《生命科學(xué)進(jìn)展》ppt課件-全文預(yù)覽
【正文】 變性條件下也能發(fā)生相互作用的蛋白的鑒定和驗(yàn)證； 2. 可鑒定靶蛋白與受體的結(jié)合位點(diǎn)。不能檢測和分析低表達(dá)量的蛋白之間的相互作用； 2. 假陽性。之后 純化靶蛋白免疫復(fù)合物 ， 凝膠電泳分離后 ， 質(zhì)譜鑒定靶蛋白的結(jié)合蛋白。蛋白質(zhì)所帶電荷引起的，并不是生理性的相互作用； 有時(shí)會檢測到兩種在細(xì)胞中不可能相遇卻有極強(qiáng)親和力的蛋白。 1. 谷胱苷肽 S轉(zhuǎn)移酶沉淀試驗(yàn) (GSTpull down) 1988年 smith等利用谷胱甘肽 S轉(zhuǎn)移酶融合標(biāo)簽從細(xì)菌中一步純化出 GST融合蛋白，從此 GST融合蛋白在蛋白質(zhì)相互作用研究領(lǐng)域里得到了極大的推廣。 噬菌體表面展示應(yīng)用范圍 ? 應(yīng)用范圍非常廣； ? 可用于高通量篩選； ? 可研究含量很低的與配體特異作用的蛋白質(zhì)； ? 可直接得到相互作用蛋白的編碼序列。 噬菌體展示技術(shù)的發(fā)展簡史 利用固相支持物上的抗體或受體，采用親和篩選法從噬菌體文庫中篩選出能結(jié)合篩選分子的目的噬菌體。 ? 1985年 Smith — 證實(shí)噬菌體 fd基因組能通過基因工程的手段進(jìn)行改造。 ? 不需分離和標(biāo)記靶蛋白，采用高拷貝和強(qiáng)啟動子的表達(dá)載體使雜合蛋白過量表達(dá)，避免蛋白質(zhì)純化過程； ? 檢測在活細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行，真實(shí)反應(yīng)體內(nèi)蛋白質(zhì)間相互作用情況； ? 敏感度高，可檢測存在于蛋白質(zhì)之間的微弱的或暫時(shí)的相互作用； ? 可進(jìn)行高通量篩選； ? 成本低，無需特殊的檢測設(shè)備。 ? 酵母激活因子 GAL4： N端： 147個氨基酸組成的 DNA結(jié)合域 (DNA binding domain, BD)， C端： 113個氨基酸組成的轉(zhuǎn)錄激活域(transcription activation domain, AD)。 一，酵母雙雜交系統(tǒng) Yeast TwoHybrid System ? 1989年 Field 和 Song等人在酵母細(xì)胞中設(shè)計(jì)的分析蛋白質(zhì)相互作用的方法，以真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄激活因子的結(jié)構(gòu)和活性特點(diǎn)為基礎(chǔ)的。 ? 蛋白質(zhì)相互作用和識別在諸如 DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)的合成與分泌 ，生物催化、物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、新陳代謝、信號傳導(dǎo)、免疫、細(xì)胞調(diào)控等多種重要的生命過程起著重要的作用。生命科學(xué)進(jìn)展 羅曉霞 中心法則 生命現(xiàn)象的研究逐漸由獲取基因序列信息轉(zhuǎn)向研究基因功能，基因功能的具體體現(xiàn)者就是蛋白質(zhì)。對 200種蛋白質(zhì)及 2022種組合結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析后，發(fā)現(xiàn)其中三分之一的蛋白質(zhì)相互組合會導(dǎo)致疾病；容易導(dǎo)致疾病的蛋白質(zhì)和其它蛋白質(zhì)結(jié)合以后也將變得十分活躍，致使發(fā)病和病情惡化。 蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò) 蛋白質(zhì)相互作用的檢測和分析方法 一，酵母雙雜交系統(tǒng)， Yeast TwoHybrid System； 二，噬菌體表面展示技術(shù) ， Phage Display； 1. 谷胱苷肽 S轉(zhuǎn)移酶沉淀， GSTpull down； 三，基于親和層析的蛋白質(zhì)相互作用研究平臺 2. 免疫共沉淀， Coimmunoprecipitation； 3. 親和印跡， Ligand blot。
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