【文章內(nèi)容簡介】 計數(shù)板計數(shù)細胞?；罴毎懦馀_盼蘭，因而染成藍色細胞是死細胞。 培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么？ 丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源，盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒有葡萄糖的話，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。 二價離子抑制胰蛋白酶活性嗎？使用胰蛋白酶時加入EDTA的目的是什么？ 二價離子的確抑制胰蛋白酶活性。EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細胞前，用EDTA清洗細胞，以消除來自培養(yǎng)基中所有的二價離子。 室溫下配制的TrisHCl溶液，在37℃使用時PH值是多少？ 緩沖液PH值隨溫度變化而變化。下表列出了50mM TrisHC 溶液在4℃，25℃，37℃時，不同PH值。 50mM TrisHC 溶液在4℃，25℃，37℃時，不同PH值 4176。C 25176。C 37176。C 如何從T25瓶中轉(zhuǎn)移sf9細胞？能用胰蛋白酶消化嗎？ 我們推薦使用脫落細胞的方法，此技術(shù)破壞性最小，生活力最高。通過使用巴斯德吸液管，讓細胞上培養(yǎng)基流動。作為一種選擇你也可以輕輕拍打培養(yǎng)瓶。只有在絕對必要的情況下，才使用胰酶消化細胞。 胰酶消化一個T25瓶的sf9細胞： 1. 去除培養(yǎng)基。 2. 用2ml 1xPBS（足以覆蓋細胞表面）洗滌細胞，去除PBS。 3. 加入2ml 1x胰酶EDTA（恰好覆蓋細胞表面）。 4. 37 ℃孵育5到10分鐘。在儀器下檢測看到5分鐘后它們正在向上移動。 5. 向細胞中加入2ml 細胞培養(yǎng)液，移入錐形管，用2ml培養(yǎng)液洗瓶壁，移入同一錐形管中。（培養(yǎng)基中的FBS終止了胰酶的活性。） 6. 離心（1100rpm）沉淀細胞。去除培養(yǎng)基。 7. 用新的培養(yǎng)基重新懸浮細胞。傳代。 , Sf21, 和high Five細胞懸浮培養(yǎng)時，肝素的使用量是多少？ 為了防止懸浮培養(yǎng)細胞聚集的形成，使用肝素濃度為10單位/毫升細胞懸液。 在重新凍存sf9細胞前，它可以傳多少代？隨著傳代的次數(shù)的增加，它的感染能力會降低嗎？ 通常情況當細胞經(jīng)過30次傳代后，應該返回凍存。無論什么時候計數(shù)時，都應該檢查細胞活力。如果超過95％的細胞保持有活力和在大約30小時左右加倍，細胞仍然可以使用。如果活力和加倍時間下降，它們的感染力將不在是有效的。 貯存在冰箱中的瓶口已開的培養(yǎng)基，在放置幾天后顏色變紫? 這主要是由于在暴露到周圍的CO2水平時，碳酸氫納導致了pH值的上升。您可以在使用前松開瓶口，在CO2培養(yǎng)箱孵育培養(yǎng)基1015分鐘，來校正溶液的pH值（確定松開瓶口以保證氣體交換）。 細胞培養(yǎng)基偶然被凍，可否繼續(xù)使用？ 如果細胞培養(yǎng)基偶然被凍，您應該熔化培養(yǎng)基并觀察是否有沉淀產(chǎn)生。如果沒有沉淀產(chǎn)生，培養(yǎng)基可以正常使用，如果出現(xiàn)沉淀，只能丟棄這些培養(yǎng)基。 無血清培養(yǎng)與有血清培養(yǎng)使用的抗生素量一樣嗎？ 當在無血清培養(yǎng)基中添加抗生素時，降低至少在有血清培養(yǎng)基中所使用濃度的50%。血清蛋白會結(jié)合和滅活一些抗生素。在無血清培養(yǎng)條件下，抗生素不被滅活，可能對于細胞達到毒性水平。 培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎？ 一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時，您應該在兩到三周內(nèi)使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。 培養(yǎng)基及其它添加物和試劑可反復凍融嗎？ 大部分添加物和試劑最多可以凍融3次，如果次數(shù)更多都會在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，將會影響它的性能。 為什么要在溶解的一周內(nèi)使用貯存在4℃冰箱中的液體胰蛋白酶溶液? 胰蛋白酶在4℃就可能開始降解，如果在室溫下放置超過30分鐘，就會變得不穩(wěn)定。 保存血清最好的方法? 我們建議血清應保存在5℃至2O℃。若存放于4℃時，請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。 如何解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損? 將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理? 血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后，也會存在于血清中，亦是造成沉淀物的原因之一。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量。 若欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。最好不使用過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會阻塞過濾膜。 為什么要熱滅活血清? 加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究，培養(yǎng)ES細胞、平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。 有必要做熱滅活嗎? 實驗顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或完全沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。 若非必須，可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時間，更確保血清的質(zhì)量! 為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現(xiàn)沉淀? 有些胎牛血清產(chǎn)品沒有預老化，儲存在2－8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應該不會影響血清的質(zhì)量。推薦在－20℃儲存胎牛血清，避免反復凍融。 如何避免沉淀物的產(chǎn)生? 我們建議您在使用血清的時候，注意下列的操作: (1)解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法(20℃至4℃至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如20℃至37℃)，非常容易產(chǎn)生沉淀物。 (2)解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。 (3)請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。 (4)血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。 (5)若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。（三）、牛血清的質(zhì)量要求和制備技術(shù)工藝牛血清質(zhì)量在細胞培養(yǎng)中的重要性生物技術(shù)已經(jīng)被世界各國視為一種高技術(shù)，在整個科學技術(shù)中占據(jù)了特殊的顯著地位，特別是生命科學的發(fā)展更離不生物技術(shù)，生命科學的發(fā)展備受各國的重視。我國在很多大學中都設(shè)立了生命科學院。現(xiàn)代生物技術(shù)一般認為包括基因工程技術(shù)、細胞工程技術(shù)、酶工程技術(shù)和發(fā)酵工程技術(shù)，而這些技術(shù)的發(fā)展幾乎都與細胞培養(yǎng)有密切關(guān)系，特別是在醫(yī)藥領(lǐng)域的發(fā)展，細胞培養(yǎng)更具有特殊的作用和價值。比如基因工程藥物或疫苗在研究生產(chǎn)過程中很多是通過細胞培養(yǎng)來實現(xiàn)的?；蚬こ桃腋我呙绾芏嗍且訡HO細胞作為載體；細胞工程中更是離不細胞培養(yǎng)，雜交瘤單克隆抗體，完全是通過細胞培養(yǎng)來實現(xiàn)的，既使是現(xiàn)在飛速發(fā)展的基因工程抗體也離不開細胞培養(yǎng)。正在倍受重視的基因治療、體細胞治療也要經(jīng)過細胞培養(yǎng)過程才能實現(xiàn)，發(fā)酵工程和酶工程有的也與細胞培養(yǎng)密切相關(guān)?？傊?，細胞培養(yǎng)在整個生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展中起到了很關(guān)鍵的核心作用。細胞培養(yǎng)的發(fā)展，培養(yǎng)基的質(zhì)量又是關(guān)鍵，而培養(yǎng)基的主要成份中動物血清對細胞的生長繁殖發(fā)揮著重要甚至是難以替代的作用。在動物血清的