【正文】 C Antimicrobial peptides (AMPs) 抗菌肽 農 業(yè) 部 飼 料 工 業(yè) 中 心 M A F I C AMPs 抗菌肽 ?Abundant and diverse groups of molecules that are encoded by definite genes 特定編碼基因產(chǎn)生的一類小分子多肽 ?Important ponents of the innate immune system 先天免疫系統(tǒng)的重要組成成分 農 業(yè) 部 飼 料 工 業(yè) 中 心 M A F I C 1: control with no insert。 ? Primer 1 and Primer 2 used to amplify the partial sequence of ?mannanase 設計引物 Primer 1和 Primer 2擴增 ?甘露聚糖酶部分序列 ? Obtain the Nterminal and Cterminal of ?mannanase gene sequence using RACE technique 使用 RACE技術獲得 ?甘露聚糖酶的 N端和 C端序列 農 業(yè) 部 飼 料 工 業(yè) 中 心 M A F I C 1375 bp 947 bp 1152 bp J Biotechnol., X. L. Chen, Defa Li, 2022 The first time clone the fulllength gene sequence of A. sulphureus MAFIC001 ?mannanase (GenBank accession no. DQ328335) 首次克隆了硫色曲霉 MAFIC001β 甘露聚糖酶全基因序列 農 業(yè) 部 飼 料 工 業(yè) 中 心 M A F I C ? Modifying the mature ?mannanase gene sequence by codon bias 密碼子優(yōu)化改造 ?甘露聚糖酶成熟編碼基因序列 ?Constructing P. pastoris expression vector pPICZαA, high density fermentation of rebinant ?mannanase in 10 L fermenter 構建畢赤酵母表達載體 pPICZα A，實現(xiàn)重組 ?甘露聚糖 酶在 10 L發(fā)酵罐中高密度發(fā)酵 Pichia pastoris expression vector 畢赤酵母表達載體 A Fermentation device （ 10 L） 發(fā)酵裝置 （ 10升） 農 業(yè) 部 飼 料 工 業(yè) 中 心 M A F I C SDSPAGE of expressed ?mannanase in fermentor with different induction times 發(fā)酵罐中 ?甘露聚糖酶在不同時間的表達量 ? Highest enzymatic activity (最高酶活力 )： 1100 U/mL ? Purity (純度 )： 96％ ? Highest protein expression level (最高蛋白濃度 )： 3 g/L Accumulation of ?mannanase activity with different induction times for fermentation 發(fā)酵中 ?甘露聚糖酶活性隨誘導 時間的積累 1100 U/mL 0200400600800100012000 12 24 36 48 60 72 84 96h / 小時Enzymatic activity (U/mL) 酶活力 (U/mL)JAM, X. L. Chen, Defa Li, 2022 35 kDa 45 kDa 116 kDa M 1 2 3 4 5 6 7 0 h, 12 h, 24 h, 48 h, 72 h, 96 h, 120 h 48 kDa 農 業(yè) 部 飼 料 工 業(yè) 中 心 M A F I C 0123Chen et al.(2022)Xu et al.(2022a)Protein expression level(g/L)蛋白表達量 (g/L)020040060080010001200Chen et al.(2022)Xu et al.(2022a)Enzymatic activity (U/mL)/酶活力 (U/mL) fold fold ??mannanase characterization: an extremely broad pH () range, optimum pH is 酶學特性： pH（ ）范圍寬，最適 pH JAM, X. L. Chen, Defa Li, 2022 ?mannanase protein expression level ?甘露聚糖酶蛋白 表達水平 ?mannanase activity ?甘露聚糖 酶活力 農 業(yè) 部 飼 料 工 業(yè) 中 心 M A F I C Further research 進一步的研究 ? Pilot scale, massindustrial production 中試，實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn) ? Determine the efficacy by animal feeding trials 動物試驗驗證其效果 National feed engineering technology research center Nankou fermentation base 國家飼料工程技術研究中心南口發(fā)酵實驗基地 農 業(yè) 部 飼 料 工 業(yè) 中 心 M A F I C Enzyme Microb. Tech., P. Deng, Defa Li, 2022 Xylanase 木聚糖酶 ?Aspergillus niger MAFIC005 Xylanase gene ? 克隆黑曲霉 MAFIC005木聚糖酶 xynB基因， GenBank登錄號為 DQ174549 ? 實現(xiàn)了在大腸桿菌和畢赤酵母中的表達 ? 酶學性質表明，與動物胃腸道環(huán)境相適應 ?Aspergillus sulphureus MAFIC001 Xylanase gene ? 克隆硫色曲霉 MAFIC001木聚糖酶 xynA和 xynB基因， GenBank 登錄號分別為 DQ355509和 DQ168666 ? 實現(xiàn)了在大腸桿菌和畢赤酵母中的表達 ? 酶學性質表明，與動物胃腸道環(huán)境相適應 農 業(yè) 部 飼 料 工 業(yè) 中 心 M A F I C + Modified xynA 改造 xynA pGAPZαA 載體 Constitutive expression in Pichia pastoris 畢赤酵母中的組成型表達 Aspergillus sulphureus 硫色曲霉 Thermostability of the modified rebinant xylanase 改造的重組木聚糖酶熱穩(wěn)定性研究 02040608010010 30 50 70 90Time (min)Relative activity (%) ? Enzymatic activity: 120 U/mL 最高酶活力達 120 U/mL ? Protein concentration: mg/mL 蛋白濃度為 mg/mL ? Good stability: 80186。 Primer 2： 539。m/cm2) ΔGZn (ms/cm2) 農 業(yè) 部 飼 料 工 業(yè) 中 心 M A F I C Enzyme preparations 酶制劑 農 業(yè) 部 飼 料 工 業(yè) 中 心 M A F I C Complex enzymemutation and selection 復合酶 —— 誘變選育 ? Aspergillus sulphureusMAFIC001 可高產(chǎn)復合酶的硫色曲霉及其誘變篩育方法和固態(tài)發(fā)酵制備飼用復合酶的應用 ? High yield of plex en