生命科學(xué)進(jìn)展ppt課件-文庫(kù)吧資料
2025-05-18 12:34本頁(yè)面
【正文】 lisa 噬菌體展示技術(shù)一般要經(jīng)過(guò)多輪的篩選，這樣就可以得到在文庫(kù)中含量很低的與配基特異作用的蛋白質(zhì)。 噬菌體展示技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史 利用固相支持物上的抗體或受體，采用親和篩選法從噬菌體文庫(kù)中篩選出能結(jié)合篩選分子的目的噬菌體。 ? 1990年 McCafferty — 用噬菌體展示技術(shù)篩選溶菌酶的單鏈抗體成功使噬菌體展示技術(shù)進(jìn)入一個(gè)廣泛應(yīng)用的時(shí)代。 ? 1985年 Smith — 證實(shí)噬菌體 fd基因組能通過(guò)基因工程的手段進(jìn)行改造。 酵母雙雜交系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn) ? 限于檢測(cè)定位于細(xì)胞核內(nèi)的蛋白質(zhì)間相互作用； ? 假陽(yáng)性：本身具有激活轉(zhuǎn)錄功能的蛋白； cDNA反向插入； ? 融合蛋白可能會(huì)影響蛋白的真實(shí)結(jié)構(gòu)和功能。 ? 不需分離和標(biāo)記靶蛋白，采用高拷貝和強(qiáng)啟動(dòng)子的表達(dá)載體使雜合蛋白過(guò)量表達(dá)，避免蛋白質(zhì)純化過(guò)程； ? 檢測(cè)在活細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行，真實(shí)反應(yīng)體內(nèi)蛋白質(zhì)間相互作用情況； ? 敏感度高，可檢測(cè)存在于蛋白質(zhì)之間的微弱的或暫時(shí)的相互作用； ? 可進(jìn)行高通量篩選； ? 成本低，無(wú)需特殊的檢測(cè)設(shè)備。 ? 組成部分：（ 1）與 BD融合的蛋白表達(dá)載體，被表達(dá)的蛋白稱誘餌蛋白（ bait）；（ 2）與 AD融合的蛋白表達(dá)載體，被其表達(dá)的蛋白稱靶蛋白（ prey）；（ 3）帶由一個(gè)或多個(gè)報(bào)告基因的宿主菌株。 ? 酵母激活因子 GAL4： N端： 147個(gè)氨基酸組成的 DNA結(jié)合域 (DNA binding domain, BD)， C端： 113個(gè)氨基酸組成的轉(zhuǎn)錄激活域(transcription activation domain, AD)。 ? Rain 等 (2022)用該法繪制了人類胃腸道病原菌 Helicobacter pylori 的大規(guī)模蛋白質(zhì)相互作用圖譜。 一，酵母雙雜交系統(tǒng) Yeast TwoHybrid System ? 1989年 Field 和 Song等人在酵母細(xì)胞中設(shè)計(jì)的分析蛋白質(zhì)相互作用的方法，以真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄激活因子的結(jié)構(gòu)和活性特點(diǎn)為基礎(chǔ)的。 ? 每一種蛋白質(zhì)不是孤立存在于細(xì)胞中，而是與其它蛋白質(zhì)或核酸或其他小分子一起進(jìn)行相互作用來(lái)行使其功能，從而使得細(xì)胞中所有蛋白質(zhì)形成一個(gè)相互作用的網(wǎng)絡(luò)，同時(shí)功能相同和相似的蛋白質(zhì)在一起組成相關(guān)的功能模塊，以完成相關(guān)的生理功能。 ? 蛋白質(zhì)相互作用和識(shí)別在諸如 DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)的合成與分泌 ，生物催化、物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、新陳代謝、信號(hào)傳導(dǎo)、免疫、細(xì)胞調(diào)控等多種重要的生命過(guò)程起著重要的作用。 多亞基蛋白復(fù)合體 酶 底物 抗原 抗體 研究蛋白質(zhì)相互作用的重要意義 ? 絕大多數(shù)疾病都是由特定蛋白質(zhì)相互作用所致。生命科學(xué)進(jìn)展 羅曉霞 中心法則 生命現(xiàn)象的研究逐漸由獲取基因序列信息轉(zhuǎn)向研究基因功能，基因功能的具體體現(xiàn)者就是蛋白質(zhì)。 前言： 蛋白質(zhì)相互作用 ? 蛋白質(zhì)可以通過(guò)某種方式與蛋白質(zhì)，核酸或其他分子之間發(fā)生相互作用而形成一定形態(tài)的蛋白復(fù)合物。對(duì) 200種蛋白質(zhì)及 2022種組合結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析后，發(fā)現(xiàn)其
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