(yǎng)箱孵育培養(yǎng)基1015分鐘，來(lái)校正溶液的pH值（確定松開(kāi)瓶口以保證氣體交換）。如果活力和加倍時(shí)間下降，它們的感染力將不在是有效的。無(wú)論什么時(shí)候計(jì)數(shù)時(shí)，都應(yīng)該檢查細(xì)胞活力。 , Sf21, 和high Five細(xì)胞懸浮培養(yǎng)時(shí)，肝素的使用量是多少？ 為了防止懸浮培養(yǎng)細(xì)胞聚集的形成，使用肝素濃度為10單位/毫升細(xì)胞懸液。 7. 用新的培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。） 6. 離心（1100rpm）沉淀細(xì)胞。 5. 向細(xì)胞中加入2ml 細(xì)胞培養(yǎng)液，移入錐形管，用2ml培養(yǎng)液洗瓶壁，移入同一錐形管中。 4. 37 ℃孵育5到10分鐘。 2. 用2ml 1xPBS（足以覆蓋細(xì)胞表面）洗滌細(xì)胞，去除PBS。只有在絕對(duì)必要的情況下，才使用胰酶消化細(xì)胞。通過(guò)使用巴斯德吸液管，讓細(xì)胞上培養(yǎng)基流動(dòng)。C 37176。 50mM TrisHC 溶液在4℃，25℃，37℃時(shí)，不同PH值 4176。 室溫下配制的TrisHCl溶液，在37℃使用時(shí)PH值是多少？ 緩沖液PH值隨溫度變化而變化。EDTA用來(lái)螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。 培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么？ 丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源，盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒(méi)有葡萄糖的話(huà)，細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。輕輕混勻，數(shù)分鐘后，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞。由于酚紅干擾檢測(cè)，一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測(cè)時(shí)，不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。研究表明，酚紅可以模擬固醇類(lèi)激素的作用，（特別是雌激素）。 GlutaMAXI二肽非常穩(wěn)定，即使在121磅滅菌20分鐘，GlutaMAXI 二肽溶液有最小的降解，如果在相同條件下，L谷氨酰胺幾乎完全降解。 GlutaMAXI是什么？培養(yǎng)細(xì)胞如何利用GlutaMAXI？這個(gè)二肽有多穩(wěn)定？ GlutaMAXI 二肽是一個(gè)L谷氨酰胺的衍生物，其不穩(wěn)定的alpha氨基用L丙氨酸來(lái)保護(hù)。L谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后會(huì)降解，但是確切的降解率一直沒(méi)有最終定論。細(xì)胞培養(yǎng)基的幾個(gè)問(wèn)題 L谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎？ L谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)是重要的。（4）.其他成份：氨基酸、葡萄糖、酮酸等對(duì)多種營(yíng)養(yǎng)成分的合成培養(yǎng)基意義不大。促生長(zhǎng)激素：促細(xì)胞增殖效應(yīng)。胰島素：促進(jìn)細(xì)胞攝取葡萄糖和氨基酸，與促細(xì)胞分裂有關(guān)。（2）.多肽：血小板促生長(zhǎng)因子能促細(xì)胞分裂，是多肽家庭的主要成員之一，是主要的促細(xì)胞增殖因子；成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)因子等，血清中含量雖很少，但對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)也有一定作用。除包括可攜帶金屬離子、脂肪酸和自身是激素類(lèi)蛋白外主要還有白蛋白，球蛋白。牛血清的主要成份血清是一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已為人所知，但還有一部分尚不清楚，而且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。（5）. 起酸堿度緩沖液作用。（3）.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。（1）. 提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物，以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。 牛血清（BSA）在內(nèi)切酶的緩沖液的作用（1）BSA是酶的穩(wěn)定劑，防止酶的分解和非特異性吸附； （2）BSA能減輕有些酶的變性，能減輕有些不利環(huán)境因素如加熱，表面張力及化學(xué)因素引起的變性的至于作用機(jī)理我不是很清楚，可能是因?yàn)樗Y(jié)構(gòu)中有17個(gè)二硫鍵，和一個(gè)巰基，巰基的化學(xué)反應(yīng)很活潑，二硫鍵有抗氧化還原的作用，因此可與多種陽(yáng)離子，陰離子和小分子結(jié)合； （3）BSA能防止酶吸附到管壁而損失。在37℃，酶切反應(yīng)超過(guò)1h時(shí)，BSA可以使酶更加穩(wěn)定，因?yàn)樵诓缓珺SA的反應(yīng)緩沖液中，許多限制性?xún)?nèi)切酶在37℃下只能存活1020min甚至更短的時(shí)間。不需要加BSA的酶加入BSA一般不會(huì)受到什么影響。 牛血清（BSA）的作用　　牛血清（BSA）一般做為穩(wěn)定劑被用于限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應(yīng)液中，因?yàn)橛行┟冈诘蜐舛认虏环€(wěn)定或活性低。牛血清白蛋白（BSA），又稱(chēng)第五組分，是牛血清中的一種球蛋白，包含583個(gè)氨基酸殘基， kDa。血液中的白蛋白主要起維持滲透壓作用、PH緩沖作用、載體作用和營(yíng)養(yǎng)作用。白蛋白由581個(gè)氨基酸殘基組成，其中35個(gè)半胱氨酸組成17個(gè)二硫鍵，在肽鏈的第34位有一自由巰基。含氮量16%，%。以高起點(diǎn)、高技術(shù)含量、高附加值、高質(zhì)量為原則，以科技創(chuàng)新為動(dòng)力，以適中的價(jià)格、穩(wěn)定的質(zhì)量，優(yōu)質(zhì)的服務(wù)為手段，努力擴(kuò)大國(guó)內(nèi)市場(chǎng)份額，積極開(kāi)拓海外市場(chǎng)，不斷發(fā)展壯大。建設(shè)周期：項(xiàng)目建設(shè)期18個(gè)月。建筑面積(平方米)： 2034m2 用地面積(平方米)： 4800m2 容積率： 綠化率(%)： 58%（2）、工程估算：1116萬(wàn)元。分為初級(jí)加工間800 m生產(chǎn)潔凈區(qū)300 m實(shí)驗(yàn)室100 m2 、包裝間160 m2和冷藏庫(kù)存間674 m2。）、輔助生產(chǎn)車(chē)間、公用工程及配套服務(wù)設(shè)施。項(xiàng)目建設(shè)的總體規(guī)模與布局： 項(xiàng)目名稱(chēng)：精制牛血清